RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO (19) PL (11) PL/EP 2638918 (96) Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego: 05.03.2013 13157889.0 (13) (51) T3 Int.Cl. A61K 48/00 (2006.01) Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (97) O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono: 31.08.2016 Europejski Biuletyn Patentowy 2016/35 EP 2638918 B1 (54) Tytuł wynalazku: Sposób i urządzenie do leczenia zaburzeń cholesterolu we krwi (30) Pierwszeństwo: 12.03.2012 US 201213418123 (43) Zgłoszenie ogłoszono: 18.09.2013 w Europejskim Biuletynie Patentowym nr 2013/38 (45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono: 31.01.2017 Wiadomości Urzędu Patentowego 2017/01 (73) Uprawniony z patentu: Grifols, S.A., Barcelona, ES (72) Twórca(y) wynalazku: PL/EP 2638918 T3 VICTOR GRIFOLS LUCAS, Barcelona, ES VICTOR GRIFOLS ROURA, Barcelona, ES (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Rafał Witek WTS RZECZNICY PATENTOWI WITEK, ŚNIEŻKO I PARTNERZY SP. P. ul. R. Weigla 12 53-114 Wrocław Uwaga: W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).
Opis Tło wynalazku [0001] Niniejszy wynalazek dotyczy sposobu usuwania całkowitego cholesterolu, cholesterolu lipoprotein o małej gęstości (LDL) i/lub cholesterolu lipoprotein o wysokiej gęstości (HDL) z pełnej krwi. Dokładnie, urządzenie obejmuje środki do rozdzielania osocza krwi od czerwonych ciałek krwi z wymienionej pełnej krwi. [0002] Plazmafereza stanowi powszechną procedurę medyczną, za pomocą której osocze jest oddzielane od pełnej krwi. Jest stosowana do leczenia pacjentów cierpiących na różne przewlekłe choroby, a obejmuje wymianę objętości 2,5 l lub więcej. Biorąc pod uwagę dużą objętość, kiedy do leczenia stanów chorobowych stosuje się plazmaferezę, po oddzieleniu osocza od pełnej krwi, krew może zostać zawrócona do ciała z płynami zastępczymi, takimi jak świeże osocze i/lub roztwór albuminy. Plazmaferezę stosuje się również w celu uzyskania pobrań ludzkiego osocza. W takich przypadkach pobrana objętość jest nie większa niż 880 ml, a krew można zawrócić z lub bez płynów zastępczych. [0003] Kiedy pacjentów leczy się za pomocą terapeutycznej plazmaferezy, kateter umieszcza się w dużej żyle, tak jak na ramieniu, a drugi kateter umieszcza się w innej żyle, tak jak w żyle na stopie lub dłoni. Krew przepływa następnie przez ciało poprzez kateter i poprzez separator. Osocze jest oddzielane od pełnej krwi. Krew bez osocza, pożądane płyny i opcjonalnie płyny zastępcze można zawrócić do ciała przez drugi kateter. Jednak do pobrań krwi stosuje się automatyczny sprzęt do plazmaferezy, w którym potrzebne jest pojedyncze wkłucie dożylne, ponieważ krew usuwa się i zawraca przez to samo miejsce. [0004] Istnieje kilka różnych rodzajów leczniczej plazmaferezy, w tym: (i) wymiana osocza, gdzie oddzielone i wyrzucone osocze zastępuje się osoczem świeżym lub roztworem albuminy, (ii) plazmafereza podwójnej filtracji, w której osocze przechodzi przez separator o małych porach, tak aby selektywnie usunąć białka o dużej masie cząsteczkowej lub (iii) adsorpcja osocza, w której osocze wpływa na kolumnę adsorbującą osocze, na której można zaadsorbować i usunąć niektóre substancje. W plazmaferezie do pobrań osocza stosuje się jednak najczęściej wirowanie (np. system obróbki krwi Haemonetics) lub wirowanie z prostym filtrem (np. systemy obróbki krwi Fenwal). [0005] Znane jest zastosowanie aferezy terapeutycznej lipoprotein niskiej gęstości do leczenie pacjentów chorych na rodzinną hipercholesterolemię. Evans, Katie D., "Low- Density Lipoprotein Apheresis in Patients with Severe Familial Hypercholesterolemia Refractory to, or Intolerant of, Lipid- Lowering Drug Therapy: Preventing the Onset or Progression of Cardiovascular Disease" (2011). School of Physician Assistant Studies. Paper 268. W takich badaniach zastosowano aferezę lipoprotein o niskiej gęstości (LDL) jako dodatek do leków obniżających [poziom] lipidów, a aferezę podawano od razu do trzech razy na tydzień. Id w 10. Jednak obniżeniu poziomów LDL towarzyszy zazwyczaj obniżenie z zróżnicowanym stopniu poziomów lipoprotein o wysokiej gęstości (HDL). Id w 9. Taki efekt może być niepożądany, szczególnie u pacjentów z granicznymi i/lub niskimi poziomami HDL.
