Zastosowanie reakcji duplex real-time PCR do identyfikacji wirusów grypy podtypu A(H1)pdm09 i A(H3)
|
|
- Małgorzata Kozieł
- 8 lat temu
- Przeglądów:
Transkrypt
1 MED. DOŚW. MIKROBIOL., 2012, 64: Zastosowanie reakcji duplex real-time PCR do identyfikacji wirusów grypy podtypu A(H1)pdm09 i A(H3) Development of duplex real-time PCR assay for identification of influenza viruses of subtype A(H1)pdm09 and A(H3) Ilona Stefańska 1, Tomasz Dzieciątkowski 2, Lidia B. Brydak 1,3, Magdalena Romanowska 1 1 Zakład Badania Wirusów Grypy. Krajowy Ośrodek ds. Grypy, Narodowy Instytut Zdrowia Publicznego-Państwowy Zakład Higieny, Warszawa 2 Katedra i Zakład Mikrobiologii Lekarskiej, Warszawski Uniwersytet Medyczny 3 Katedra Mikrobiologii i Immunologii, Wydział Biologii, Uniwersytet Szczeciński Zaprojektowano zestaw starterów i sond oraz zoptymalizowano warunki reakcji real-time PCR w formacie duplex do różnicowania wirusów grypy typu A, obejmujących podtyp A(H1)pdm09 oraz A(H3). Opracowana metoda może być stosowana w wirusologicznym nadzorze nad grypą, a także diagnostyce laboratoryjnej wykonywanej na potrzeby pacjenta. ABSTRACT Introduction: Among different laboratory techniques used in influenza surveillance, methods based on molecular biology, such as real-time PCR, play increasingly important role. They allow detection and identification of viruses currently circulating in human population and responsible for infections and diseases. The aim of the study was to develop duplex real-time PCR assay for detection and differentiation of influenza virus subtype A(H1N1) pdm09 and A(H3N2). Methods: Specific primers targeting a highly conservative region of haemagglutinin gene and a dual-color TaqMan probes, labeled with fluorophore JOE (560 nm) and quencher BHQ-1 or CalFluor Red 610 (610 nm) and BHQ-2 were designed. The specificity of duplex reaction was evaluated using RNA isolated from reference strains of influenza virus A(H1N1)pdm09, A(H3N2), A(H1N1) and A(H5N1), B and other respiratory pathogens. Sensitivity of the assay was tested using serial dilutions of plasmid constructs carrying fragment of specific viral HA gene, in range between 10 and 10 5 copies/sample. A number of 116 clinical samples were 1 Praca naukowa finansowana ze środków na naukę w latach jako projekt badawczy nr N N
2 130 I. Stefańska i inni Nr 2 tested using developed duplex qpcr assay in comparison with the CDC monoplex assay. Results: Positive duplex qpcr results were obtained only in samples containing RNA of influenza viruses of a specific subtype. The limit of detection (LOD) of developed method amounted up to 27 copies/sample for A(H1N1)pdm09 and up to 37 copies/sample for A(H3N2). Conclusions: The results show that developed TaqMan-based duplex qpcr assay is a valuable diagnostic tool in influenza virus surveillance for using in direct study of clinical specimens as well as identification of isolated strains of influenza virus. Scientific study financed by the sources provided for science in years as the scientific project no. N N WSTĘP W nadzorze nad grypą znajdują zastosowanie różne techniki laboratoryjne, umożliwiające wykrywanie i identyfikację wirusów aktualnie krążących w populacji i odpowiedzialnych za wywoływanie zakażeń i zachorowań. W pierwszym etapie korzysta się zazwyczaj z szybkich metod diagnostycznych, umożliwiających uzyskanie wyniku w ciągu tego samego dnia lub kilku dni, co jest istotne ze względu na cotygodniową częstotliwość raportowania danych wymaganą przez Światową Organizację Zdrowia (WHO) oraz Europejskie Centrum ds. Zapobiegania i Kontroli Chorób (ECDC) (5, 17). Znajdują tutaj zastosowanie techniki oparte na amplifikacji kwasów nukleinowych (PCR, real-time PCR), pozwalające na wykrywanie sekwencji swoistych dla danego patogenu oraz techniki immunofluorescencyjne (IF) lub immunoenzymatyczne (ELISA) pozwalające wykrywać swoiste antygeny wirusowe (8, 12, 17). Drugim etapem badań w wirusologicznym nadzorze nad grypą, niejednokrotnie czasochłonnym, ale niezbędnym zwłaszcza z punktu widzenia doboru odpowiednich szczepów do produkcji szczepionki przeciwko grypie, jest izolacja wirusa w hodowli komórkowej lub zarodkach kurzych, a następnie identyfikacja wyizolowanego szczepu wyżej wymienionymi metodami, tj. PCR, real-time PCR, IF lub ELISA oraz charakterystyka izolatu poprzez przeprowadzenie analizy antygenowej i/lub genetycznej. Obecnie, spośród szybkich metod diagnostycznych coraz powszechniej w laboratoriach stosowane są testy PCR oraz real-time PCR (qpcr) (11). Obie powyższe metody mogą być ukierunkowane na wykrycie jednej sekwencji docelowej lub w formacie multiplex na wykrycie wielu sekwencji w jednej reakcji. Realizując cele nadzoru nad grypą oczekuje się, by potwierdzone przypadki zakażeń wywołanych wirusami grypy A były identyfikowane z dokładnością do podtypu (17). Tym samym w każdym przypadku podejrzenia grypy typu A powinno zostać przeprowadzone badanie przynajmniej w kierunku podtypów A(H1) i A(H3), jako najczęściej wywołujących zakażenia u ludzi i niejednokrotnie wspólnie krążących w danym sezonie epidemicznym (15, 18). Przy zastosowaniu do tego celu metody PCR lub qpcr w formacie monoplex, wymagałoby to przeprowadzenia dwóch niezależnych reakcji. Dlatego też celem badań prezentowanych w niniejszym artykule było zaprojektowanie odpowiednich starterów i sond oraz dobór i zoptymalizowanie warunków reakcji w formacie duplex do
3 Nr 2 Real time PCR w identyfikacji wirusów grypy 131 określenia podtypów hemaglutyniny wirusów grypy A, A(H1N1)pdm09 i A(H3N2) obecnie krążących w populacji. MATERIAŁ I METODY Startery i sondy fluorescencyjne typu TaqMan zaprojektowano do konserwatywnych sekwencji kodujących białko hemaglutyniny (HA) wirusa grypy podtypu A(H1N1)pdm09 oraz A(H3N2). Regiony konserwatywne i jednocześnie unikatowe dla danego podtypu ustalono na podstawie porównania sekwencji kilkudziesięciu szczepów dostępnych w bazie GenBank oraz The Influenza Sequence Database. Oligonukleotydy zaprojektowano z wykorzystaniem oprogramowania LightCycler Probe Design 2 (Roche Diagnostics ). Ich swoistość sprawdzono in silico wykorzystując program BLAST, a następnie w standardowym PCR połączonym z elektroforetyczną analizą otrzymanych produktów w 2% żelu agarozowym. Możliwość tworzenia struktur drugorzędowych oraz homo- i hetero-dimerów analizowano programem OligoAnalyzer 3.1. Na podstawie wyników wykonanych analiz dobrano najbardziej optymalny zestaw startery/sonda do wykrywania podtypu A(H1)pdm09 oraz A(H3). Jedną sondę wyznakowano na końcu 5 fluorescencyjnym barwnikiem reporterowym JOE (560 nm), a na końcu 3 wygaszaczem BHQ-1, drugą odpowiednio fluoroforem Cal Fluor Red 610 (610 nm) oraz BHQ-2. W oparciu o zaprojektowane sondy i startery opracowano reakcję duplex two-step qpcr do jednoczesnego wyrywania wirusa grypy podtypu A(H1)pdm09 oraz A(H3). Real-time PCR wykonywano z użyciem aparatu LightCycler 2.0 i zestawu LightCycler TaqMan Master Mix (Roche Diagnostics ). Stężenia starterów i sondy oraz warunki reakcji dupleksowej dobrano eksperymentalnie. Odczyt fluorescencji odbywał się przy długościach fali odpowiednich dla zastosowanych barwników reporterowych (560 nm i 610 nm). Wzrost poziomu fluorescencji był proporcjonalny do ilości produktu w mieszaninie. Swoistość reakcji dupleksowych sprawdzano wykorzystując jako matrycę RNA wyizolowane z różnych szczepów referencyjnych wirusa grypy podtypu A(H1N1)pdm09, A(H3N2), A(H1N1) i A(H5N1), typu B, jak i szczepów referencyjnych innych wirusów oraz bakterii wywołujących zakażenia układu oddechowego, tj. wirusa RS typu A i B (RSV- -A, RSV-B), paragrypy typu 1, 2 i 3 (PIV-1, -2, -3), ludzkiego koronawirusa (hcov) OC43 i NL63, ludzkiego metapneumowirusa (hmpv), ludzkiego adenowirusa typu 4 (hadv-4), ludzkiego rinowirusa (hrv), S. pneumoniae (ATCC 6301), K. pneumoniae (ATCC 4211) oraz H. influenzae (ATCC 9006). Jako kontrolę ujemną reakcji wykorzystano RNA wyizolowane z niezakażonej linii komórkowej MDCK. RNA izolowano z objętości 140 μl zestawem QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen ), zgodnie z instrukcją producenta. Odwrotną transkrypcję przeprowadzano zestawem Transcriptor First Strand cdna Synthesis Kit z losowymi heksamerami (Roche Diagnostics ). Do określenia czułości metody oraz zakresu jej liniowości wykorzystano plazmidy pbluescript z wklonowanym fragmentem cdna (385 nukleotydów) obejmującym region genu HA (Epoch LifeScience ), do którego zaprojektowano uprzednio startery i sondę. Plazmidy namnażano w hodowlach płynnych transformowanych kompetentnych komórek E. coli szczepu DH5α. Do izolacji plazmidowego DNA stosowano zestaw Plasmid Midi AX (A&A Biotechnology ), a stężenie oczyszczonego DNA mierzono spektrofotometrycznie.
