Paskowy test ilościowy do wykrywania Aflatoksyn

Transkrypt

1 Paskowy test ilościowy do wykrywania Aflatoksyn NEO 8085 Stosowany z czytnikiem Reveal AccuScan III wersja 4.21 lub nowsza Przechowywać w temperaturze o C Nie zamrażać

2 Toksyna Aflatoksyna jest toksyczną i rakotwórczą substancją wytwarzaną przez niektóre szczepy pleśni, tj. Aspergillus flavus i Aspergillus parasiticus. W praktyce występują 4 zasadnicze typy Aflatoksyn, tj. B 1 i B 2 oraz G 1 i G 2. Najczęściej spotykana jest Aflatoksyna B 1 i należy ona do grupy najbardziej toksycznych Aflatoksyn. Aflatoksyny najczęściej występują w kukurydzy, orzeszkach ziemnych, nasionach bawełny oraz w większości orzechów drzewnych. Skarmianie pasz skażonych Aflatoksynami powoduje chroniczne niedomaganie zdrowotne, brak przyrostów produkcyjnych, do padnięć zwierząt włącznie. Aflatoksyny uszkadzają wątrobę, wywołują raka, obniżają produkcję jaj i mleka, obniżają odporność organizmu i utrudniają efektywność rozrodu. Wiele krajów ustaliło maksymalne dopuszczalne poziomy Aflatoksyn w żywności i paszy. Z tego względu dokładne oznaczanie ich obecności należy do najważniejszych badań jakości żywności i pasz, w których te toksyny mogą występować. Przy oznaczaniu obecności Aflatoksyn wymaga się dokładnego pobierania i przygotowywania prób, chemicznej ekstrakcji oraz precyzyjnego wykonywania oznaczeń ilościowych. Limity dopuszczalnych poziomów Aflatoksyn w żywności i paszy ustalone przez FDA: Wyjątki: Konsumenci Poziomy Rodzaj badanej żywności lub paszy Ludzie 20 ppb Wszystkie pokarmy, z wyjątkiem mleka Zwierzęta 20 ppb Wszystkie pasze, z wyjątkiem podanych poniżej Bydło hodowlane Trzoda hodowlana 100 ppb Kukurydza Dorosły drób Tuczniki powyżej 45 kg 200 ppb Kukurydza Dorosłe bydło rzeźne 300 ppb Kukurydza Dorosłe bydło, świnie i drób 300 ppb Śruta z ziarna bawełny

3 Regulacje UE dla Aflatoksyn są następujące: Żywność Poziomy Maksymalne (ppb) Orzeszki ziemne, orzechy do przetworzenia przed konsumpcją 15 Suszone owoce do przetworzenia przed konsumpcją Przyprawy Kukurydza do sortowania i przetworzenia przed konsumpcją Orzechy do sortowania i przetworzenia przed konsumpcją Orzeszki ziemne, orzechy do bezpośredniego spożycia Suszone owoce do bezpośredniego spożycia Zboża przetworzone Preparaty dla niemowląt 0, Zastosowanie testu Test Reveal Q+ Aflatoksyny jest stosowany do szybkiej ilościowej analizy zawartości Aflatoksyn w kukurydzy i produktach kukurydzianych. Kierowany jest do osób zajmujących się kontrolą Jakości produktów możliwie zanieczyszczonych Aflatoksynami. Zasada działania testu Test jest jednostopniowym paskowym testem immunochromatograficznym działającym na zasadzie konkurencyjnej techniki immunologicznej. Ekstrakt przenika do strefy z reagentami zawierającymi przeciwciała specyficzne dla Aflatoksyn skoniugowane z cząsteczkami złota. Jeżeli w badanej próbce obecne są Aflatoksyny to w tej strefie wychwytywana jest przez kompleks przeciwciało-barwnik na skutek czego tworzy się nowy kompleks: Aflatoksyna + przeciwciało + barwnik. Z kolei ten kompleks przenika dalej do strefy membranowej, w której Aflatoksyna skonjugowana jest z nośnikiem białkowym. W tej strefie wszystkie nie związane przeciwciała specyficzne dla Aflatoksyn są wychwytywane, a cząstki barwne koncentrują się tworząc widoczną poprzeczną linię na pasku. Jeżeli w badanej próbce jest więcej Aflatoksyn to w większym stopniu będzie tworzył kompleksy ze specyficznymi przeciwciałami i cząsteczkami barwnymi, skutkiem czego mniej przeciwciał Aflatoksyn będzie wychwytywanych w strefie testowej paska. Z tego względu przy wyższej koncentracji Aflatoksyn w badanej próbce intensywność koloru na poprzecznej linii tworzącej się na pasku jest słabsza.

