THE BIOGICAL PROPERTIES OF SOIL CONTAMINATED BY CHWASTOX TRIO 540 SL

ROCZNIKI GLEBOZNAWCZE TOM LV NR 1 WARSZAWA 2004: 311-319 JADWIGA WYSZKOWSKA, JAN KUCHARSKI BIOLOGICZNE W ŁAŚCIW OŚCI GLEBY ZANIECZYSZCZONEJ CHW ASTOXEM TRIO 540 SL THE BIOGICAL PROPERTIES OF SOIL CONTAMINATED BY CHWASTOX TRIO 540 SL Katedra Mikrobiologii, Uniwersytet Warmińsko-Mazurski w Olsztynie Abstract: The effect of soil contamination with Chwastox Trio 540 SL herbicide (0; 0.5; 2.5 and 5. 0 mm3 kg-1 of soil) on the number of microorganisms, the activity of soil enzymes as well as the yield of spring barley was studied in a pot experiment. The experiment involved samples of typical brown soil formed of light clay sand. The soil sample were taken from the plough and humus layer. Based on the results, it was found that soil contamination with this herbicide resulted in a reduction in the number of bacteria representing the genus Azotobacter, oligotrophic, cellulolytic, copiotrophic sporulating bacteria and fungi. The examined herbicide stimulated the growth of soil dehydrogenase and urease, it inhibited however the activity of acid and alkaline phosphatase. Słowa kluczowe: Chwastox, zanieczyszczenie gleby, drobnoustroje, enzymy glebowe. Key words: Chwastox, soil contamination, microorganisms, soil enzymes. WSTĘP Postępujące zanieczyszczenie środowiska odpadami toksycznymi, metalami ciężkimi i środkami ochrony roślin sprawia, iż do gleby trafia coraz więcej różnych biologicznie czynnych związków. Substancje te ulegają nagromadzaniu i zalegają w środowisku zwykle przez dość długi okres, powodując powolną degradację ekosystemów. Dokładne poznanie mechanizmów transformacji poszczególnych zanieczyszczeń allochtonicznych może w pewnym stopniu ograniczyć niekorzystne skutki ich oddziaływania na glebę. Do tej grupy ksenobiotyków możemy zaliczyć pestycydy, które w zależności od charakteru związku aktywnego mogą powodować mniej lub bardziej trwałe zmiany w środowisku [Griffiths i in. 2001, Johnsen i in. 2001, Węgorek 1994]. Z tych względów bardzo ważne jest ustalenie wpływu na metabolizm gleby poszczególnych środków ochrony roślin, które mogą z różnych przyczyn trafić do środowiska w nadmiarze. Dotyczyć to może szczególnie tych pestycydów, które są w największym stopniu stosowane w praktyce rolniczej, a do takich możemy zaliczyć między innymi herbicydy.

312 J. Wyszkowska, J. Kucharski Substancje aktywne wielu herbicydów mogą powodować spowolnienie tempa przebiegu szeregu procesów biologicznych, prowadzących do zakłóceń w aktywności enzymatycznej gleby i namnażania się drobnoustrojów [Klimach i Wieczorek 1998, Digrak i Ozcelik 1998, Braschi i in. 2000, Wyszkowska 2002a, Wyszkowska 2002b, Wyszkowska 2002с]. Monitorowanie skutków działania w tym względzie poszczególnych pestycydów może być, według niektórych autorów [Moorman i in. 2001, Nowak 1996, Nowak i in. 1999], miarą ubocznych efektów ich działania. Z tych względów uzasadnione wydają się być badania dotyczące określenia wpływu zanieczyszczenia gleby herbicydem Chwastox Trio 540 SL na liczebność drobnoustrojów, jej aktywność enzymatyczną oraz na plonowanie jęczmienia jarego. MATERIAŁ I METODY Doświadczenie przeprowadzono w hali wegetacyjnej w 4 powtórzeniach. Do badań