4 132 I. Stefańska i inni Nr 2 Rozcieńczenia ciętych restryktazą PdiI (MBI Fermentas ) plazmidów wykonywano w jałowej, wolnej od RN-az i DN-az wodzie w zakresie od 10 0 do 10 5 kopii/próbkę. Granicę wykrywalności metody (LOD) ustalono jako najniższe stężenie cdna, które zostanie wykryte z 95% prawdopodobieństwem przy badaniu co najmniej 24 próbek stanowiących powtórzenia 5-ciu rozcieńczeń DNA plazmidowego w dziesiętnej skali logarytmicznej (1). Materiał kliniczny do badań stanowiło 116 próbek wymazów z nosa i gardła pobranych od chorych w sezonie epidemicznym 2008/2009 (n=27), 2009/2010 (n=55) i 2010/2011 (n=34). We wszystkich próbkach wykrywano równolegle RNA wirusa grypy A(H1N1) pdm09, A(H3N2) i B z wykorzystaniem reakcji monopleksowej one-step qpcr ze starterami i sondą rekomendowanymi przez Center for Disease Control and Prevention (CDC). Do badań w charakterze kontroli ujemnej włączono także 20 próbek płynu pęcherzykowo-oskrzelikowego (BALF), pobranych od pacjentów bez klinicznych i radiologicznych objawów zakażenia dolnych dróg oddechowych. Materiał ten uzyskano podczas diagnostycznej bronchoskopii, do której wskazanie stanowiły nieinfekcyjne choroby płuc lub śródpiersia. WYNIKI I OMÓWIENIE Na genom wirusa grypy składa się osiem odrębnych segmentów jednoniciowego RNA o ujemnej polarności, co pociąga za sobą brak mechanizmów zapewniających korekcję błędów pojawiających się podczas replikacji wirusa oraz stwarza możliwość zajścia reasortacji, tym samym sprzyja ciągłej ewolucji wirusa (16). Najbardziej znaczące zmiany zachodzą w przypadku dwóch genów kodujących glikoproteiny będące głównymi antygenami powierzchniowymi, HA (segment 4) i NA (segment 6). Wysoki współczynnik mutacji oraz ogromna zmienność w obrębie tych genów doprowadziły do wyróżnienia 16 podtypów HA (oznaczonych od H1 do H16) oraz 9 podtypów NA (oznaczonych od N1 do N9) (6). W obrębie poszczególnych podtypów znane są także różne warianty, co dodatkowo utrudnia opracowanie swoistej reakcji ukierunkowanej tylko na jeden określony podtyp wirusa grypy. Startery i sondy wykorzystane w reakcji zaprojektowano do regionów wysoce konserwatywnych w obrębie genu kodującego HA u wirusów podtypu A(H1N1)pdm09 i A(H3N2), jednocześnie swoistych tylko dla wykrywanego podtypu. Swoistość reakcji potwierdzono na każdym z trzech etapów, obejmujących analizę in silico z wykorzystaniem programu BLAST, standardowy PCR z analizą produktów w żelu agarozowym oraz real-time PCR, przy czym obie metody wykonywano z matrycą swoistą (A(H1N1)pdm09/A(H3N2)) i nieswoistą (typ B, podtyp A(H3N2)/A(H1N1)pdm09, A(H1N1), A(H5N1), inne czynniki etologiczne wywołujące zakażenia układu oddechowego podane w materiałach i metodach). Analiza BLAST wykluczyła występowanie sekwencji homologicznych w ludzkim genomie oraz materiale genetycznym wirusów grypy innego typu/podtypów, a w reakcji PCR połączonej z analizą elektroforetyczną nie obserwowano niespecyficznych produktów, co świadczy o wysokiej swoistości zaprojektowanej reakcji. W opracowanej metodzie duplex real-time PCR wynik dodatni, wyrażony wykładniczym przyrostem fluorescencji w mieszaninie reakcyjnej, uzyskano tylko dla próbek zawierających materiał genetyczny wirusa grypy swoistego podtypu. W pozostałych próbkach, zawierających kontrolne cdna z niezakażonej linii MDCK oraz nieswoistą matrycę, nie zaobserwowano wzrostu fluorescencji (Ryc. 1). Po rozdziale elektroforetycznym uzyskanych w reakcji produktów, nie stwierdzono niespecyficznych amplikonów.
5 Nr 2 Real time PCR w identyfikacji wirusów grypy 133 Tabela I. Sekwencje zaprojektowanych starterów i sond do wykrywania wirusa grypy podtypu A(H1) pdm09 i A(H3). Nazwa Sekwencja (5 3 ) Długość Pozycja amplikonu nukleotydowa H1v_F GTATTATCATTTCAGATACACCAGTCC * H1v_R GACATTTTCCAATTGTGATCGG 119 pz * H1v_P JOE-AACACCAGCCTCCCATTTCAGAA-BHQ * H3_F TTGATTAACAGCACAGGGAATCTA ** H3_R TGCATTCAGAATTGCATTTGCC ** 114 pz CalFluor Red H3_P ** 610-AGCTCAATAATGAGATCAGATGCACC- BHQ2 * wg sekwencji szczepu referencyjnego A(H1N1)pdm09 o nr FJ (GenBank) ** wg sekwencji szczepu referencyjnego A(H3N2) o nr GQ (GenBank) Sekwencje starterów i sond zostały przedstawione w tabeli I. Mieszanina reakcyjna po optymalizacji obejmowała: 4µl LC TaqMan MasterMix, 1 µm startera H3_ F i H3_R oraz 1,5 µm startera H1v_ F i H1v_R, po 150 nm każdej z sond, 3-5µl cdna oraz wodę do końcowej objętości 20 µl. Reakcję rozpoczynał pojedynczy etap aktywacji (hot-start) termostabilnej DNA polimerazy przez 10 min. w 95ºC, po którym następowało 40 cykli składających się z denaturacji w 95ºC przez 10 sek., przyłączania starterów w 60ºC przez 20 sek. oraz wydłużania nici w temp. 72ºC przez 5 sek. Real-time PCR kończyło schładzanie próbek do 40ºC przez sek. Odczyt fluorescencji odbywał się na koniec każdego cyklu wydłużania przy długości fali 560 nm i 610 nm, właściwej dla odpowiednio fluoroforu JOE i CalFluor Red 610. Podczas ustalania zakresu liniowości metody stwierdzono, że użyta metoda real-time PCR umożliwiała wykrycie matrycy we wszystkich badanych rozcieńczeniach (Ryc. 2, A i B). Świadczy to o szerokim zakresie liniowości opracowanej reakcji. Przy użyciu opisanego uprzednio algorytmu (Burns i Valdiva, 2008) wyznaczono także granicę wykrywalności metody, która wynosiła 27 kopii/próbkę w przypadku wirusa A(H1N1)pdm09 oraz 37 kopii/ próbkę w przypadku wirusa A(H3N2) (1). W kolejnym etapie badań oceniano wartość kliniczną opracowanej reakcji duplex real- -time PCR. Wzrost poziomu fluorescencji, będący następstwem przyrostu ilości produktu w mieszaninie zaobserwowano w 78 próbkach materiału klinicznego, spośród których 61 było dodatnich dla wirusa A(H1)pdm09, a 17 dla wirusa A(H3). W pozostałych 38 próbkach nie wykazano obecności sekwencji typowych dla wykrywanych podtypów wirusa. Uzyskane wyniki były zgodne z wynikami reakcji z zastosowaniem starterów rekomendowanych przez CDC, które wykazały obecność RNA A(H1N1)pdm09 w 61 próbkach i A(H3N2) w 17 próbkach. Spośród 38 próbek ujemnych w reakcji duplex real-time PCR, w 19 próbkach przebadanych metodą wg CDC wykryto wirusa typu B (w tym w jednej próbce wykryto także wirusa A(H1N1)pdm09), a w 20 nie stwierdzono badanych wirusów grypy. W żadnej z 20 próbek BALF pochodzących od pacjentów bez objawów zakażenia dolnych dróg oddechowych nie stwierdzono wzrostu fluorescencji. Duża zmienność wirusów grypy, zwłaszcza wirusa grypy A, w tym pojawianie się nowych wariantów, jak A(H1N1)pdm09 w 2009 r., sprawia, że opracowywanie nowych reakcji PCR z nowymi zestawami starterów i sond pozostaje stale aktualną potrzebą. Spośród wielu
6 134 I. Stefańska i inni Nr 2 Ryc. 1. Wynik reakcji qpcr w kierunku wykrywania i różnicowania wirusa grypy A(H1)pdm09 oraz A(H3). Krzywe widoczne na wykresach oznaczają amplifikację cdna szczepów wzorcowych wirusa grypy A(H1)pdm09 (A) oraz A(H3) (B). * H1v oznacza A(H1)pdm09 publikacji na ten temat, opisujących reakcje real-time PCR w formatach multiplex, nieliczne są jednak doniesienia obejmujące jednoczesne podtypowanie w jednej reakcji ostatnio krążących szczepów wirusa grypy A, tj. A(H1N1)pdm09 i A(H3N2) (2, 10). Więcej prac skupia się natomiast na rozróżnianiu jedynie typów wirusa A i B, ewentualnie włącza do tego schematu reakcji wykrywanie wyłącznie jednego podtypu wirusa, zwykle A(H5N1) lub
7 Nr 2 Real time PCR w identyfikacji wirusów grypy 135 2A 2B Ryc. 2. Wyniki reakcji qpcr oceniających zakres liniowości opracowanej metody do wykrywania i różnicowania wirusa grypy A(H1)pdm09 (Ryc. 2A) oraz A(H3) (Ryc. 2B). * H1v oznacza A(H1)pdm09; K kontrolę ujemną
8 136 I. Stefańska i inni Nr 2 A(H1N1)pdm09 lub też całkowicie ogranicza się do wykrywania jednego podtypu (3, 4, 7, 9, 13, 14). Niniejsza praca przedstawia natomiast warunki przeprowadzenia reakcji duplex real-time PCR z użyciem zaprojektowanego zestawu starterów i sond do wykrywania i różnicowania zakażeń wywołanych przez wirusy grypy podtypu A(H1N1)pdm09 i A(H3N2). Rezultaty, dotyczące swoistości reakcji i jej czułości z użyciem matrycy pochodzącej ze szczepów referencyjnych, jak i próbek klinicznych wskazują na możliwość zastosowania opracowanej przez autorów metody do badań prowadzonych w ramach nadzoru nad grypą, przy czym może ona mieć zastosowanie zarówno do bezpośredniego badania próbek klinicznych, jak i do wstępnej identyfikacji izolowanych szczepów wirusa grypy. Podziękowania Autorzy składają podziękowania st. tech. Pani Urszuli Dorocie Ostapiuk z Zakładu Badania Wirusów Grypy. Krajowego Ośrodka ds. Grypy w NIZP-PZH za przygotowanie szczepów referencyjnych wirusa grypy wykorzystywanych przy opracowywaniu i optymalizacji reakcji real-time PCR. PIŚMIENNICTWO 1. Burns M, Valdiva. Modelling the limit of detection in real-time quantitative PCR. Eur Food Res Technol; 2008; 226: Chen Y, Cui D, Zheng S i inni. Simultaneous detection of influenza A, influenza B, and respiratory syncytial viruses and subtyping of influenza A H3N2 virus and H1N1 (2009) virus by multiplex real-time PCR. J Clin Microbiol; 2011; 49: Chidlow G, Harnett G, Williams S i inni. Duplex real-time reverse transcriptase PCR assays for rapid detection and identification of pandemic (H1N1) 2009 and seasonal influenza A/H1, A/H3, and B viruses. J Clin Microbiol; 2010; 48: Ellis JS, Curran MD. Simultaneous molecular detection and confirmation of influenza AH5, with internal control. Methods Mol Biol; 2011; 665: European Centre for Disease Prevention and Control. Influenza surveillance in Europe Stockholm: ECDC; December 2011, Fereidouni SR, Beer M, Vahlenkamp T i inni. Differentiation of two distinct clusters among currently circulating influenza A(H1N1)v viruses, March-September Euro Surveill 2009; 14(46), 19 November 2009, Huber I, Campe H, Sebah D i inni. A multiplex one-step real-time RT-PCR assay for influenza surveillance. Euro Surveill 2011; 16(7), 17 February 2011, Manuguerra J-C, Hannoun C: Influenza and other viral respiratory diseases. Surveillance and laboratory diagnosis. Institut Pasteur. Paris Ng EK, Cheng PK, Ng AY i inni. Influenza A H5N1 detection. Emerg Infect Dis; 2005;11: Qin M, Wang DY, Huang F i inni: Development of single-tube multiplex real-time PCR for simultaneous detection of novel influenza A H1N1 and human seasonal influenza A H1N1 and H3N2 virus. Bing Du Xue Bao; 2010; 26: Romanowska M, Stefańska I, Donevski S i inni. Infections with A(H1)2009 influenza virus in Poland during the last pandemic the experiences of the National Influenza Center. Adv Exp Med Biol 2012; (w druku). 12. Stefańska I, Romanowska M, Brydak LB. Metody wykrywania wybranych wirusów wywołujących zakażenia układu oddechowego. Postępy Hig Med Dośw 2012; (w druku).
