GEN FACTOR No 04, No 05, No 06

Transkrypt

1 GEN FACTOR No 04, No 05, No 06 MECHANIZM DZIAŁANIA DOKUMENT PRZEZNACZONY DO ROZPOWSZECHNIANIA (dokument publiczny, wersja 2.2, Warszawa 12-go maja 2013)

2 Nano- cząstki Colostrum, stabilizowanego i bioaktywnego, do stosowania zewnętrznego w celu pielęgnacji kosmetycznej skóry z problemami, takimi jak łuszczyca (psiorasis), atopowe zapalenie skóry (dermaaas), bielactwo (vitligo), fotodermatoza, poparzenia posłoneczne oraz ogólnie wspomożenia procesu gojenia ran i podrażnień. Nano- cząstki Colostrum zbieranego powyżej 70 godziny od czasu wystąpienia laktacji, czyli z najwyższym stężeniem laktoferyny, zwanym białkiem immunopotencialnym. ABSTRAKT Białka pochodzące z krowiego Colostrum zwanego potocznie siarą, czyli wydzieliny gruczołu laktacyjnego, stabilizowane są kwasem hialuronowym oraz wprowadzane jako składnik, substancja wiodąca do preparatów linii Genfactor o numerach 04, 05 i 06 stosowanych w pielęgnacji kosmetycznej skóry ze zmianami zapalnymi w celu złagodzenia świądu i zaczerwienienia. Badania dotyczące liniii komórkowej keratynocytów wykazują wzmożoną proliferację komórek przy zastosowaniu nano- cząstek białek stabilizowanego Colostrum, która jest kluczowym procesem naprawy uszkodzonej i objętej stanem zapalnym skóry. Różne formuły robocze zawierające nano- cząsteczki Colostrum z oraz bez kwasu hialuronowego zostały poddane badaniu na zdolność regulowania rozkładu tryptofanu oraz formowania neopteryny w niestymulowanych oraz stymulowanych fitohemaglutyniną (PHA) mononuklearnych krwinkach kwi obwodowej (PBMC). Badania te miały na celu sprawdzenie skuteczności dzialania preparatów kosmetycznych z białkami Colostrum. Wyniki testów wskazują, że składniki Colostrum w połączeniu z kwasem hialuronowym są ważnym elementem regulującym odpowiedzi immunologiczne. Przebadano około 300 pacjentów cierpiących z powodu różnych problemów skórnych, począwszy od słonecznego zapalenia skóry (łac. solar dermatts) po egzemę niewiadomego pochodzenia (łac. eczema), różne formy łuszczycy, w tym łuszczycę pospolitą (łac. psoriasis vulgaris) oraz łuszczycę krostkową dłoni i stóp (łac. psoriasis pustulosa palmoplantaris). Z uwagi na obecność znanych czynników wzrostu i przeciwciał naturalnie występujących w Colostrum, a także właściwości gojące kwasu hialuronowego, krem testowano także na pacjentach cierpiących z powodu przewlekłych, trudno gojących się ran, opryszczki wirusowej (łac. herpes) oraz bielactwa (łac. vitligo), będącego przypadłością autoimmunologiczną. Stosowanie preparatu w postaci kremu przyniosło pozytywne rezultaty w pielęgnacji skóry z niektórymi rodzajami łuszczycy, atopowego zapalenia skóry, egzemy o nieznanej etologii, bielactwa oraz gojeniu ran. W grupie, w której krem nie przyniósł pożądanych efektów, nie zaobserwowano żadnych skutków ubocznych.