z poziomu orno-próchniczego pobrano 300 kg gleby brunatnej typowej, wytworzonej z piasku gliniastego lekkiego charakteryzującego się następującymi właściwościami: phkc1-6,3 0 ; kwasowość hydrolityczna ( H h ) - 12,85 mmol (H+) kg-1 gleby; Cor - 5,80 g kg 1; suma zasad wymiennych (S) - 55,53 mmol (+) kg-1; pojemność kompleksu sorpcyjnego (T) - 68,38 mmol (+) kg-1; stopień wysycenia zasadami (V) - 81,21%. Glebę przed umieszczeniem w wazonach zwapnowano (za pomocą CaO) do poziomu pełnej kwasowości hydrolitycznej. W badaniach zastosowano stałe nawożenie makro- i mikroelementami, które w przeliczeniu na czysty składnik, w mg kg-1gleby wynosiło: N - 120 [CO(NH,)J; P - 5 0 [KH2PO J; K - 120 [KH9P 0 4 + KC1], Mg - 40 [M gs04 7H20], Zn - 5 [ZnClJ, Cu - 5 [CuS04*5H20 ], Mn - 5 [MnCl2*4H20 ], M o - 5 [Na2M o04*2h20 ], В - 0,33 [Н3В 0 3]. Tak przygotowane próbki gleby (po 5,4 kg) zanieczyszczono Chwastoxem Trio 540 SL, którego substancją biologicznie czynnąjest: mekoprop - 300 g, MCPA (związki z grupy fenoksykwasów) w formie soli potasowych - 200 g oraz dikamba (związek z grupy pochodnych kwasu benzoesowego) w postaci soli potasowej - 40 g i umieszczono w plastikowych wazonach. Chwastox stosowano doglebowo w postaci emulsji wodnej przygotowanej z preparatu handlowego, w następujących stężeniach w mm3 kg-1 gleby: 0; 0,5; 2,5 i 5,0. Najniższa dawka herbicydu była dawką optymalną, zalecaną do stosowania przez producenta, a kolejne były 5- i 10-krotnie wyższe. Doświadczenie prowadzono przez 62 dni. Przez pierwsze 12 dni gleba w wazonach nie była obsiana. W dwunastym dniu pobrano próbki do analiz mikrobiologicznych, biochemicznych oraz fizykochemicznych i zasiano jęczmień jary odmiany Start (18 roślin w wazonie). Zbioru jęczmienia jarego dokonano w fazie kwitnienia. Okres wegetacji wynosił 50 dni. W tym samym terminie pobrano próbki glebowe do analiz. Przez cały czas trwania doświadczenia (62 dni) utrzymywano stałą wilgotność gleby na poziomie 60%) kapilarnej pojemności wodnej. W dniu pobrania próbek glebowych wykonano analizę mikrobiologiczną oznaczając w nich metodą płytkową liczebność bakterii: oligotroficznych (Olig) i ich form przetrwalnych (Olig ) oraz bakterii kopiotroficznych (Cop) i ich form przetrwalnych (Copp) - na podłożu z peptonem i ekstraktem mięsnym wg Onta i Hattoriego [1983],

Biologiczne właściwości gleby zanieczyszczonej Chwastoxem Trio 540 SL 313 Azotobacter spp - metodą Fenglerowej [1965], bakterii celulolitycznych (Cel) - na podłożu Winogradskiego [1953], promieniowców (Act) - metodąküstera i Williamsa z antybiotykami nystatyną i actidionem, wg przepisu przedstawionego przez Parkinsona i in. [ 1971 ] i grzybów (Fun) - na agarze glukozowo-peptonowym według Martina [ 1950]. Formy przetrwalne bakterii oligotroficznych i kopiotroficznych określano w materiale, który był pasteryzowany przez 15 minut w temperaturze 85 C. Wyliczono także stosunek sumy liczebności bakterii oligotroficznych i promieniowców do grzybów (SR). W ramach analiz biochemicznych, oznaczono aktywność dehydrogenaz glebowych (Deh) - z substratem TTC [Öhlinger 1996], ureazy (Ure) - według A lef i Nannipieri [1998] oraz fosfatazy kwaśnej (Pac) i alkalicznej (Pal)-w edług metody opisanej przez Alef i in. [ 1998]. Na