9 Nr 2 Real time PCR w identyfikacji wirusów grypy Templeton KE, Scheltinga SA, Beersma MFC i inni. Rapid and sensitive method using multiplex real-time PCR for diagnosis of infections by influenza A and influenza B viruses, Respiratory Syncytial Virus, and Parainfluenza Viruses 1, 2, 3, and 4. J Clin Microbiol; 2004; 42: van Elden LJ, Nijhuis M, Schipper P i inni. Simultaneous detection of influenza viruses A and B using real-time quantitative PCR. J Clin Microbiol; 2001; 39: Webster RG: Influenza: an emerging microbial pathogen. W: Emerging Infections. Red. Academic Press, 1998, Webster RG, Bean WJ, Gorman OT i inni. Evolution and ecology of influenza A viruses. Microbiol Rev; 1992; 56: World Health Organization: Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. 2011, 1-140, World Health Organization. Review of the winter influenza season, northern hemisphere. Weekly Epid Rec 2011; 22(86): , Otrzymano: 6 III 2012 r Adres Autora: Warszwa, ul. Chocimska 24, Zakład Badania Wirusów Grypy. Krajowy Ośrodek ds. Grypy, Narodowy Instytut Zdrowia Publicznego-Państwowy Zakład Higieny i.stefanska@gmail.com
10
"Diagnostyka szczepów wirusa grypy przy użyciu nowych metod molekularnych." Streszczenie
"Diagnostyka szczepów wirusa grypy przy użyciu nowych metod molekularnych." Streszczenie Szacuje się, że każdego roku, sezonowe epidemie wirusa grypy są przyczyną od 2 do 5 milionów zachorowań oraz od
Bardziej szczegółowoWIRUSY DRÓG ODDECHOWYCH TEST MULTIPLEX REAL-TIME PCR
WIRUSY DRÓG ODDECHOWYCH TEST MULTIPLEX REAL-TIME PCR 9 patogenów dróg oddechowych V1.01 Test Magicplex RV Panel Real-time wykrywa jednocześnie 9 wirusów dróg oddechowych w reakcji Real-time PCR. Pozwala
Bardziej szczegółowoEpidemiologia weterynaryjna
Jarosław Kaba Epidemiologia weterynaryjna Testy diagnostyczne I i II i III Zadania 04, 05, 06 Warszawa 2009 Testy diagnostyczne Wzory Parametry testów diagnostycznych Rzeczywisty stan zdrowia chore zdrowe
Bardziej szczegółowoDETEKCJA PATOGENÓW DRÓG ODDECHOWYCH
DETEKCJA PATOGENÓW DRÓG ODDECHOWYCH Subtypowanie wirusa grypy typu A/B Wykrywanie wirusów dróg oddechowych Wykrywanie bakterii zapalenia płuc Detekcja patogenów dróg oddechowych Złożona detekcja Jednoczesna
Bardziej szczegółowoZałącznik nr 1 do instrukcji I-01/PO-21/LEI/D
Załącznik nr 1 do instrukcji I-01/PO-21/LEI/D Zalecenia dotyczące pobierania, przechowywania i transportu materiałów klinicznych przeznaczonych do badań diagnostycznych w Pracowni Diagnostycznej Laboratorium
Bardziej szczegółowoPakiet 3 Zestawy do izolacji, detekcji i amplifikacji badań grypy i Borrelia met. real time PCR część 67
Pakiet 3 Zestawy do izolacji, detekcji i amplifikacji badań grypy i Borrelia met. real time część 7 L.p. Przedmiot zamówienia Wymagania jakościowe Producent i nr katalogowy dla produktu równowaŝnego Ilość
Bardziej szczegółowoWZÓR SKARGI EUROPEJSKI TRYBUNAŁ PRAW CZŁOWIEKA. Rada Europy. Strasburg, Francja SKARGA. na podstawie Artykułu 34 Europejskiej Konwencji Praw Człowieka
WZÓR SKARGI EUROPEJSKI TRYBUNAŁ PRAW CZŁOWIEKA Rada Europy Strasburg, Francja SKARGA na podstawie Artykułu 34 Europejskiej Konwencji Praw Człowieka oraz Artykułu 45-47 Regulaminu Trybunału 1 Adres pocztowy
Bardziej szczegółowoProcedura weryfikacji badania czasu przebiegu 1 paczek pocztowych
Procedura weryfikacji badania czasu przebiegu 1 paczek pocztowych Warszawa 2012 (nowelizacja 2014) 1 zmiana nazwy zgodnie z terminologią zawartą w ustawie Prawo pocztowe Jednostka zlecająca: Urząd Komunikacji
Bardziej szczegółowoREGULAMIN przeprowadzania okresowych ocen pracowniczych w Urzędzie Miasta Mława ROZDZIAŁ I
Załącznik Nr 1 do zarządzenia Nr169/2011 Burmistrza Miasta Mława z dnia 2 listopada 2011 r. REGULAMIN przeprowadzania okresowych ocen pracowniczych w Urzędzie Miasta Mława Ilekroć w niniejszym regulaminie
Bardziej szczegółowoUSTAWA. z dnia 26 czerwca 1974 r. Kodeks pracy. 1) (tekst jednolity)
Dz.U.98.21.94 1998.09.01 zm. Dz.U.98.113.717 art. 5 1999.01.01 zm. Dz.U.98.106.668 art. 31 2000.01.01 zm. Dz.U.99.99.1152 art. 1 2000.04.06 zm. Dz.U.00.19.239 art. 2 2001.01.01 zm. Dz.U.00.43.489 art.
Bardziej szczegółowoBazy danych. Andrzej Łachwa, UJ, 2013 andrzej.lachwa@uj.edu.pl www.uj.edu.pl/web/zpgk/materialy 9/15
Bazy danych Andrzej Łachwa, UJ, 2013 andrzej.lachwa@uj.edu.pl www.uj.edu.pl/web/zpgk/materialy 9/15 Przechowywanie danych Wykorzystanie systemu plików, dostępu do plików za pośrednictwem systemu operacyjnego
Bardziej szczegółowoWykorzystanie techniki FilmArray w diagnostyce zakażeń dróg oddechowych u osób z niedoborami odporności
MED. DOŚW. MIKROBIOL., 2013, 65: 181-185 Wykorzystanie techniki FilmArray w diagnostyce zakażeń dróg oddechowych u osób z niedoborami odporności Application of FilmArray assay for detection of respiratory
Bardziej szczegółowoPolska-Warszawa: Usługi w zakresie napraw i konserwacji taboru kolejowego 2015/S 061-107085
1/6 Niniejsze ogłoszenie w witrynie TED: http://ted.europa.eu/udl?uri=ted:notice:107085-2015:text:pl:html Polska-Warszawa: Usługi w zakresie napraw i konserwacji taboru kolejowego 2015/S 061-107085 Przewozy
Bardziej szczegółowoTEST dla stanowisk robotniczych sprawdzający wiedzę z zakresu bhp
TEST dla stanowisk robotniczych sprawdzający wiedzę z zakresu bhp 1. Informacja o pracownikach wyznaczonych do udzielania pierwszej pomocy oraz o pracownikach wyznaczonych do wykonywania działań w zakresie
Bardziej szczegółowoZałącznik do zarządzenia Rektora Krakowskiej Akademii im. Andrzeja Frycza Modrzewskiego Nr 8/2013 z 4 marca 2013 r.
Załącznik do zarządzenia Rektora Krakowskiej Akademii im. Andrzeja Frycza Modrzewskiego Nr 8/2013 z 4 marca 2013 r. Zasady i tryb przyznawania oraz wypłacania stypendiów za wyniki w nauce ze Studenckiego
Bardziej szczegółowoDE-WZP.261.11.2015.JJ.3 Warszawa, 2015-06-15
DE-WZP.261.11.2015.JJ.3 Warszawa, 2015-06-15 Wykonawcy ubiegający się o udzielenie zamówienia Dotyczy: postępowania prowadzonego w trybie przetargu nieograniczonego na Usługę druku książek, nr postępowania
Bardziej szczegółowoHarmonogramowanie projektów Zarządzanie czasem
Harmonogramowanie projektów Zarządzanie czasem Zarządzanie czasem TOMASZ ŁUKASZEWSKI INSTYTUT INFORMATYKI W ZARZĄDZANIU Zarządzanie czasem w projekcie /49 Czas w zarządzaniu projektami 1. Pojęcie zarządzania
Bardziej szczegółowoEKONOMETRIA dr inż.. ALEKSANDRA ŁUCZAK Uniwersytet Przyrodniczy w Poznaniu Katedra Finansów w i Rachunkowości ci Zakład Metod Ilościowych Collegium Maximum,, pokój j 617 Tel. (61) 8466091 luczak@up.poznan.pl
Bardziej szczegółowoREGULAMIN UCZESTNICTWA W ZADANIU STAŻE ZAWODOWE DLA UCZNIÓW "
REGULAMIN UCZESTNICTWA W ZADANIU STAŻE ZAWODOWE DLA UCZNIÓW " 1 Zadanie adresowane jest do uczniów wyrażających chęć nabywania i poszerzania swoich umiejętności zawodowych uczących się w technikum lub
Bardziej szczegółowoStatystyka matematyczna 2015/2016
Statystyka matematyczna 2015/2016 nazwa przedmiotu SYLABUS B. Informacje szczegółowe Elementy składowe Opis sylabusu Nazwa przedmiotu Statystyka matematyczna Kod przedmiotu 0600-FS2-2SM Nazwa jednostki
Bardziej szczegółowoOpracowała: Karolina Król-Komarnicka, kierownik działu kadr i płac w państwowej instytucji
OPUBLIKOWANO: 1 SIERPNIA 2013 ZAKTUALIZOWANO: 12 KWIETNIA 2016 Urlop rodzicielski aktualizacja Opracowała: Karolina Król-Komarnicka, kierownik działu kadr i płac w państwowej instytucji Ustawa z dnia 26
Bardziej szczegółowoW nawiązaniu do korespondencji z lat ubiegłych, dotyczącej stworzenia szerszych
W nawiązaniu do korespondencji z lat ubiegłych, dotyczącej stworzenia szerszych mechanizmów korzystania z mediacji, mając na uwadze treść projektu ustawy o mediatorach i zasadach prowadzenia mediacji w
Bardziej szczegółowoSytuacja epidemiczna grypy w województwie śląskim
Sytuacja epidemiczna grypy w województwie śląskim Grypa to bardzo zakaźna choroba, która występuje na całym świecie i powoduje okresowe epidemie i pandemie. W Europie zwiększoną liczbę zachorowań obserwuje
Bardziej szczegółowoZadanie 1. Liczba szkód w każdym z trzech kolejnych lat dla pewnego ubezpieczonego ma rozkład równomierny:
Matematyka ubezpieczeń majątkowych 5.2.2008 r. Zadanie. Liczba szkód w każdym z trzech kolejnych lat dla pewnego ubezpieczonego ma rozkład równomierny: Pr ( N = k) = 0 dla k = 0,, K, 9. Liczby szkód w
Bardziej szczegółowoRegulamin oferty specjalnej - Bonus za dopłaty
Regulamin oferty specjalnej - Bonus za dopłaty 1 Użyte w Regulaminie określenia oznaczają: 1. Bank ING Bank Śląski S.A. z siedzibą w Katowicach, przy ul. Sokolskiej 34; wpisany do Rejestru Przedsiębiorców
Bardziej szczegółowoUMOWA Dostawa i wdrożenie programu egzekucyjnego na potrzeby Urzędu Miasta Stalowa Wola
UMOWA zawarta dnia.2013 r. w Stalowej Woli pomiędzy: Gminą Stalowa Wola (37-450 Stalowa Wola, ul. Wolności 7), NIP: 865 239 87 25, REGON: 830409086 reprezentowaną przez: Pana Andrzeja Szlęzaka - Prezydenta
Bardziej szczegółowoBadania skuteczności działania filtrów piaskowych o przepływie pionowym z dodatkiem węgla aktywowanego w przydomowych oczyszczalniach ścieków
Uniwersytet Rolniczy im. Hugona Kołł łłątaja w Krakowie, Wydział Inżynierii Środowiska i Geodezji Katedra Inżynierii Sanitarnej i Gospodarki Wodnej K r z y s z t o f C h m i e l o w s k i Badania skuteczności
Bardziej szczegółowoZAMAWIAJĄCY. Regionalna Organizacja Turystyczna Województwa Świętokrzyskiego SPECYFIKACJA ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA (DALEJ SIWZ )
ZAMAWIAJĄCY Regionalna Organizacja Turystyczna Województwa Świętokrzyskiego SPECYFIKACJA ISTOTNYCH WARUNKÓW ZAMÓWIENIA (DALEJ SIWZ ) Świadczenie kompleksowych usług konferencyjnych i towarzyszących na
Bardziej szczegółowoWarunki Oferty PrOmOcyjnej usługi z ulgą
Warunki Oferty PrOmOcyjnej usługi z ulgą 1. 1. Opis Oferty 1.1. Oferta Usługi z ulgą (dalej Oferta ), dostępna będzie w okresie od 16.12.2015 r. do odwołania, jednak nie dłużej niż do dnia 31.03.2016 r.