4 Alogorytmy zaprogramowane w czytniku Reveal AccuScan III przeliczają intensywność tej linii na ilościowy wynik wyrażany w częściach na bilion ppb (parts per billion = ppb). Membrana zawiera także strefę kontrolną, w której immuno kompleks znajdujący się w strefie reagentowej jest wychwytywany przez przeciwciała tworząc widoczną poprzeczną linię kontrolną. Kontrolna linia formuje się zawsze, niezależnie od poziomu zawartości Aflatoksyn w badanej próbce i wskazuje na prawidłowe działanie testu. Przechowywanie Zestaw należy przechowywać w temperaturze pokojowej (18 30 C). Paski testowe należy przechowywać w oryginalnych zamkniętych pojemnikach, w celu zachowania ich optymalnych właściwości. Skład zestawu 25 pasków testowych Reveal Q+ 25 czerwonych probówek do rozcieńczeń 25 probówek na próbki 2 butelek z rozcieńczalnikiem do próbek Instrukcja użycia Materiały zalecane, nie znajdujące się w zestawie 65% roztwór etanolu Pojemniki do pobierania próbek z nakrywkami (Neogen nr kat. 9428) Młynek Agri Grind lub równorzędny (Neogen nr kat. 0401) Waga o możliwości odważenia 5-50 g 0,1g (Neogen nr kat. 9427) Stoper (Neogen nr kat.0426) Statyw na probówki Reveal Sample Cup Rack (Neogen nr kat. 9475) Czytnik Reveal AccuSan III (Neogen nr kat. 9590) Cylinder miarowy o pojemności 100 ml (Neogen nr kat.9447,9448) Strzykawka filtrująca lub filtr Whatman Nr.1 (Neogen nr kat. 9420) Pojemniki do zbierania ekstraktu z korkami (Neogen nr kat. 9421, 9421B) Pipeta 100 l (Neogen nr kat. 9272, 9278) Końcówki do pipety 100 l (Neogen nr kat.9410, 9417 lub 9407) Pipeta 500 l (Neogen nr kat. 9335) Końcówki do pipety 500 l (Neogen nr kat.9464, 9487)

5 Uwagi i zalecenia 1. Paski testowe muszą być przetrzymywane wewnątrz suchego oryginalnego opakowania. 2. Etanol jest łatwopalny. Przechowywać opakowanie szczelnie zamknięte, z dala od ciepła ognia i iskier oraz osób palących. Jest toksyczny po połknięciu lub po wchłonięciu oparów. Unikać kontaktu ze skórą. 3. Zestaw należy przechowywać w temperaturze pokojowej (18 30 C). Nie zamrażać. 4. Nie stosować testu po upływie jego terminu ważności. 5. Wszystkie stosowane w teście płyny, w tym ekstrakty próbek, jak również sprzęt laboratoryjny należy traktować, jako zanieczyszczone Aflatoksyną. W czasie wykonywania testu należy stosować rękawiczki i odzież ochronną 6. W celu uniknięcia zanieczyszczenia krzyżowego, do każdej próbki należy stosować czysty sprzęt laboratoryjny i dokładnie myć szkło przed użyciem go do następnej próbki. Ustawienia czytnika AccuScan III Czytnik AccuScan III musi mieć wersję oprogramowania 4.21 lub nowszą. W celu uzyskania informacji na temat odpowiednich ustawień krzywej wzorcowej należy odnieść się do opakowania testu lub certyfikatu Jakości testu. 1. Uruchomić program AccuScan III w czytniku. 2. Wybrać kategorię: Mycotoxin Q+ i rodzaj testu Aflatoxin. 3. Wprowadzić numer próbki ID (opcjonalne). 4. Wprowadzić numer serii testu (lot number), wartości A,B,C,D, z opakowania testu lub wybrać z historii (History) wcześniej wprowadzone dane. Uwaga: Aby uzyskać bardziej szczegółowe informacje należy skorzystać z instrukcji obsługi czytnika AccuScan III. Czytnik AccuScan III musi dopasować numer serii do analizowanego paska testowego. Czytnik AccuScan III należy zaktualizować przed przystąpieniem do wykonywania analiz. Przygotowanie i ekstrakcja próbek Badane próbki powinny być pobrane zgodnie z zasadami przy pobieraniu próbek reprezentatywnych. 1. Jeżeli nie stosuje się gotowego roztworu Neogen, przygotować 65% roztwór etanolu poprzez zmieszanie 6,5 części etanolu z 3,5 części wody destylowanej lub dejonizowanej.