3 WPROWADZENIE Colostrum jest wydzieliną produkowaną przez gruczoły mleczne ssaków jeszcze przed produkcją mleka (2). Składniki Colostrum dzielą się na dwie grupy: czynniki odpornościowe i czynniki wzrostu. Kluczowymi elementami tych grup są: a) Czynniki odpornościowe: Colostrum zawiera duże ilości białek (takich jak immunoglobuliny A, D, E, G i M), laktoferynę, laktoalbuminę i laktoglobulinę, które regulują odpowiedzi immunologiczne organizmu i wspomagają tym samym w regulację procesu zapalnego. Laktoferyna, białko o właściwościach antywirusowych i antybakteryjnych ze zdolnością do wiązania żelaza, reguluje proces uwalniania cytokin. Receptory laktoferyny wykryto na wielu komórkach krwi i skóry (2-4). W Colostrum znajdują się również cytokiny i polipeptydy bogate w prolinę (PRP), których zadaniem jest regulacja funkcji grasicy poprzez wyraźną stymulację niedoczynnego układu odpornościowego lub hamowanie funkcji układu w przypadku jego nadmiernej aktywności. Cytokiny, takie jak interleukina (IL) regulują czas trwania i intensywność reakcji immunologicznej, wzmagają działanie limfocytów T oraz produkcję immunoglobulin. b) Czynniki wzrostu w Colostrum: Wspomagają wzrost komórek i tkanek poprzez stymulację tworzenia się DNA. Badania wykazują, że czynniki wzrostu w Colostrum mają zdolność zwiększania produkcji limfocytów T i przyspieszają proces gojenia (2-9). Kwas hialuronowy jest wszechobecnym w organizmie ludzkim glikozaminoglikanem o dużej masie cząsteczkowej, biorącym udział w realizacji wielu funkcji fizjologicznych. Istnieją dowody potwierdzające fakt, iż kwas hialuronowy odgrywa pewną rolę w kontekście różnych szlaków patogenetycznych, takich jak zapalenie czy nowotwór. Głównym receptorem kwasu hialuronowego jest białko CD44. Kwas hialuronowy o dużej masie cząsteczkowej ma działanie antyangiogenne, przeciwzapalne i immunosupresyjne, podczas gdy mniejsze oligomery kwasu hialuronowego mają działanie angiogenne, zapalne i stymulujące procesy immunologiczne. Kwas hialuronowy bierze udział w rekrutacji leukocytów w miejscu zapalenia (1). PODSUMOWUJĄC: w związku z powyższym, na główne składniki kremu wybrano Colostrum i kwas hialuronowy.

4 METODY Protokoły Badania In vitro: Badania nad proliferacją komórek prowadzone były z wykorzystaniem stabilizowanych składników Colostrum oraz unieśmiertelnionej linii komórek nabłonka. W celu zbadania przeciwzapalnych właściwości składników zawierających kwas hialuronowy, przy pomocy mitogenu inkubowano niestymulowane oraz stymulowane komórki PBMC z substancjami czynnymi kremu. Pomiar produkcji neopteryny i rozkładu tryptofanu wykonano metodą HPLC. Ponieważ głównym składnikiem komórek PBMC są leukocyty T i makrofagi, pomiar miał na celu określenie zależności pomiędzy limfocytami T, a makrofagami. Pomiar ilości żywych komórek wykonany został z użyciem błękitu trypanu (Blue Trypan) (3). Badania in vivo (z kremem): Pacjenci zostali poproszeni o stosowanie kremu co najmniej dwa razy dziennie: rano i wieczorem. Celem badania była ocena skuteczności i bezpieczeństwa stosowania kremu u osób dorosłych cierpiących na różne choroby skóry. Na 2 tygodnie przed rozpoczęciem badania oraz przez cały okres jego trwania pacjenci nie stosowali kremów miejscowych, sterydów ani fototerapii. Ocena Efekty leczenia zostały poddane ocenie na początku projektu, 7-16 dni oraz 4-6 miesięcy po jego zakończeniu. Ponadto, pacjentów poproszono o wypełnienie kwestonariusza, który został następnie poddany ocenie pod kątem medycznym. Jeżeli istniała taka możliwość, proces dokumentowany był fotografiami. W przypadku wystąpienia jakichkolwiek oznak podrażnienia skóry, pacjenci byli proszeni o natychmiastowe przerwanie kuracji. Dyskusja i wnioski Badania wykazały skuteczność kremu z nano- cząsteczkami Colostrum i kwasem hialuronowym w zakresie proliferacji linii komórek nabłonka (rys. 3), co jest istotne w procesie gojenia się uszkodzonej skóry. Ponadto, krem jest skuteczny w leczeniu wielu chorób skóry i trudnych w gojeniu się odleżyn pooperacyjnych (rys. 4a i 4b), przywraca i pozwala utrzymać kolor skóry u pacjentów cierpiących na bielactwo nawet po upływie 1 roku (rys. 5a- 5c) od pojedynczego zastosowania kremu oraz przynosi natychmiastową ulgę przy uczuciu świądu oraz powoduje zanik stanu zapalnego skóry (rys. 6a- 6b i 7a- 7b) w przypadku łuszczycy i atopowego zapalenia skóry. Gojenie się ran może wynikać z obecności kilku czynników wzrostu znajdujących się w składnikach Colostrum, które są odpowiedzialne za proliferację normalnych komórek nabłonka (9, 10). Kwas hialuronowy posiada ważne właściwości biologiczne i odgrywa istotną rolę w kluczowych procesach fizjologicznych, szczególnie tych dotyczących plastyczności komórek, jak np. zapalenie, reakcje immunologiczne, angiogeneza i proces gojenia się ran. Te zróżnicowane funkcje fizjologiczne związane są z interakcją z mniej lub bardziej określonymi receptorami membranowymi lub produkcją różnej wielkości fragmentów kwasu hialuronowego w wyniku, np. miejscowego urazu lub stanu zapalnego, które wykazują