podstawie aktywności enzymatycznej i zawartości węgla obliczono potencjalny biochemiczny wskaźnik żyzności gleby (Mw) wg wzoru: Mw = (Ure 10-1+ Deh +Pac + Pal) % C. Analizy fizykochemiczne polegały na oznaczeniu: kwasowości hydrolitycznej (Hh) i sumy zasad wymiennych (S) metodą Kappena [Mocek i in. 1997]. Na ich podstawie obliczono całkowitą pojemność wymienną (T) i stopień wysyeenia zasadami (V) według wzorów: T= S + Hh; V = S x T_1 х 100. Z uwagi na to, że badany herbicyd nie modyfikował istotnie właściwości fizykochemicznych gleby, w pracy nie zamieszczono tych wyników, natomiast oznaczenia liczebności drobnoustrojów i aktywności enzymów glebowych podano jako średnie z dwóch terminów badań (w dniu wysiewu roślin i po ich zbiorze). Wszystkie analizy laboratoryjne wykonano w trzech powtórzeniach. Wyniki opracowano statystycznie posługując się analizą wariancji ANO VA. Obliczono współczynniki korelacji prostej Pearsona pomiędzy dawką herbicydu a plonowaniem jęczmienia jarego, liczebnością drobnoustrojów i aktywnością biochemiczną gleby [STATSOFT, Inc...2001]. WYNIKI BADAŃ I DYSKUSJA Wykonane badania dowodzą, że Chwastox Trio 540 SL może powodować zmiany we właściwościach biologicznych gleby nawet wówczas, gdy stosowany jest w dawce zalecanej przez producenta. Wskazują na to zmiany w liczebności niektórych grup drobnoustrojów (tab. 1) i aktywności enzymów (tab. 2). Pod wpływem najniżej dawki tego herbicydu istotnie zwiększyła się liczebność bakterii kopiotroficznych i promieniowców, a zmniejszyła-grzybów. Dawki w yższe-2,5 i 5,0 mm3 kg-1, które można uznać już za zanieczyszczające glebę, działały zdecydowanie niekorzystnie na bakterie z rodzaju Azotobacter, celulolityczne, oligotroficzne i kopiotroficzne formy przetrwalnikujące oraz grzyby. Ujemne oddziaływanie testowanego herbicydu na tę ostatnią grupę drobnoustrojów zadecydowało o tym, że stosunek sumy liczby bakterii i promieniowców do grzybów (SR) był w glebie zanieczyszczonej korzystniejszy z punktu widzenia żyzności gleby. W sumie jednak można uznać, że zmiany liczebności drobnoustrojów powodowane przez Chwastox Trio 540 SL były niewielkie, gdyż nie

314 J. Wyszkowska, J. Kucharski TABELA 1. Liczebność drobnoustrojów (jtk) w 1 kg s.m gleby TABLE 1. Number of microorganisms (cfii) in 1 kg d.m of soil Dawka- Dose Chwastoxu Olig ж 1 0 «Oligp X 1 0 7 Cop X 108 Copp X 1 0 7 Az X 1 0 3 Cel X 106 Act X 1 0 8 Fun X 1 0 6 SR X 1 0 2 (mm3 kg' 1 gleby - of soil) 0 2 1, 2 1 21,55 27,54 44,48 2,58 23,99 42,58 85,17 0,75 0,5 22,33 22,19 47,48 49,38 1,65 22,33 49,20 66,89 1,07 2,5 20,67 19,15 40,58 39,88 1,63 2 0, 8 6 44,10 59,98 1,08 5,0 17,51 14,04 31,00 35,38 1,46 18,23 43,03 52,52 1,15 r -0,93-0,98-0,2 1-0,90-0,71-0,98-0,38-0,87 0,73 NIR* 1,25** 1,37** 6,1 2 ** 4 4i** 0,74* 1,74** 3,96* 6,69** 0,08* Olig - bakterie o ligo troficzne - oligotrophic bacteria, Oligp - bakterie oligotroficzne przetrwalnikujące - oligotrophic sporulating bacteria, Cop - bakterie kopiotroficzne - copiotrophie bacteria, Copp - bakterie kopiotroficzne przetrwalnikujące - copiotrophie sporulating bacteria, k i - Azot ob act er spp., C elbakterie celulolityczne - cellulolytic bacteria, Act - promieniowce (Actinomycetzs), Fun - grzyby - fungi SR - stosunek sumy