6 2. Uzyskać próbkę reprezentatywną. Zmielić pobraną próbkę do takiego stopnia, aby co najmniej 75% zmielonego materiału przechodziło przez sito o 20 mesh, tj. miało wygląd dobrze zmielonej kawy instant. 3. Ekstrakcję prowadzić w stosunku: 1 część próbki do 5 części 65% roztworu etanolu. Na przykład, do 10 gramów próbki dodać 50 ml 65% roztworu etanolu. Energicznie wytrząsać przez 3 minuty lub mieszać w mieszalniku szybkoobrotowym przez 1 minutę. ALTERNATYWNIE: (W metodzie USDA/GIPSA) Zmieszać 50 gramów próbki ze 250 ml 65% roztworu etanolu i wytrząsać przez 3 minuty lub mieszać w mieszalniku szybkoobrotowym przez 1 minutę. 4. Pozostawić próbkę do odstania, a następnie przefiltrować co najmniej 5ml przez strzykawę filtrującą lub przez filtr papierowy Whatman Nr.1 i zebrać filtrat. Procedura wykonania testu 1. Wyjąć niezbędną ilość czerwonych probówek do rozcieńczeń i przezroczystych probówek na próbki. Umieścić je w stojaku. 2. Przy użyciu pipety i nowej końcówki wprowadzić po 500 l rozcieńczalnika do próbek do każdej probówki oznaczonej na czerwono. 3. Stosując nową końcówkę pipety do każdej próbki wprowadzić po 100 l przefiltrowanych ekstraktów badanych próbek do każdej czerwonej probówki z rozcieńczalnikiem. Mieszać poprzez 5 krotne pipetowanie w górę i w dół. 4. Przenieść po 100 l rozcieńczonego ekstraktu próbek do czystych przezroczystych probówek. 5. W każdej probówce umieścić pasek testowy Reveal Q+ Aflatoxin, końcówką oznakowaną sample do dołu. Pozostawić pasek testowy w próbce przez 6 minut. 6. Wyjąć pasek z próbówki po upływie czasu 6 minut. Przejść do odczytu wyników. Odczyt wyników na czytniku Reveal AccuScan Testy powinny być odczytane w ciągu 1 minuty od zakończenia 6 minutowej inkubacji. Aby uzyskać dodatkowe informacje na temat ustawień należy udać się do Reveal AccuScan III Set Up. 1. Umieścić dokładnie pasek testowy Reveal Q+ w czarnym adapterze, najpierw strona sample, stroną z rezultatami skierowanymi na zewnątrz.

7 2. Umieścić adapter z testem, górną stroną skierowany w dół, w czytniku (linie testowe będą skierowane w dół czytnika). Po włożeniu adaptera zaświeci się zielone światełko czytnik rozpocznie automatycznie analizę testu. UWAGA: usunięcie adaptera z czytnika w trakcie odczytu może prowadzić do niewłaściwych odczytów. 3. Czytnik AccuScan III przeanalizuje pasek testowy a uzyskane rezultaty zostaną wyświetlone na ekranie oraz zapisane w pamięci czytnika. Uwagi 1. Należy upewnić się, że pasek testowy jest właściwie (całkowicie) umieszczony w adapterze. 2. Odczyty powinny być wykonane pomiędzy 6 a 7 minutą. Odczyty dokonane po czasie przekraczającym 7 minut mogą być niedokładne z powodu nadmiernego rozwinięcia paska testowego. 3. Pasek testowy musi być odczytywany w czytniku Reveal AccuScan III Reader. Charakterystyka testu Test Reveal Q+ for Aflatoxin został opracowany do ilościowej analizy Aflatoksyn. 1. Limit detekcji: 2 ppb 2. Zakres pomiarowy: ppb UWAGA: aby oznaczyć zawartość Aflatoksyn na poziomie przekraczającym 150 ppb należy skontaktować się z serwisem technicznym. Zwalidowane matryce Kukurydza, ryż browarniczy, płatki kukurydziane, kukurydziana mączka, kukurydziana mączka glutenowa*, skrobia kukurydziana, mieszanki kukurydza/soja, DDGS*, orzechy ziemne*, popcorn, łuski ryżowe, *prosimy o kontakt w sprawie uzyskania informacji na temat ekstrakcji.

8 UWAGA: Neogen stale prowadzi walidację dla kolejnych produktów. W celu uzyskania aktualizacji prosimy o kontakt z firmą Noack Polen Sp. z o.o. Serwis klienta Noack Polen Sp. z o.o., ul. Królowej Marysieńki 50, Warszawa, Tel , fax , Dostępne informacje MSDS Materiały dotyczące bezpieczeństwa dla tego testu i wszystkich testów Neogenu są dostępne na stronie Gwarancja Neogen nie daje żadnych gwarancji na żaden sposób, również wykorzystania lub wprowadzania, z wyjątkiem materiału, z którego produkty są wykonane, które mają standardową jakość. Jeżeli jakiekolwiek materiały są wadliwe, Neogen dostarczy produkt zastępczy. Kupujący ponosi całkowite ryzyko i odpowiedzialność za wyniki wynikające z użycia tego produktu. Nie ma gwarancji sprzedawalności tego produktu, zdolności użytkowej do różnych celów. Neogen nie powinien być odpowiedzialny za żadne uszkodzenia, włączając specjalne lub wynikające, lub koszty wynikające bezpośrednio lub pośrednio ze stosowania produktu.