5 określone właściwości odpowiednio do ich rozmiaru (11). Ponadto, badania wykazały, że kwas hialuronowy redukuje TNF- α oraz zmiany morfologiczne odpowiadające stanowi zapalnemu zarówno w komórkach naskórka ludzkiego A431, jak i w mysich fibroblastach (12). Kwas hialuronowy (2, 12, 13) i składniki Colostrum (14) wchodzą w reakcję ze szlakami immunopatologicznymi obejmującymi cytokiny prozapalne, takie jak IFN- γ i TNF- α. Rezultaty leczenia zaobserwowane u pacjentów cierpiących na choroby zapalne skóry, takie jak łuszczyca oraz atopowe zapalenie skóry (Rys. 6 i 7) można wyjaśnić supresyjnymi właściwościami produkcji neopteryny i kinureniny przez składniki Colostrum oraz TNF- α przez kwas hialuronowy. Colostrum i kwas hialuronowy stymulują wytwarzanie neopteryny oraz rozkład tryptofanu w niestymulowanych komórkach PBMC (Rys. 9). W ten sposób można leczyć atopowe zapalenie skóry. Colostrum i kwas hialuronowy przeciwdziałają aktywacji kaskad w komórkach PBMC stymulowanych mitogenami (nie przedstawiono danych), co może przyczynić się do wyleczenia łuszczycy. Powyższe właściwości mogą mieć związek z wynikami pacjentów przyjmujących leki zawierające Colostrum.

6 WYNIKI Nano- cząsteczki colstrum Rys. 1. Obraz AFM: stabilizowane proteiny Colostrum (nano- cząsteczki). GEN FACTOR Rys. 2. Gen Factor No 04, Gen Factor No 05 - kremy zawierające stabilizowanych białek Colostrum.

7 Oznaczanie proliferacji przy użyciu różnych preparatów stabilizowanych białek Colostrum oraz unieśmiertelnionej linii komórek naskórka z zastosowaniem testu Alamar Blue. Rys. 3. Oznaczanie proliferacji komórek naskórka przy użyciu 3 preparatów stabilizowanego Colostrum (1+E, 2+E, 3+E). Na podstawie wyników badania, w kremie zastosowano preparat stanowiący próbkę 1. Liczby 1, 5 i 10 oznaczają stężenie białek Colostrum w komórkach; wyższe stężenie białek wydaje się hamować proliferację komórek.