2 [0006] Jak omówiono w Yokoyama, S. et al., "Selective Removal of Low Density Lipoprotein by Plasmapheresis in Familial Hypercholesterolemia", (1985). Artheriosclerosis t. 5, nr 6, str. 613-622. Plazmaferezę leczniczą przeprowadzono u pacjentów stosując filtry membranowe o włóknach pustych w środku lub selektywną absorpcję lipoprotein o bardzo niskiej gęstości w celu selektywnego usunięcia LDL. Id. w 613. Ustalono, że separatory osocza z filtrami membranowymi nie są odpowiednie dla pacjentów hiperchylomikronemicznych. Id w 616. Choć poziomy LDL były obniżone, nie było statystycznie istotnej zmiany poziomów HDL, a nieco nadmierne przywracanie HDL przypisano ponownemu zatężaniu osocza. Id w 619. [0007] Pożądany byłby schemat leczenia, w którym okresowa plazmafereza wymaga mniejszych objętości niż tradycyjna plazmafereza terapeutyczna, krótszego czasu trwania i pojedynczego punktu wkłucia, obniża poziomy LDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami LDL i/lub zwiększa poziomy HDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami HDL. Podsumowanie wybranych cech [0008] Sposób leczenia pacjentów chorych na zaburzenia cholesterolowe obejmuje podawanie pierwszego schematu leczenia obejmującego dwie lub trzy rundy plazmaferezy u pacjenta z nieprawidłowymi poziomami całkowitego cholesterolu, nieprawidłowymi poziomami LDL i/lub nieprawidłowymi poziomami HDL mierzonymi przed leczeniem. Sposób obniża poziomy LDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami LDL i podwyższa poziomy HDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami HDL. Następną rundę plazmaferezy można przeprowadzić około 2 do około 14 dni po poprzedniej rundzie plazmaferezy. Przykładowo, po pierwszej rundzie w dniu 1 można przeprowadzić drugą rundę w dniu 4, trzecią rundę w dniu 8, a czwarta runda może być w dniu 11. Krótki Opis Rysunków [0009] Na Figurze 1 przedstawiono urządzenie do zastosowania w sposobie według niniejszego wynalazku. Na Figurze 2 przedstawiono wykres ilustrujący proces separacji z pełnej krwi. Na Figurze 3 przedstawiono wykres ilustrujący wpływ plazmaferezy na całkowity cholesterol (mg/dl) u dawczyń. Na Figurze 4 przedstawiono wykres ilustrujący wpływ plazmaferezy na całkowity cholesterol (mg/dl) u dawców. Na Figurze 5 przedstawiono wykres ilustrujący zmianę z poziomu podstawowego, zarówno oszacowaną, jak i zaobserwowaną, w całkowitym cholesterolu dla dawczyń. Na Figurze 6 przedstawiono wykres ilustrujący zmianę z poziomu podstawowego, zarówno oszacowaną, jak i zaobserwowaną, w całkowitym cholesterolu dla dawców. Na Figurze 7 przedstawiono wykres ilustrujący zmianę w cholesterolu LDL w oparciu o liczbę dni między terapiami plazmaferezą dla dawczyń.
