Kit for rapid detection Legionella pneumophilla

Transkrypt

1 Kit for rapid detection Legionella pneumophilla Zestaw do szybkiej detekcji bakterii Legionella w próbkach wody opiera się na wykorzystaniu immunomagnetycznych kulek. Są to cząsteczki superparamagnetyczne, które posiadają związane na ich powierzchni przeciwciała, wiążące się specyficznie z białkami znajdującymi się na komórkach bakterii Legionella. Kulki są unieruchamiane przy wykorzystaniu pola magnetycznego. Po usunięciu pola magnetycznego kulki nie posiadają żadnych własności magnetycznych. Najpierw należy umieścić próbkę wody w probówkach znajdujących się na specjalnym statywie wchodzącym w skład zestawu. Następnie delikatnie wymieszać roztwór zawierający kulki magnetyczne. Dodać po kilka kropli roztworu zawierającego kulki magnetyczne opłaszczone przeciwciałami. Probówki zamknąć szczelnie korkiem.

2 Delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie. Przeciwciała przyłączają się do docelowych białek na powierzchni bakterii Legionella. Po upływie 15 minut kilkakrotnie przekręcić pokrętło znajdujące się u dołu statywu. Następnie zlać roztwór znajdujący się w probówkach. Cząsteczki bakterii Legionella pozostaną w probówkach, gdyż zostały unieruchomione działaniem magnesu. W probówkach pozostaną jedynie cząsteczki bakterii Legionella z przyłączonymi do nich magnetycznymi kulkami. Inne mikroorganizmy oraz związki znajdujące się w wodzie zostaną usunięte. Selektywne wychwytywanie:

3 Dodać około 1 ml roztworu do przepłukiwania. Probówki zakryć korkiem, kilkakrotnie przekręć pokrętło i delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie. Zlać roztwór znajdujący się w probówkach. Wszystkie niezwiązane z magnetycznymi kulkami mikroorganizmy i związki zostaną usunięte. Do każdej z probówek dodać roztwór zawierający drugorzędowe przeciwciała ze znacznikiem.

4 Zakryć probówki korkiem i kilkakrotnie przekręcić pokrętło. Następnie delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie. Przeciwciała drugorzędowe przyłączają się do przeciwciał znajdujących się na powierzchni kulek magnetycznych związanych z komórkami bakterii Legionella. Po upływie 10 minut dodać około 1 ml roztworu do przepłukiwania. Probówki zakryć korkiem, kilkakrotnie przekręcić pokrętło i delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie.

5 Zlać roztwór znajdujący się w probówkach. Wszystkie niezwiązane przeciwciała drugorzędowe zostaną usunięte. Do probówek dodać po kilka kropli roztworu zawierającego substrat (np. enzym lub fluorochrom), zakryć korkiem, i delikatnie wymieszać poprzez wytrząsanie. Substrat reaguje ze znacznikiem znajdującym się na powierzchni przeciwciał drugorzędowych. W wyniku tej reakcji powstaje mierzalny sygnał barwny. Bakterie odłączają się od magnesu: Do probówek zostaje dodany substrat (na rysunku zaznaczony na żółto) dla znacznika przeciwciał drugorzędowych:

6 Substrat przyłącza się do znacznika znajdującego się na przeciwciałach drugorzędowych Po 10 minutach można odczytać wynik oznaczenia. Uzyskaną barwę roztworu należy porównać ze skalą umieszczoną na statywie i w ten sposób określić stopień zanieczyszczenia wody bakteriami Legionella.