Bardziej szczegółowoINSTRUKCJA OBSŁUGI URZĄDZENIA: 0101872HC8201
INSTRUKCJA OBSŁUGI URZĄDZENIA: PZ-41SLB-E PL 0101872HC8201 2 Dziękujemy za zakup urządzeń Lossnay. Aby uŝytkowanie systemu Lossnay było prawidłowe i bezpieczne, przed pierwszym uŝyciem przeczytaj niniejszą
Bardziej szczegółowowzór Załącznik nr 5 do SIWZ UMOWA Nr /
wzór Załącznik nr 5 do SIWZ UMOWA Nr / zawarta w dniu. w Szczecinie pomiędzy: Wojewodą Zachodniopomorskim z siedzibą w Szczecinie, Wały Chrobrego 4, zwanym dalej "Zamawiającym" a nr NIP..., nr KRS...,
Bardziej szczegółowoDECYZJA w sprawie czasowego zaprzestania działalności
WOJEWODA ŁÓDZKI ZK-III.9611.14.2014 Łódź, dnia 01 lipca 2014 r. DECYZJA w sprawie czasowego zaprzestania działalności Na podstawie art. 34 ustawy z dnia 15 kwietnia 2011 r. o działalności leczniczej (Dz.
Bardziej szczegółowoInformacja o wyniku kontroli doraźnej w zakresie legalności wyboru trybu zamówienia z wolnej ręki
Warszawa, 2015 r. UZP/DKD/WKZ/421/38( KNZ/18/15 )/15/GK Informacja o wyniku kontroli doraźnej w zakresie legalności wyboru trybu zamówienia z wolnej ręki Określenie postępowania o udzielenie zamówienia
Bardziej szczegółowoRozdział 1 Postanowienia ogólne
Załącznik do zarządzenia Rektora nr 59 z dnia 20 lipca 2015 r. REGULAMIN PRZYZNAWANIA ZWIĘKSZENIA STYPENDIUM DOKTORANCKIEGO Z DOTACJI PROJAKOŚCIOWEJ ORAZ ZASADY PRZYZNAWANIA STYPENDIUM DOKTORANCKIEGO W
Bardziej szczegółowoKLAUZULE ARBITRAŻOWE
KLAUZULE ARBITRAŻOWE KLAUZULE arbitrażowe ICC Zalecane jest, aby strony chcące w swych kontraktach zawrzeć odniesienie do arbitrażu ICC, skorzystały ze standardowych klauzul, wskazanych poniżej. Standardowa
Bardziej szczegółowoDokumentacja obejmuje następujące części:
Załącznik nr 6 WYMAGANIA, JAKIM POWINNA ODPOWIADAĆ DOKUMENTACJA NIEZBĘDNA DO OCENY SUBSTANCJI CZYNNEJ JAKĄ SĄ MIKROORGANIZMY, W TYM TAKŻE WIRUSY I GRZYBY, ZAWARTE W PRODUKCIE BIOBÓJCZYM Wymagania ogólne.
Bardziej szczegółowoREGULAMIN REKRUTACJI
REGULAMIN REKRUTACJI W PUBLICZNEJ SZKOLE POLICEALNEJ DLA MŁODZIEŻY I DOROSŁYCH Postawa prawna: Ustawa z dnia 6 grudnia 2013 r. o zmianie ustawy o systemie oświaty oraz niektórych innych ustaw, art. 20
Bardziej szczegółowoSZKOLENIE PRACOWNIKÓW NARAśONYCH NA SZKODLIWE CZYNNIKI CHEMICZNE. Szkolenia bhp w firmie szkolenie pracowników naraŝonych na czynniki szkodliwe 27
SZKOLENIE PRACOWNIKÓW NARAśONYCH NA SZKODLIWE CZYNNIKI CHEMICZNE Szkolenia bhp w firmie szkolenie pracowników naraŝonych na czynniki szkodliwe 27 Informowanie pracowników Pracodawca ma obowiązek poinformowania
Bardziej szczegółowoZAPYTANIE OFERTOWE. Nazwa zamówienia: Wykonanie usług geodezyjnych podziały nieruchomości
Znak sprawy: GP. 271.3.2014.AK ZAPYTANIE OFERTOWE Nazwa zamówienia: Wykonanie usług geodezyjnych podziały nieruchomości 1. ZAMAWIAJĄCY Zamawiający: Gmina Lubicz Adres: ul. Toruńska 21, 87-162 Lubicz telefon:
Bardziej szczegółowoZARZĄDZENIE NR 4/FK/13 BURMISTRZA MIASTA CHEŁMśY z dnia 24 stycznia 2013 r.
ZARZĄDZENIE NR 4/FK/13 BURMISTRZA MIASTA CHEŁMśY z dnia 24 stycznia 2013 r. w sprawie wprowadzenia instrukcji sporządzenia skonsolidowanego bilansu gminy miasta ChełmŜy. Na podstawie art. 33 ust. 3 ustawy
Bardziej szczegółowoSPECYFIKACJE TECHNICZNE
SPECYFIKACJE TECHNICZNE WYRÓWNANIE POŁACI DACHU ORAZ WYMIANA POKRYCIA DACOWEGO Z ETERNITU NA BLACHĘ TRAPEZOWĄ SZCZEGÓŁOWE SPECYFIKACJE TECHNICZNE (SST) WYKONANIA I ODBORU ROBÓT BUDOWLANYCH 1. WSTĘP 1.1.
Bardziej szczegółowoREGULAMIN KONKURSU 1 Postanowienia ogólne : www.gminastezyca.pl 2 Cel Konkursu 3 Założenia ogólne
REGULAMIN KONKURSU 1 Postanowienia ogólne 1. Organizatorem Konkursu jest Wójt Gminy Stężyca zwany dalej Organizatorem. 2. Regulamin Konkursu jest dostępny w siedzibie organizatora - na tablicy ogłoszeń
Bardziej szczegółowoAneks nr 8 z dnia 24.07.2013 r. do Regulaminu Świadczenia Krajowych Usług Przewozu Drogowego Przesyłek Towarowych przez Raben Polska sp. z o.o.
Aneks nr 8 z dnia 24.07.2013 r. do Regulaminu Świadczenia Krajowych Usług Przewozu Drogowego Przesyłek Towarowych przez Raben Polska sp. z o.o. 1 Z dniem 24 lipca 2013 r. wprowadza się w Regulaminie Świadczenia
Bardziej szczegółowoZarządzenie Nr 325/09 Burmistrza Miasta Bielsk Podlaski z dnia 29 czerwca 2009 r.