liczebności bakterii oligotroficznych i promieniowców do grzybów - ratio of oligotrophic bacteria and actinomycetes to fùngi, r - współczynnik korelacji - correlation coefficients *NIR istotny dla - LDS significant for: **p< 0.01; *p<0.05 zmniejszał on ani nie zwiększał liczebności żadnej z grup o 50%. Nawet populacja bakterii z rodzaju Azotobacter nie zmniejszyła się do takiego poziomu. Może to świadczyć o tym, że wprawdzie istotne statystycznie, ale w rzeczywistości niewielkie zmiany, mogą być niwelowane przez drobnoustroje namnażające się pod wpływem tego herbicydu, a są to mikroorganizmy korzystające z tego preparatu jako z substratu odżywczego i energetycznego. Ich aktywność może przyczynić się do oczyszczania gleby i powrotu liczebności drobnoustrojów do stanu wyjściowego sprzed zanieczyszczenia. Do takiego rozumowania skłoniła zwiększona aktywność dehydrogenaz i urazy w glebie zanieczyszczonej (tab. 2), która mogła być wynikiem silniejszego rozwoju bakterii kopiotroficznych, z reguły pozytywnie reagujących na dopływ świeżej substancji organicznej do gleby, a taką substancją był także testowany herbicyd. W sprzeczności z powyższym uzasadnieniem jest reakcja fosfataz glebowych, których aktywność pod wpływem działania Chwastoxu Trio 540 SL istotnie została obniżona. Pod wpływem najwyższego zanieczyszczenia zmniejszyła się także wartość potencjalnego wskaźnika żyzności gleby. Przy czym nie był on pełnym odwzorowaniem reakcji jęczmienia jarego (rys. 1) na działanie tego herbicydu, gdyż w przypadku tej rośliny już dawka 2,5 mm3 herbicydu kg-1 gleby powodowała istotne zakłócenie wzrostu i rozwoju, a w efekcie zmniejszenie plonu. Nie mniej jednak i w tych warunkach wystąpiła dodatnia korelacja między wartością współczynnika Mw a plonowaniem jęczmienia jarego (tab. 3). Zresztą wskaźnik ten był także dodatnio skorelowany z liczebnością bakterii: oligotroficznych, kopiotroficznych i promieniowców oraz aktywnością dehydrogenaz i ureazy. Dość nieoczekiwanie wystąpiła także dodatnia korelacja między aktywnością fosfatazy

Biologiczne właściwości gleby zanieczyszczonej Chwastoxem Trio 540 SL 315 TABELA 2. Aktywność enzymów w 1 kg s.m gleby TABLE 2. Enzymatic activity in 1 kg d.m of soil Dawka - Dose Chwastoxu (mm1 kg- 1 gleby - of soil) Dehydrogenazy Dehydrogenases (cm3 H2 d ) Ureaza - Urease (mg N-NH4*h 1) Fosfataza - Phosphatase (mmol PNP lr 1) kwaśna - acid alkaliczna -alkaline Mw* 0 1,86 6,06 1,27 1,40 2,98 0,5 2,23 7,60 1,21 1,30 3,19 2,5 2,09 8,08 1,16 1,29 3,10 5,0 1,89 6,23 1,15 1,18 2,81 r -0,30-0,12-0,88-0,93-0,68 NIR (LSD)** 0,15** 0,16** 0,03* 0,02* 0,09** * Mw - biochemiczny wskaźnik potencjalnej żyzności gleby - biochemical index of potential soil fertility; r - współczynnik korelacji - correlation coefficients ** NIR istotny dla - LDS significant for: **p< 0.01; *p<0.05 kwaśnej i alkalicznej a plonowaniem jęczmienia jarego oraz liczebnością bakterii oligotrocznych, kopiotroficznych przetrwalnikujących, Azotobacter, celulolitycznych i grzybów a plonowaniem tej rośliny, natomiast brak było istotnych zależności między aktywnością dehydrogenaz i ureazy a wzrostem i rozwojem jęczmienia jarego. Jest to dawka (dose) Chwastoxu Trio 540 SL, mm? kg1g}eby (of soil) RYSUNEK 1. Plonjçczmieniajarego, g s.m. wazon FIGURE 1. Yield of spring barley in d.m. per pot

TABELA 3. Współczynniki korelacji prostej Pearsona między plonem jęczmienia jarego a liczebnością i aktywnością enzymów glebowych TABLE 3. Pearson's simple correlation coefficients between spring barley yield and number microorganisms enzyme activity and soil physicochemical properties Zmienna Variable Plon Yield Olig Oligp Cop Copp Az Cel Act Fun 'SR Deh Ure Рас Pal Mw Plon - Yield 1,0 0 0,94** 0,98** 0,32 0,9** 0,61* 0,9** 0,51 0,81** -0,63* 0,40 0,16 0,82** 0,85** 0,73** OHg 1,00 0,98** 0,55 0,93** 0,41 0,85** 0,62* 0,63* -0,43 0,62* 0,47 0,62* 0,76** 0,91** Oligp 1,0 0 0,40 0,93** 0,56 0,93** 0,51 0,76* -0,58* 0,47 0,32 0,74** 0,8 6 ** 0,82** Cop 1,0 0 0,53-0,54 0,03 0,90** -0,30 0,51 0,99** 0,87** -0,27-0,1 1 0,83** Copp 1,0 0 0,37 0,80** 0,73* 0,62* -0,40 0,59* 0,27 0,67* 0,6 6 * 0,80** Az 1,0 0 0,82** -0,36 0,96** - 1,0 0-0,47-0,49 0,92** 0,89** 0,0 1 Cel 1,0 0 0,19 0,94** -0,84** 0,1 2 0,0 0 0,92** 0,98** 0,56 Act 1,0 0-0,08 0,33 0,91** 0,58* 0,0 1-0,0 1 0,77** Fun 1,0 0-0,97** -0,2 1-0,32 0,98** 0,95** 0,25 SR 1,0 0 0,44 0,46-0,93- ** -0,90** -0,04 Deh 1,0 0 0,8 6 ** -0,19-0, 0 2 0,87** 316 J. Wyszkowska, J. Kucharski Ure 1,0 0-0,39-0,05 0,79** Рас 1,0 0 0,90** 0,23 Pal 1,0 0 0,46 Mw 1,0 0 Olę - bakterie oligotroficzne (okgotrophie bacteria), Oligp - bakterie oligotroficzne przetrwalnikujące (obgotrophic sporulating bacteria), Cop - bakterie kopiotroficzne (copiotrophic bacteria), Copp - bakterie kopiotroficzne przetrwalnikujące (copiotrophic sporulating bacteria), Az - Azotobacter spp., Cel - bakterie celublityczne (cedufolytic bacteria), Act - promieniowce (actinomycetes), Fun - grzyby (fungi), SR - stosunek sumy liczebności bakterii oligotroficznych i promieniowców do grzybów (ratio of oligotrophic bacteria and actinomycetes to fungi), Deh - dehydrogenazy (dehydrogenases), Ure - ureaza - urease, Pac - fosfataza kwaśna - acid phosphatase, Pal - fosfataza alkaliczna (alkaline phosphatase), Mw - biochemiczny wskaźnik potencjalnej żyzności gleby (biochemical index of potential soil fertility, współczynnik korelacji istotny dla (correlation coefficient significant at): **< 0.01; *p<0.05

Biologiczne właściwości gleby zanieczyszczonej Chwastoxem Trio 540 SL 317 zaskakujące, gdyż niektóre doniesienia dowodzą, że zwykle występuje ścisły związek między aktywnością dehydrogenaz a plonowaniem roślin [Kiss 1999 i Kucharski 1997]. Zatem otrzymane wyniki sugerują, że w warunkach zanieczyszczenia gleby, niektóre ogólnie przyjęte wskaźniki charakteryzujące stan jej żyzności, mogą być mylące. Potwierdza to także ujemna korelacja między wielkością plonu jęczmienia jarego a stosunkiem sumy liczby bakterii i promieniowców do grzybów (SR). Z literatury [Balicka 1983, Węgorek 1994, Wyszkowska 2002a, Wyszkowska 2000b] wynika, że gdy herbicydy są stosowane w dawkach optymalnych, to na ogół nie oddziaływają na liczebność i aktywność drobnoustrojów, natomiast gdy występują w nadmiarze mogą powodować zmiany jakościowe w zespołach drobnoustrojów [Furczak i Kościelska 1997, Wyszkowska 2002a i Wyszkowska 2002b]. Na tym tle interesująco układają się wyniki badań własnych, gdyż Chwastox Trio 540 SL częściowo naruszał równowagę biologiczną gleby, nie tylko wtedy gdy był aplikowany w dawkach 5- i 10- krotnie wyższych, ale również - w zalecanej. Wynika to prawdopodobnie z selektywnego działania herbicydu na drobnoustroje, wskutek czego szczepy oporne zaczynają dominować nad wrażliwymi. Potwierdzają to badania Andersona i in. [1994], Morgana i In. [2001], Heydari i in. [1997], Kaszubiaka i in. [1994] oraz Pędziwilk (1995) wskazujące na występowanie ścisłej współzależności między liczebnością żywych mikroorganizmów w glebie a szybkością biologicznego rozkładu herbicydów. WNIOSKI 1. Zanieczyszczenie gleby herbicydem Chwastox Trio 540 SL przyczyniło się do zmniejszenia liczebności bakterii z rodzaju Azotobacter, oligotroficznych, celulolitycznych, przetrwalnych form kopiotroficznych oraz grzybów. Powodowało j ednocześnie zwiększenie ogólnej liczby bakterii kopiotroficznych. 2.Testowany herbicyd stymulował aktywność dehydrogenaz i ureazy w glebie, natomiast hamował aktywność fosfatazy kwaśnej i fosfatazy alkalicznej. 3. Zanieczyszczenie gleby herbicydem Chwastox Trio 540 SL w ilości 2,5 oraz 5,0 mm3 kg-1 przyczyniło się do istotnego zahamowania wzrostu i rozwoju jęczmienia jarego. 4. W warunkach przeprowadzonego doświadczenia wystąpiła dodatnia korelacja mię-, dzy plonowaniem jęczmienia jarego a aktywnością fosfataz glebowych oraz liczebnością bakterii oligotroficznych, kopiotroficznych przetrwalnikujących, Azotobacter, celulolitycznych i grzybów. LITERATURA ALEF K., NANNIPIERI P. 1998: Urease activity. W: Methods in Applied Soil Microbiology and Biochemistry. A lef K., Nannipieri P. (eds), Academic Press. Harcourt Brace & Company, Publishers, London: 316-320. ALEF K., NANNIPIERI P., TRÄZAR-CEPEDA C. 1998: Phosphatase activity. W: Methods in Applied Soil Microbiology and Biochemistry. A lef K., Nannipieri P. (eds), Academic Press. Harcourt Brace & Company, Publishers, London: 335-344.

318 J. Wyszkowska, J. Kucharski ANDERSON T.A., KRUGER E.L.,COATS J.R. 1994: Enhanced degradation of mixture of three herbicides in rhizosphere of a herbicide-tolerant plant. Chemosphere. 28(8): 1551-1557. BALICKA N. 1983: Różne formy wzajemnego oddziaływania drobnoustrojów z herbicydami. Post. Mikrobiol. 22(3/4): 291-299. BRASCHI I., PUSINO A., GESSA C., BOLLAG J.M. 2000: Degradation of primisulfuron by a combination of chemical and microbiological processes. J. Agric. Food Chem. 48: 2565-2571. DIGARK M., OZCELIK S. 1998: Effect of some pesticides on soil microorganisms. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 60: 916-922. FENGLEROWA W. 1965: Simple method for counting Azotobacter in soil samples. Acta Microb. Polon. 14(2): 203-206. FURCZAK J. KOŚCIELSKA D. 1997: Ocena ubocznego oddziaływania fungicydu tetrakonazolu na grzyby saprofityczne oraz aktywność biochemiczną gleby piaszczystej i gliniastej. Rocz, Glebozn. 48: 49-58. GRIFFITHS В. S., RITZ K., WHEATLEY R., KUAN H.L, BOAG B., CHRISTENSEN S., EKE- LUND F., SORENSEN S. 2001: Response of sorption processes of MCPA to the amount and origin of organic matter in a long-term experiment. Europ. J. Soil Sei. 52: 279-286. HEYDARI A., MISAGHI I.J., MCCLOSKEY W.B. 1997: Effects of three soil-applied herbicides on populations of plant disease suppressing bacteria in the cotton rhizosphere. Plant & Soil. 195 (1): 75-81. JOHNSEN K., JACOBSEN C. S., TORSVIK V., SORENSEN J. 2001 : Pesticide effects on bacterial diversity in agricultural - a review. Biol. Fertil. Soils. 