8 Odleżyny pooperacyjne Rys.4A. Przed zastosowaniem kremu. Rys.4B. 8 dni po zastosowaniu kremu. Działanie kremu zawierającego stabilizowane kolostrum u pacjenta cierpiącego na bielactwo Rys. 5A. Rys. 5B. Rys. 5C. Rys. 5A. Przed zastosowaniem kremu. Rys. 5B. Przywrócenie koloru twarzy w 4 tygodnie po zastosowaniu kremu. Rys. 5C. Utrzymanie koloru twarzy rok po zastosowaniu kremu.

9 Działanie kremu zawierającego stabilizowane kolostrum u pacjenta cierpiącego na łuszczycę od 40 lat Rys. 6A. Miesiąc po rozpoczęciu stosowania. Rys 6B. 4 miesiące po rozpoczęciu stosowania. Zastosowanie kremu zawierającego stabilizowane Colostrum u 14- letniego pacjenta cierpiącego na atopowe zapalenie skóry Rys. 7A. Przed nałożeniem kremu. Rys. 7B. 5 dni po nałożeniu kremu.

10 Szlak typu TH- 1 wywołujący zapalenie i stres oksydacyjny Rys. 8. Potencjalne działanie składników Colostrum i kwasu hialuronowego w procesie redukcji świądu i stanu zapalnego (zmodyfikowany z Ref. 14) Opis: Aktywowane komórki wytwarzają IFN- γ. Podczas reakcji immunologicznej na poziomie komórkowym, aktywowane limfocyty T podtypu TH1 uwalniają interferon- γ, który w ludzkich makrofagach (MΦ) i komórkach dendrytycznych (DC) stymuluje GTP- cyklohydrolazę (GCH) oraz ID odpowiedzialne za produkcję neopteryny oraz przemianę tryptofanu w kinureninę. Makrofagi ludzkie (MΦ) produkują reaktywne formy tlenu aktywujące elementy przekazu sygnału ulegające reakcjom redoks, jak np. czynniki jądrowe kb przyspieszające produkcję cytokin wywołujących stan zapalny, np. TNF- α.

11 Produkcja neopteryny i rozkład tryptofanu wywołane działaniem colostrum. Rys. 9. Stosunek kinureniny i tryptofanu oraz wytwarzanie neopteryny wyrażone w % niestymulowanej kontroli (C) w komórkach PBMC, traktowanych lub nie, zwiększaną dawką krowiego Colostrum z różną zawartością laktozy i laktoferyny przez 48h. Wyniki przedstawiono w formie uśrednionej ± S.E.M. z trzech niezależnych testów przeprowadzonych dwukrotnie (*p <0.05).

12 REFERENCJE 3. Berbis, P. Ann Dermatol Venereol Apr;137 Suppl 1:S Elfstrand L., Lindmark M. H., Paulsson M., Nyberg L., Åkesson B. (2002). 5. Jenny, M., Pedersen, N.R., Hidayat, B., Fuchs, D. (2010). 6. Galli S.J., Nakae, S. (2003). 7. Kelly G.S. (2003). 8. Korhonen H., Marnila P., Gill H.S. (2000). 9. Korhonen H., Pihlanto A. (2007). 10. Matsumoto H., Shimokawa Y., Ushida Y., Toida T., Hayasawa H. (2000). 11. Paus R., Schmeiz M., Tamas B., Steinhoff M. (2007). 12. Playford R.J., Macdonald C.E., and Johnson (2000). 13. Solomons N.W., (2002) Ann Dermatol Venereol Apr; 137 Suppl 1:S Deureure O. (2010) Ann Dermatol Venereol Apr; 137 Suppl 1:S Neuman M.S., Oruna L., Coto G., Lago G., Nanau R., Vincent M. Clin Biochem Schroecknadel K., Fischer B., Schennach H., Weiss G. and Fuchs D. (2007) 1: