(12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) (13) T3 (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:

Transkrypt

1 RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP (13) T3 (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: (51) Int. Cl. G01N33/68 ( ) (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej Europejski Biuletyn Patentowy 2007/31 EP B1 (54) Tytuł wynalazku: Metoda diagnostyczna do przewidywania odrzucania przeszczepu nerek (30) Pierwszeństwo: IT2003FI (43) Zgłoszenie ogłoszono: Europejski Biuletyn Patentowy 2005/49 (45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: Wiadomości Urzędu Patentowego 12/2007 (73) Uprawniony z patentu: Universita' Degli Studi di Firenze, Firenze, IT (72) Twórca (y) wynalazku: PL/EP T3 GALLI Andrea, Firenze, IT ROMAGNANI Paola, Firenze, IT SERIO Mario, Bagno a Ripoli, IT SURRENTI Calogero, Bagno a Ripoli, IT (74) Pełnomocnik: Przedsiębiorstwo Rzeczników Patentowych Patpol Sp. z o.o. rzecz. pat. Kossowska Janina Warszawa 130 skr. poczt. 37 Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).

2 Opis Dziedzina wynalazku [0001] Niniejszy wynalazek dotyczy metody diagnostycznej in vitro do przewidywania odrzucania przeszczepu nerki. Stan techniki [0002] Parametrem, który dzisiaj można stosować do modulowania terapii immunosupresyjnej jest PRA (panel reaktywnych przeciwciał). [0003] W publikacjach USA 2002/ i USA 2001/ opisano zastosowanie poziomu IP-10 po przeszczepie nerek jako markera odrzucania przeszczepu nerek. [0004] W publikacji Bertoni i in., High pre-transplant serum levels CXCL 10 predict early renal allograft failure Transplantationmedizin: Organ der Deutschen Transplantation Gesellschaft 2003 Germany, vol. 15, nr 2, 2003, str , donoszono, że wysokie przedtransplantacyjne poziomy CXCL10 w surowicy są klinicznie użytecznym markerem przewidywania odrzucania i niepowodzenia w przeszczepie nerek. Dokument ten opublikowano po 9 października 2003, tj. po dacie pierwszeństwa niniejszego zgłoszenia. Opis figur [0005] Na Fig. 1 przedstawiono zmniejszenie produkcji IP-10 w pierwotnych hodowlach komórek gwiaździstych traktowanych rosiglitazonem i pioglitazonem. Na Fig. 2 przedstawiono zahamowanie poziomów IP-10 przez traktowanie komórek mezangialnych wzrastającymi dawkami rosiglitazonu. Na Fig. 3 przedstawiono hamujące działanie rosiglitazonu na poziomy IP-10 wywołane γ-interferonem w komórkach nabłonkowych traktowanych wzrastającymi dawkami rosiglitazonu. [0006] Na wszystkich 3 figurach kolumna pierwsza (0) wskazuje poziomy IP-10 po stymulacji INF-γ i TNF-α w nieobecności TzD. Szczegółowy opis wynalazku [0007] Nieoczekiwaną dziedziną zastosowania chemokin indukowalnych interferonem γ jest możliwość ich zastosowania jako surowiczego markera do przewidywania immunologicznej wrażliwości u pacjenta, który poddawany jest przeszczepowi narządu. [0008] Stwierdziliśmy, że poziom IP-10 (CXCL-10) u pacjentów z przeszczepami pozwala na przewidywanie odrzucenia alloprzeszczepu z wysoką dokładnością. [0009] Jak wykazano na modelach zwierzęcych, chemokina IP-10 faktycznie odgrywa ważną rolę w patogenezie ostrego i przewlekłego odrzucenia alloprzeszczepu. [0010] IP-10 odgrywa podwójną rolę biologiczną: stymuluje migrację limfocytów, makrofagów, komórek dendrytowych i innych komórek immunokompetentnych oraz reguluje fizjopatologię naczyń przez indukowanie rozrostu mezangium i zahamowanie wzrostu śródbłonka. Te funkcje biologiczne odgrywają fundamentalną rolę w ostrym i przewlekłym odrzucaniu alloprzeszczepu i razem stanowią główną przyczynę śmiertelności i utraty przeszczepionego narządu. [0011] W oparciu o opisane wyżej dowody eksperymentalne sformułowaliśmy hipotezę, że podwyższony przedtransplantacyjny poziom krążącego w krwiobiegu IP-10 (w związku z przewlekłym zapaleniem stymulowanym przez dializę i uremię) może spowodować podwyższone ryzyko odrzucenia alloprzeszczepu. A zatem, przed operacją przeszczepu nerek u 300 pacjentów zmierzyliśmy poziomy CXCL-10 w surowicy, które następnie monitorowano przez 5 lat po zabiegu chirurgicznym. Grupa kontrolna liczyła 50 zdrowych pacjentów. U zdrowych pacjentów poziomy IP-10 wynosiły 84,4 ± 29,9 pg/ml, zaś u pacjentów z przeszcze- 1