33: 443-453. KASZUBIAK H, MUSZYŃSKA М., DURSKA G. 1994: Evaluation of microbial response to herbicides using various methods. Pol. J. Soil Sei. 27(2): 131-136. KISS S. 1999: Enzymology of silos inoculated with microorganisms. Studia Universitatis Babes-Bolyai, Biologia. 44(1-2): 3-45. KLIMACH D., WIECZOREK W. 1998: Ocena wpływu kilku środków ochrony roślin na wybrane organizmy glebowe. Progress in Plant Protect. 38(2): 587-589. KUCHARSKI J. 1997: Relacje między aktywnością enzymów a żyznością gleby. Drobnoustroje w środowisku, występowanie, aktywność i znaczenie (red. W. Barabasz), AR Kraków: 327-348. MARTIN J. 1950: Use of acid rose bengal and streptomycin in the plate method for estimating soil fungi. Soil Sei. 69: 215-233. МОСЕК A., DRZYMAŁA S.,.MASZNER P. 1997: Geneza, analiza i klasyfikacja gleb. AR Poznań: 414. MOORMAN T. B., COWAN J. K., ARTHUR E. L., COATS J. R. 2001 : Organic amendements to enhance herbicide biodégradation in contaminated soils. Biol. F ertil Soils 33: 541-545. NOWAK A., ZBIEĆ I., GAWIŃSKA H., HREBIEŃ T. 1999: Wpływ niektórych herbicydów pirydynowych na liczebność drobnoustrojów oraz zawartość biomasy żywych mikroorganizmów w glebie. Foil. Univ. Agric. Stetin. 201 Agricultura 78: 243-252. NOWAK J. 1996: Interakcje między biodegradacją tetrachlorwinfosu i chlorfenwinfosu a ilością biomasy żywych mikroorganizmów w różnych warunkach temperatury i wilgotności gleby. Zesz. Nauk. AR Szczecin. 173. R o ln ic zo 63: 191-199. ÖHLINGER R. 1996: Dehydrogenase Activity with the Substrate TTC. W: Methods in Soil Biology. Schinner F., Öhlinger R., Kandeler E., Margesin R. (eds), Springer Verlag Berlin Heidelberg: 241-243. ONTA H., HATTORI T. 1983: Oligotrophic bacteria on organic debris and plant roots in paddy field. Soil Biol. Biochem. 1: 1-8. PARKINSON D., GRAY F.R.G., WILLIAMS S.T. 1971 : Methods for studying the ecology of soil microorganism. Blackweel Scientific Publications Oxford and Edinburgh, IBP Handbook: 19. PĘDZI WILK Z. 1995: The numbers and the fungistatic activity of Actinomycetes in different soils supplemented with pesticides and organic substances. Pol. J. Soil Sei. 28(1): 45-52. STATSOFT, INC. 2001: STATISTICA (data analysis software system), version 6. www.statsoft.corm

Biologiczne właściwości gleby zanieczyszczonej Chwastoxem Trio 540 SL 319 WĘGOREK W. 1994: Badanie wpływu pestycydów na środowisko rolnicze. Post. Nauk Roln. 2: 59-64. WINOGRADSKI S. 1953: Mikrobiologia gleby. PWRiL, Warszawa: 843 ss. WYSZKOWSKA J. 2002: Microbiological properties of soil contaminated with the herbicyde Treflan 480 EC. Pol. J. Natur. Sei. 10(1): 58-70. WYSZKOWSKA J. 2002: Number of cellulolytic, ammonifying, nitrogen immobilizing and^zotobacter sp. bacteria in soil contaminated with Treflan 480 EC. Pol. J. Natur. Sei. 10(1): 71-83. WYSZKOWSKA J. 2002: Soil contamination with chromium and its enzymatic activity and yielding. Pol. J. Environ. Stud. 11(1): 79-84. Prof. dr hab. Jan Kucharski Katedra M ikrobiologii, Uniwersytet Warmińsko-Mazurski PI. Łódzki 3, 10-727 Olsztyn-Kortowo