Zarządzenie Nr 325/09 Burmistrza Miasta Bielsk Podlaski z dnia 29 czerwca 2009 r. w sprawie wprowadzenia w Urzędzie Miasta Bielsk Podlaski regulaminu okresowej oceny pracowników Na podstawie art. 28 ustawy
Bardziej szczegółowoWprowadzam : REGULAMIN REKRUTACJI DZIECI DO PRZEDSZKOLA NR 14
ZARZĄDZENIE Nr 2/2016 z dnia 16 lutego 2016r DYREKTORA PRZEDSZKOLA Nr 14 W K O N I N I E W sprawie wprowadzenia REGULAMINU REKRUTACJI DZIECI DO PRZEDSZKOLA NR 14 IM KRASNALA HAŁABAŁY W KONINIE Podstawa
Bardziej szczegółowoZintegrowane Systemy Zarządzania Biblioteką SOWA1 i SOWA2 SKONTRUM
Zintegrowane Systemy Zarządzania Biblioteką SOWA1 i SOWA2 SKONTRUM PROGRAM INWENTARYZACJI Poznań 2011 Spis treści 1. WSTĘP...4 2. SPIS INWENTARZA (EWIDENCJA)...5 3. STAŁE UBYTKI...7 4. INTERPRETACJA ZAŁĄCZNIKÓW
Bardziej szczegółowoREGULAMIN PRZEPROWADZANIA OCEN OKRESOWYCH PRACOWNIKÓW NIEBĘDĄCYCH NAUCZYCIELAMI AKADEMICKIMI SZKOŁY GŁÓWNEJ HANDLOWEJ W WARSZAWIE
Załącznik do zarządzenia Rektora nr 36 z dnia 28 czerwca 2013 r. REGULAMIN PRZEPROWADZANIA OCEN OKRESOWYCH PRACOWNIKÓW NIEBĘDĄCYCH NAUCZYCIELAMI AKADEMICKIMI SZKOŁY GŁÓWNEJ HANDLOWEJ W WARSZAWIE 1 Zasady
Bardziej szczegółowoZasady rekrutacji do Publicznego Gimnazjum nr 1 im. Józefa Piłsudskiego w Brzegu zasady, tryb, postępowanie, dokumentacja rok szkolny 2016/2017
Zasady rekrutacji do Publicznego Gimnazjum nr 1 im. Józefa Piłsudskiego w Brzegu zasady, tryb, postępowanie, dokumentacja rok szkolny 2016/2017 Podstawy prawne: 1. Rozdział 2 a ustawy z dnia 6 grudnia
Bardziej szczegółowoOdpowiedzi na pytania zadane do zapytania ofertowego nr EFS/2012/05/01
Odpowiedzi na pytania zadane do zapytania ofertowego nr EFS/2012/05/01 1 Pytanie nr 1: Czy oferta powinna zawierać informację o ewentualnych podwykonawcach usług czy też obowiązek uzyskania od Państwa
Bardziej szczegółowo3 4 5 Zasady udzielania urlopów 6 7 8
Zarządzenie nr 143 z dnia 27 listopada 2012 Dyrektora Centrum Medycznego Kształcenia Podyplomowego w sprawie zasad wykorzystania urlopów wypoczynkowych przez nauczycieli akademickich Na podstawie 27 ust
Bardziej szczegółowoZałącznik nr 7 do Umowy Nr...2013 z dnia...06.2013 r. Oświadczenie Podwykonawcy (WZÓR) W związku z wystawieniem przez Wykonawcę: faktury nr z dnia..
Załącznik nr 7 do Umowy Nr...2013 z dnia...06.2013 r. Oświadczenie Podwykonawcy (WZÓR) W związku z wystawieniem przez Wykonawcę: faktury nr z dnia.. wskazuję, iż w ramach robót objętych fakturą wykonywałem,
Bardziej szczegółowoUstawienie wózka w pojeździe komunikacji miejskiej - badania. Prawidłowe ustawienie
Ustawienie wózka w pojeździe komunikacji miejskiej - badania Przodem do kierunku jazdy? Bokiem? Tyłem? Jak ustawić wózek, aby w razie awaryjnego hamowania dziecko było jak najbardziej bezpieczne? Na te
Bardziej szczegółowoKrótkoterminowe planowanie finansowe na przykładzie przedsiębiorstw z branży 42
Krótkoterminowe planowanie finansowe na przykładzie przedsiębiorstw z branży 42 Anna Salata 0 1. Zaproponowanie strategii zarządzania środkami pieniężnymi. Celem zarządzania środkami pieniężnymi jest wyznaczenie
Bardziej szczegółowoPOWIATOWY URZĄD PRACY W LIDZBARKU WARMIŃSKIM
I. Informacja o naborze wniosków INFROMACJA DLA PRACODAWCÓW!!! W związku z realizacją projektu systemowego Aktywność drogą do sukcesu w ramach Programu Operacyjnego Kapitał Ludzki Poddziałanie 6.1.3 współfinansowanego
Bardziej szczegółowoWarszawa, dnia 6 listopada 2015 r. Poz. 1821 ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ROLNICTWA I ROZWOJU WSI 1) z dnia 23 października 2015 r.
DZIENNIK USTAW RZECZYPOSPOLITEJ POLSKIEJ Warszawa, dnia 6 listopada 2015 r. Poz. 1821 ROZPORZĄDZENIE MINISTRA ROLNICTWA I ROZWOJU WSI 1) z dnia 23 października 2015 r. w sprawie szczegółowych warunków
Bardziej szczegółowoProcedura uzyskiwania awansu zawodowego na stopień nauczyciela mianowanego przez nauczycieli szkół i placówek
Data publikacji : 10.01.2011 Procedura uzyskiwania awansu zawodowego na stopień nauczyciela mianowanego przez nauczycieli szkół i placówek Procedura uzyskiwania awansu zawodowego na stopień nauczyciela
Bardziej szczegółowoStowarzyszenie Lokalna Grupa Działania EUROGALICJA Regulamin Rady
Stowarzyszenie Lokalna Grupa Działania EUROGALICJA Regulamin Rady Rozdział I Postanowienia ogólne 1 1. Rada Stowarzyszenia Lokalna Grupa Działania Eurogalicja, zwana dalej Radą, działa na podstawie: Ustawy
Bardziej szczegółowoPS-III.9612.22.2014.AM PROTOKÓŁ KONTROLI PLANOWEJ podmiotu leczniczego z dnia 26 lutego 2014 r.
PS-III.9612.22.2014.AM PROTOKÓŁ KONTROLI PLANOWEJ podmiotu leczniczego z dnia 26 lutego 2014 r. I. IMIĘ I NAZWISKO ORAZ ADRES MIEJSCA ZAMIESZKANIA ALBO FIRMĘ ALBO NAZWĘ ORAZ ADRES SIEDZIBY: Anna Jabłońska,
Bardziej szczegółowoInstrukcja sporządzania skonsolidowanego bilansu Miasta Konina
Załącznik Nr 1 Do zarządzenia Nr 92/2012 Prezydenta Miasta Konina z dnia 18.10.2012 r. Instrukcja sporządzania skonsolidowanego bilansu Miasta Konina Jednostką dominującą jest Miasto Konin (Gmina Miejska
Bardziej szczegółowoSZCZEGÓŁOWY OPIS PRZEDMIOTU ZAMÓWIENIA
Projekt Stała Praca Priorytet VII Promocja integracji społecznej Działanie 7.2 Przeciwdziałanie wykluczeniu i wzmocnienie sektora ekonomii społecznej Poddziałanie 7.2.1 Aktywizacja zawodowa i społeczna
Bardziej szczegółowoREGULAMIN dokonywania okresowych ocen kwalifikacyjnych pracowników samorządowych zatrudnionych w Miejskim Przedszkolu Nr 5 w Ciechanowie.
REGULAMIN dokonywania okresowych ocen kwalifikacyjnych pracowników samorządowych zatrudnionych w Miejskim Przedszkolu Nr 5 w Ciechanowie. 1 1. Okresowym ocenom kwalifikacyjnym podlegają pracownicy zatrudnieni
Bardziej szczegółowoSPRAWOZDANIE Z REALIZACJI XXXII BADAŃ BIEGŁOŚCI I BADAŃ PORÓWNAWCZYCH HAŁASU W ŚRODOWISKU Warszawa 17 18 kwiecień 2012r.