3 Na Figurze 8 przedstawiono wykres ilustrujący zmianę w cholesterolu LDL w oparciu o liczbę dni między terapiami plazmaferezą dla dawców. Na Figurze 9 przedstawiono wykres porównujący zmiany zaobserwowane i oszacowane na podstawie modelu GEE z poziomu podstawowego cholesterolu LDL u dawczyń. Na Figurze 10 przedstawiono wykres porównujący zmiany zaobserwowane i oszacowane na podstawie modelu GEE z poziomu podstawowego cholesterolu LDL u dawców. Na Figurze 11 przedstawiono wykres ilustrujący zmianę w cholesterolu HDL dla dawczyń w oparciu o liczbę dni między terapiami plazmaferezą. Na Figurze 12 przedstawiono wykres ilustrujący zmianę w cholesterolu HDL w oparciu o liczbę dni między terapiami plazmaferezą dla dawców. Na Figurze 13 przedstawiono wykres porównujący zmiany zaobserwowane i oszacowane na podstawie modelu GEE z poziomu podstawowego cholesterolu HDL u dawczyń. Na Figurze 14 przedstawiono wykres porównujący zmiany zaobserwowane i oszacowane na podstawie modelu GEE z poziomu podstawowego cholesterolu HDL u dawców. Opis szczegółowy [0010] Urządzenie do usuwania cholesterolu lipoprotein o wysokiej gęstości (LDL) z pełnej krwi przedstawiono na Figurze 2. Urządzenie może zawierać obudowę (1), port wejściowy (3) do odbierania pełnej krwi od dawcy, środki do oddzielania osocza od składników komórkowych krwi (2) oraz środki do zawracania składników komórkowych krwi do pierwszego portu wyjściowego (4), skąd składniki komórkowe krwi opuszczają urządzenie oraz drugi port wyjściowy (5), z którego urządzenie opuszcza osocze. Korzystnie, wymienionymi środkami do oddzielania osocza od składników komórkowych krwi są środki do wirowania (tj. wirówka). Korzystniej, wymienionymi środkami do oddzielania osocza od składników komórkowych krwi są środki do filtrowania (tj. filtr, taki jak ten zastosowany w plazmaferezie podwójnej filtracji). Urządzenie według niniejszego wynalazku można stosować w sposobie pozaustrojowego obniżania cholesterolu tak, jak tu opisano. Na Figurze 1 przedstawiono schemat pozaustrojowego oddzielania osocza i czerwonych ciałek krwi z pełnej krwi. Pełna krew zawarta jest w pojemniku na krew (6) i jest przeciskana przez urządzenie do oddzielania (8), opcjonalnie przez pompę (7). Następnie osocze oddziela się od czerwonych krwinek i opuszcza ono urządzenie przez port ujścia osocza (9). Czerwone krwinki przesyła się opcjonalnie do pojemnika na pełną krew (6) oraz opcjonalnie razem z roztworem soli fizjologicznej (10), dodaje po ujściu do urządzenia w razie potrzeby. [0011] Niniejszy wynalazek dotyczy komórek pełnej krwi bez osocza, przy czym osocze oddziela się od komórek pełnej krwi poprzez plazmaferezę pozaustrojową, do zastosowania w leczeniu zaburzeń związanych z cholesterolem, przy czym wymienione komórki pełnej krwi podaje się pacjentowi z nieprawidłowym pełnym cholesterolem, nieprawidłowymi poziomami LDL i/lub nieprawidłowymi poziomami HDL zmierzonymi przed leczeniem, w pierwszym schemacie leczenia obejmującym dwie lub większą liczbę rund, przy czym schemat pierwszego leczenia obniża poziomy LDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami LDL i/lub podwyższa poziomy HDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami HDL oraz