3 pem poziomy te mieściły się w zakresie 137,6 ± 123,2 pg/ml. Przedtransplantacyjne poziomy IP-10 były wyższe u pacjentów, którzy utracili alloprzeszczep (130 ± 116 pg/ml u pacjentów bez utraty przeszczepu w stosunku do 200 ± 163 pg/ml u pacjentów z utratą). U pacjentów, którzy utracili nerkę w ciągu pierwszego roku obserwowano wyższe poziomy przedtransplantacyjne (211 ± 165,1 vs. 130,6 ± 116 pg/ml). Krzywe przeżycia według Kaplan-Meier, obliczone dla 300 pacjentów podzielonych na cztery grupy (centyle) w oparciu o przedtransplantacyjne poziomy IP-10, wykazały postępujące zmniejszenie przeżycia przeszczepionego narządu w ciągu 5 lat, zgodnie z wartościami IP-10 (97,3%, 94,0%, 93,3%, 85,3% przeżycia <0,05 we wszystkich grupach; p <0,01 w grupie 4 vs. 1). [0012] Pomiędzy grupą z najwyższymi przedtransplantacyjnymi poziomami IP-10 i grupą z poziomami najniższymi zaobserwowano dużą różnicę w utracie alloprzeszczepu (14,7% vs. 2,7%, p<0,05). Różnice te były spowodowane wystąpieniem z większą częstością odrzucenia u pacjentów z najwyższymi przedtransplantacyjnymi poziomami IP-10. [0013] W oparciu o te dane wyciągnięto wniosek, że przedtransplantacyjne poziomy IP-10 mogą pomóc w rozpoznaniu pacjentów z wyższym ryzykiem wystąpienia ostrego lub przewlekłego odrzucenia, a tym samym utraty przeszczepu. Aby uniknąć odrzucenia, pacjentów takich można leczyć silniejszymi środkami immunosupresyjnymi. [0014] Na podstawie zamieszczonych powyżej rozważań, oczywiste jest że obecność we krwi wyższych poziomów IP-10 niż poziomy obserwowane u zdrowych pacjentów stanowi użyteczny wskaźnik do wytypowania prawdopodobieństwa odrzucenia alloprzeszczepu. Tak więc, oznaczenia poziomów IP-10 stanowi nową metodę diagnostyczną do tego celu. Zastrzeżenia 1. Metoda diagnostyczna in vitro do przewidywania odrzucania przeszczepu nerek, w której poziomy IP-10 we krwi u pacjentów przed przeszczepem porównuje się ze średnimi poziomami u zdrowych osobników i w której przez podwyższony przedtransplantacyjny poziom IP-10 można rozpoznać pacjentów z wyższym ryzykiem wystąpienia ostrego lub przewlekłego odrzucenia, a tym samym utraty alloprzeszczepu. 2

4 Fig. 1 3

5 Fig. 2 (mikrom) 4

6 Fig. 3 (mikrom) 5

7 ODNIESIENIA CYTOWANE W OPISIE Listę cytowanych przez zgłaszającego odniesień zamieszczono jedynie dla wygody czytającego. Lista ta nie stanowi części europejskiego dokumentu patentowego. Niezależnie od uwagi, którą poświęcono w celu skompilowania odniesień, nie wyklucza się błędów i pomyłek, a zatem EPO zrzeka się odpowiedzialności w tym względzie. Cytowane w opisie dokumenty patentowe USA A [0003] USA A [0003] Cytowana w opisie literatura niepatentowa BERTONI i in., High pre-transplant serum levels of CXCL 10 predict early renal allograft failure. Transplantationmedizin: Organ der Deutschen Transplantation Gesellschaft 2003 Germany, 2003, vol. 15 (2), [0004] 6