SPRAWOZDANIE Z REALIZACJI XXXII BADAŃ BIEGŁOŚCI I BADAŃ PORÓWNAWCZYCH HAŁASU W ŚRODOWISKU Warszawa 17 18 kwiecień 2012r. 1. CEL I ZAKRES BADAŃ Organizatorem badań biegłości i badań porównawczych przeprowadzonych
Bardziej szczegółowoVLAN Ethernet. być konfigurowane w dowolnym systemie operacyjnym do ćwiczenia nr 6. Od ćwiczenia 7 należy pracować ć w systemie Linux.
VLAN Ethernet Wstęp Ćwiczenie ilustruje w kolejnych krokach coraz bardziej złożone one struktury realizowane z użyciem wirtualnych sieci lokalnych. Urządzeniami, które będą realizowały wirtualne sieci
Bardziej szczegółowo1.2. Konkurs odbywa się zgodnie z zasadami określonymi w niniejszym regulaminie, zwanym dalej "Regulaminem" oraz przepisami prawa polskiego.
Regulamin konkursu "Bosman związany z regionem" - konkurs plastyczny 1. Postanowienia ogólne 1.1. Organizatorem konkursu pod nazwą " Bosman związany z regionem", zwanego dalej "konkursem", jest Carlsberg
Bardziej szczegółowoRegulamin reklamy produktów leczniczych na terenie Samodzielnego Publicznego Zakładu Opieki Zdrowotnej Ministerstwa Spraw Wewnętrznych w Białymstoku
Regulamin reklamy produktów leczniczych na terenie Samodzielnego Publicznego Zakładu Opieki Zdrowotnej Ministerstwa Spraw Wewnętrznych w Białymstoku 1 1. Niniejszy Regulamin określa zasady prowadzenia
Bardziej szczegółowoZałącznik nr 4 PREK 251/III/2010. Umowa Nr (wzór)
Załącznik nr 4 PREK 251/III/2010 Umowa Nr (wzór) Zawarta w dniu roku w Krakowie pomiędzy : Przewozy Regionalne sp. z o.o. z siedzibą w Warszawie, ul. Wileńska 14a, zarejestrowaną w Krajowym Rejestrze Sądowym
Bardziej szczegółowoSieć komputerowa grupa komputerów lub innych urządzeo połączonych ze sobą w celu wymiany danych lub współdzielenia różnych zasobów, na przykład:
Sieci komputerowe Sieć komputerowa grupa komputerów lub innych urządzeo połączonych ze sobą w celu wymiany danych lub współdzielenia różnych zasobów, na przykład: korzystania ze wspólnych urządzeo, np.
Bardziej szczegółowoUCHWALA NR XXXIXI210/13 RADY MIASTA LUBARTÓW. z dnia 25 września 2013 r.
UCHWALA NR XXXIXI210/13 RADY MIASTA LUBARTÓW z dnia 25 września 2013 r. w sprawie zasad wynajmowania lokali wchodzących w skład mieszkaniowego zasobu Gminy Miasto Lubartów Na podstawie art. 18 ust. 2 pkt
Bardziej szczegółowoUmowa o pracę zawarta na czas nieokreślony
Umowa o pracę zawarta na czas nieokreślony Uwagi ogólne Definicja umowy Umowa o pracę stanowi dokument stwierdzający zatrudnienie w ramach stosunku pracy. Według ustawowej definicji jest to zgodne oświadczenie
Bardziej szczegółowowarsztató OMNM ar n medk oafał ptaszewskii mgr goanna tieczorekjmowiertowskai mgr Agnieszka jarkiewicz
warsztató OMNM ar n medk oafał ptaszewskii mgr goanna tieczorekjmowiertowskai mgr Agnieszka jarkiewicz } Pacjent w badaniu klinicznym a NFZ } Kalkulacja kosztów } Współpraca z zespołem badawczym jak tworzyć
Bardziej szczegółowoGdynia: Księgowość od podstaw Numer ogłoszenia: 60337-2012; data zamieszczenia: 15.03.2012 OGŁOSZENIE O ZAMÓWIENIU - usługi
1 z 5 2012-03-15 12:05 Adres strony internetowej, na której Zamawiający udostępnia Specyfikację Istotnych Warunków Zamówienia: www.pupgdynia.pl Gdynia: Księgowość od podstaw Numer ogłoszenia: 60337-2012;
Bardziej szczegółowoRegulamin organizacji przetwarzania i ochrony danych osobowych w Powiatowym Centrum Kształcenia Zawodowego im. Komisji Edukacji Narodowej w Jaworze
Załącznik nr 1 do zarządzenia nr 9/11/12 dyrektora PCKZ w Jaworze z dnia 30 marca 2012 r. Regulamin organizacji przetwarzania i ochrony danych osobowych w Powiatowym Centrum Kształcenia Zawodowego im.
Bardziej szczegółowoREGULAMIN OKRESOWYCH OCEN PRACOWNIKÓW URZĘDU GMINY LIMANOWA ORAZ KIEROWNIKÓW JEDNOSTEK ORGANIZACYJNYCH GMINY LIMANOWA
Załącznik do Zarządzenia Wójta Gminy Limanowa nr 78/2009 z dnia 10 grudnia 2009 r. REGULAMIN OKRESOWYCH OCEN PRACOWNIKÓW URZĘDU GMINY LIMANOWA ORAZ KIEROWNIKÓW JEDNOSTEK ORGANIZACYJNYCH GMINY LIMANOWA
Bardziej szczegółowoDotyczy: Odnowa centrum wsi śegiestów poprzez budowę oświetlenia ulicznego wzdłuŝ drogi powiatowej 1517K w śegiestowie
Zp.271.14.2014 Muszyna, dnia 03 kwietnia 2014 r. Miasto i Gmina Uzdrowiskowa Muszyna ul. Rynek 31 33-370 Muszyna Dotyczy: Odnowa centrum wsi śegiestów poprzez budowę oświetlenia ulicznego wzdłuŝ drogi
Bardziej szczegółowoKomenda Powiatowa Policji w Gryfinie
Komenda Powiatowa Policji w Gryfinie Źródło: http://bip.gryfino.kpp.policja.gov.pl/251/procedury-antymobbingow/18421,procedury-antymobbingowe.html Wygenerowano: Niedziela, 3 lipca 2016, 07:11 PROCEDURY
Bardziej szczegółowoZAPYTANIE OFERTOWE Dotyczące zakupu bawełnianych koszulek dziecięcych T-shirt z nadrukiem
ZAPYTANIE OFERTOWE Dotyczące zakupu bawełnianych koszulek dziecięcych T-shirt z nadrukiem Szanowni Państwo, Polski Związek Lekkiej Atletyki z siedzibą w Warszawie zaprasza do złożenia oferty w postępowaniu
Bardziej szczegółowoREGULAMIN PROMOCJI: BĄDŹ GOTÓW NA VAT! WYBIERZ SYMFONIĘ
REGULAMIN PROMOCJI: BĄDŹ GOTÓW NA VAT! WYBIERZ SYMFONIĘ Postanowienia ogólne 1. Organizatorem Promocji Bądź gotów na VAT! Wybierz Symfonię (dalej: Promocja) jest firma Sage Sp. z o.o. w Warszawie, ul.
Bardziej szczegółowoPostanowienia ogólne. Wysokość Stypendium wynosi 1 000 zł miesięcznie.
Regulamin przyznawania stypendiów motywacyjnych za wyniki w nauce na studiach odbywanych w ramach realizowanego przez Wydział Biologii i Ochrony Środowiska projektu konkursowego Zwiększenie liczby absolwentów
Bardziej szczegółowoZapisy na kursy B i C
Instytut Psychologii Uniwersytetu Gdańskiego Zapisy na kursy B i C rok akademicki 2016 / 2017 procedura i terminarz Gdańsk, 2016 Tok studiów w Instytucie Psychologii UG Poziomy nauczania i ścieżki specjalizacyjne
Bardziej szczegółowoKLASYFIKACJI I BUDOWY STATKÓW MORSKICH
PRZEPISY KLASYFIKACJI I BUDOWY STATKÓW MORSKICH ZMIANY NR 3/2012 do CZĘŚCI II KADŁUB 2011 GDAŃSK Zmiany Nr 3/2012 do Części II Kadłub 2011, Przepisów klasyfikacji i budowy statków morskich, zostały zatwierdzone
Bardziej szczegółowoZarządzenie Nr 1 Dyrektora Gimnazjum im. Marii Skłodowskiej- Curie w Kaliszu Pomorskim z dnia 25 stycznia 2016 roku
Zarządzenie Nr 1 Dyrektora Gimnazjum im. Marii Skłodowskiej- Curie w Kaliszu Pomorskim w sprawie regulaminu okresowych ocen kwalifikacyjnych pracowników administracji zatrudnionych na stanowiskach urzędowych
Bardziej szczegółowoINSTRUKCJA. Opolskiego Wojewódzkiego Lekarza Weterynarii
Załącznik do Zarządzenia nr 44 Opolskiego Wojewódzkiego Lekarza Weterynarii INSTRUKCJA Opolskiego Wojewódzkiego Lekarza Weterynarii z dnia 19 listopada 2012 r. w sprawie wyznaczania na czas określony lekarzy
Bardziej szczegółowo- WZÓR- UMOWA Nr... Gminą i Miastem Czerwionka-Leszczyny, będącą płatnikiem podatku VAT, nr NIP: 642-000-97-26, reprezentowaną przez:......