4 przy czym każda kolejna runda pierwszego schematu leczenia utrzymuje nowy, niższy poziom całkowitego cholesterolu, niższy poziom LDL i/lub wyższy poziom HDL. [0012] Każdą kolejną rundę pierwszego schematu leczenie można przeprowadzić od około 2 do około 4 dni po poprzedniej rundzie; lub każdą kolejną rundę pierwszego schematu leczenia można przeprowadzić od około 5 do około 9 dni po poprzedniej rundzie; lub każda kolejną rundę pierwszego schematu leczenia przeprowadza się od około 10 do około 14 dni po poprzedniej rundzie. [0013] Pierwszy schemat leczenia może obejmować zastosowanie co najmniej jednej statyny przed, w trakcie i/lub po wymienionym pierwszym schemacie leczenia. Komórki pełnej krwi mogą do zastosowania zawierać dodatkowo roztwór soli fizjologicznej. [0014] Objętość krwi poddawanej zabiegowi w każdej rundzie pierwszego schematu leczenia dla uzyskania wymienionych komórek pełnej krwi może wynosić mniej niż około 1000 ml. [0015] Pierwszy schemat leczenia obniża poziomy LDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami LDL przed pierwszym schematem leczenia o od około 5 mg/dl do około 45 mg/dl. [0016] Pierwszy schemat leczenia obniża poziomy LDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami LDL przed pierwszym schematem leczenia o od około 10 mg/dl do około 35 mg/dl. [0017] Pierwszy schemat leczenia podwyższa poziomy HDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami HDL przed pierwszym schematem leczenia o od około 1 mg/dl do około 5 mg/dl. [0018] Pierwszy schemat leczenia podwyższa poziomy HDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami HDL przed pierwszym schematem leczenia o od około 2 mg/dl do około 4 mg/dl. [0019] Pierwszy schemat leczenia trwa przez co najmniej około 2 tygodnie lub więcej, obejmując ponadto dopasowanie pierwszego schematu leczenia w oparciu o poziomy całkowitego cholesterolu, LDL i/lub HDL u pacjenta. [0020] W znaczeniu tu zastosowany, wyrażenie "zaburzenia cholesterolowe" oznacza zaburzenia w których poziomy całkowitego cholesterolu, LDL i HDL są nieprawidłowe i obejmuje zaburzenia takie jak hipercholesterolemia, hiperlipidemia, dyslipidemia i/lub każde inne zaburzenie, w którym objawami są nieprawidłowe poziomy cholesterolu całkowitego, LDL i/lub HDL. [0021] Wyrażenie "hipercholesterolemia", w znaczeniu tu zastosowanym, oznacza zaburzenie cholesterolowe, w którym poziomy cholesterolu we krwi są wyższe niż normalnie, jak zdefiniowano przez American Heart Association. [0022] Wyrażenie "hiperlipidemia", w znaczeniu tu zastosowanym, oznacza zaburzenie metabolizmu lipidów, które skutkuje nieprawidłowo wysokimi poziomami cholesterolu, trójglicerydów i lipoprotein we krwi. [0023] Wyrażenie "dyslipidemia", w znaczeniu tu zastosowanym, oznacza zaburzenie, w którym pacjent doświadcza wzrostu poziomu LDL i spadku HDL. [0024] Wyrażenie "wysoki całkowity cholesterol", w znaczeniu tu zastosowanym, oznacza poziomy całkowitego cholesterolu wyższe niż lub równe 240 miligramom na decylitr (mg/dl), jak zdefiniowano przez American Heart Association (AHA) oraz National Heart, Lung, and Blood Institute (NHLBI). [0025] Wyrażenie "wartość graniczna całkowitego cholesterolu", w znaczeniu tu zastosowanym oznacza poziom całkowitego cholesterolu mieszczący się w zakresie od około 200 mg/dl do około 239 mg/dl, jak zdefiniowano przez American Heart Association.