- WZÓR- UMOWA Nr... zawarta w dniu... 2012 roku pomiędzy: Gminą i Miastem Czerwionka-Leszczyny, będącą płatnikiem podatku VAT, nr NIP: 642-000-97-26, reprezentowaną przez:... zwaną w dalszej części umowy
Bardziej szczegółowo1. Oprocentowanie LOKATY TERMINOWE L.P. Nazwa Lokaty Okres umowny Oprocentowanie w skali roku. 9 miesięcy 2,30%
Duma Przedsiębiorcy 1/5 TABELA OPROCENTOWANIA AKTUALNIE OFEROWANYCH LOKAT BANKOWYCH W PLN DLA OSÓB FICZYCZNYCH PROWADZĄCYCH DZIAŁALNOŚĆ GOSPODARCZĄ (Zaktualizowana w dniu 27 kwietnia 2015 r.) 1. Oprocentowanie
Bardziej szczegółowoOcena ilościowa reakcji antygen - przeciwciało. Mariusz Kaczmarek
Ocena ilościowa reakcji antygen - przeciwciało Mariusz Kaczmarek Metody ilościowe oparte na tworzeniu immunoprecypitatów immunodyfuzja radialna wg Mancini immunoelektroforeza rakietowa wg Laurella turbidymetria
Bardziej szczegółowoASTORIA CAPITAL SA Rejestracja w KRS zmian Statutu Spółki
2016-04-27 10:23 ASTORIA CAPITAL SA Rejestracja w KRS zmian Statutu Spółki Raport Bieżący nr 5/2016 Zarząd Quark Ventures S.A z siedzibą we Wrocławiu (dalej Spółka, Emitent ) informuje, że w dniu 26 kwietnia
Bardziej szczegółowoSTANDARD 1.3.1. Standard 1.3.4 określa zasady jednorodności i czystości dodatków do Ŝywności. Spis treści
STANDARD 1.3.1 DODATKI DO śywności Cel Dodatki do Ŝywności to wszelkie substancje, które w normalnych warunkach nie są spoŝywane, ani dodawane jako składnik pokarmu, a które w sposób świadomy i celowy
Bardziej szczegółowoI. REKLAMA KIEROWANA DO LEKARZY
Instrukcja postępowania w sprawie warunków i formy reklamy produktów leczniczych w Specjalistycznym Szpitalu Klinicznym Uniwersytetu Medycznego im. Karola Marcinkowskiego w Poznaniu Instrukcja określa
Bardziej szczegółowoRekompensowanie pracy w godzinach nadliczbowych
Rekompensowanie pracy w godzinach nadliczbowych PRACA W GODZINACH NADLICZBOWYCH ART. 151 1 K.P. Praca wykonywana ponad obowiązujące pracownika normy czasu pracy, a także praca wykonywana ponad przedłużony
Bardziej szczegółowoWniosek o ustalenie warunków zabudowy
Wniosek o ustalenie warunków zabudowy Informacje ogólne Kiedy potrzebna jest decyzja Osoba, która składa wniosek o pozwolenie na budowę, nie musi mieć decyzji o warunkach zabudowy terenu, pod warunkiem
Bardziej szczegółowoREGULAMIN KONTROLI ZARZĄDCZEJ W MIEJSKO-GMINNYM OŚRODKU POMOCY SPOŁECZNEJ W TOLKMICKU. Postanowienia ogólne
Załącznik Nr 1 do Zarządzenie Nr4/2011 Kierownika Miejsko-Gminnego Ośrodka Pomocy Społecznej w Tolkmicku z dnia 20 maja 2011r. REGULAMIN KONTROLI ZARZĄDCZEJ W MIEJSKO-GMINNYM OŚRODKU POMOCY SPOŁECZNEJ
Bardziej szczegółowoEGZAMIN MATURALNY Z MATEMATYKI
Arkusz zawiera informacje prawnie chronione do momentu rozpoczęcia egzaminu. MMA 016 KOD UZUPEŁNIA ZDAJĄCY PESEL miejsce na naklejkę dysleksja EGZAMIN MATURALNY Z MATEMATYKI POZIOM ROZSZERZONY DATA: 9
Bardziej szczegółowoPodstawowe pojęcia: Populacja. Populacja skończona zawiera skończoną liczbę jednostek statystycznych
Podstawowe pojęcia: Badanie statystyczne - zespół czynności zmierzających do uzyskania za pomocą metod statystycznych informacji charakteryzujących interesującą nas zbiorowość (populację generalną) Populacja
Bardziej szczegółowoŚrodowiskowe Laboratorium Ciężkich Jonów Uniwersytet Warszawski
Środowiskowe Laboratorium Ciężkich Jonów Uniwersytet Warszawski, tel: +(48 22) 8222123, fax: +(48 22) 6592714 e-mail: slcj@slcj.uw.edu.pl http://www.slcj.uw.edu.pl Warszawa,24.02.2016 r. OGŁOSZENIE O WSZCZĘCIU
Bardziej szczegółowoAdres strony internetowej, na której Zamawiający udostępnia Specyfikację Istotnych Warunków Zamówienia: bip.koweziu.edu.pl
Adres strony internetowej, na której Zamawiający udostępnia Specyfikację Istotnych Warunków Zamówienia: bip.koweziu.edu.pl Warszawa: Produkcja 12 odcinków filmu animowanego na potrzeby projektu współfinansowanego
Bardziej szczegółowoROZDZIAŁ I POSTANOWIENIA OGÓLNE
ZASADY PRZYZNAWANIA REFUNDACJI CZĘŚCI KOSZTÓW PONIESIONYCH NA WYNAGRODZENIA, NAGRODY ORAZ SKŁADKI NA UBEZPIECZENIA SPOŁECZNE SKIEROWANYCH BEZROBOTNYCH DO 30 ROKU ŻYCIA PRZEZ POWIATOWY URZĄD PRACY W JAWORZE
Bardziej szczegółowoZestawienie wartości dostępnej mocy przyłączeniowej źródeł w sieci RWE Stoen Operator o napięciu znamionowym powyżej 1 kv
Zestawienie wartości dostępnej mocy przyłączeniowej źródeł w sieci RWE Stoen Operator o napięciu znamionowym powyżej 1 kv stan na: lipiec 2016 r. RWE Stoen Operator Sp. z o.o. 28/06/2016 STRONA 1 Podstawa
Bardziej szczegółowoROZPORZÑDZENIE MINISTRA ZDROWIA 1) z dnia 23 grudnia 2002 r. w sprawie niepo àdanych odczynów poszczepiennych.
Dziennik Ustaw Nr 241 15978 Poz. 2097 2097 ROZPORZÑDZENIE MINISTRA ZDROWIA 1) z dnia 23 grudnia 2002 r. w sprawie niepo àdanych odczynów poszczepiennych. Na podstawie art. 19 ust. 3 ustawy z dnia 6 wrzeênia
Bardziej szczegółowoPROCEDURA OCENY RYZYKA ZAWODOWEGO. w Urzędzie Gminy Mściwojów
I. Postanowienia ogólne 1.Cel PROCEDURA OCENY RYZYKA ZAWODOWEGO w Urzędzie Gminy Mściwojów Przeprowadzenie oceny ryzyka zawodowego ma na celu: Załącznik A Zarządzenia oceny ryzyka zawodowego monitorowanie
Bardziej szczegółowoJak należy wypełnić i aktualizować harmonogram płatności będący załącznikiem do umowy o dofinansowanie projektu w ramach RPO WM 2014-2020?
Jak należy wypełnić i aktualizować harmonogram płatności będący załącznikiem do umowy o dofinansowanie projektu w ramach RPO WM 2014-2020? SPORZĄDZANIE HARMONOGRAMU PŁATNOŚCI I. Umowa Standardowa 1. Do
Bardziej szczegółowo