5 [0026] Wyrażenie "plazmafereza niskoobjętościowa", w znaczeniu tu zastosowanym, oznacza leczenie plazmaferezą obejmujące objętości krwi wynoszące około 1000 ml, korzystnie 800 ml lub mniej. [0027] W znaczeniu tu zastosowanym, wyrażenie "nieprawidłowe poziomy LDL" oznacza poziomy LDL, które są wysokie (tj. wyższe niż około 160 mg/dl, jak zostało zdefiniowane przez American Heart Association) lub wyższe niż pożądane (tj. mieszczą się w zakresie od około 130 do około 159 mg/dl, jak zostało zdefiniowane przez American Heart Association). [0028] Wyrażenie "nieprawidłowe poziomy HDL", w znaczeniu tu zastosowanym, oznacza poziomy HDL które są niskie (tj. niższe niż około 40 mg/dl dla mężczyzn lub mniejsze niż około 50 mg/dl, jak zostało zdefiniowane przez American Heart Association) lub na granicy (tj. od około 40 mg/dl do około 60 mg/dl dla mężczyzn lub od około 50 mg/dl do około 60 mg/dl dla kobiet). [0029] W znaczeniu tu zastosowanym, wyrażenia "komórki pełnej krwi", "czerwone komórki krwi", "składnik komórkowy krwi" oraz "krew bez osocza", między innymi, dotyczy części krwi pozostającej po usunięciu osocza krwi przez procedury takie jak plazmafereza. [0030] Dla oceny wpływów plazmaferezy na poziomy cholesterolu we krwi u dawców osocza, przeprowadzono badanie na wielu różnych pacjentach z nieprawidłowymi i prawidłowymi poziomami cholesterolu. Badanie przeprowadzono w dziewięciu centrach pobraniowych w Stanach Zjednoczonych, a dawców badano przez 16 tygodni. [0031] W protokole zaznaczono, że uczestnicy oddają krew co najmniej raz na tydzień w czasie 16- tygodniowego okresu. Zgodnie z wytycznymi US, krew można oddać do 32 razy w czasie 16- tygodniowego okresu, jednak schemat oddawania był zróżnicowany, tak aby zbadać wpływ różnych okresów czasu między donacjami zarówno dla pacjentów mających nieprawidłowe, jak i prawidłowe poziomy całkowitego cholesterolu, LDL i HDL. [0032] Na początku przed każdym oddaniem krwi pobierano próbki krwi nie na czczo i każdą z próbek analizowano w celu ustalenia całkowitego cholesterolu, poziomu HDL i poziomu LDL. Dawcy wypełnili również krótki kwestionariusz dotyczący czynników związanych z trybem życia, które mogły wpływać na poziomy cholesterolu oraz tego, czy rozpoczęli leczenie obniżające poziom lipidów. [0033] Badanie objęło 663 dawców, którzy w czasie przebiegu badania dokonali łącznie 9 153 donacji krwi. Wszyscy uczestnicy badania byli dawcami po raz pierwszy lub byli wcześniejszymi dawcami, którzy nie dokonali donacji krwi przez co najmniej sześć miesięcy przed rozpoczęciem badania. [0034] Badanie obejmowało zarówno dawców będących mężczyznami, jak i kobietami, w wieku od 18 lat do 69 lat, którzy zostali zakwalifikowani do oddania osocza. W Tabeli 1 podano liczbę dawców pod względem płci, rasy, wieku i masy ciała oraz procent każdej grupy w całości. Tabela 1 Liczba donorów Procent (%) Płeć Mężczyzna 407 61,4 Kobieta 256 38,6 Rasa Kaukaska 304 45,9
6 Liczba donorów Procent (%) Hiszpańska 119 17,9 Afrykańska- Amerykańska 88 13,3 Niedostępne 152 22,9 Wiek (lata) 18-24 263 39,7 25-34 218 32,9 35-44 103 15,5 >45 79 11,9 Masa (lb) ciała <200 427 64,4 200-249 164 24,7 250-299 49 7,4 >300 23 3,5 [0035] W Tabeli 2 przedstawiono poziom całkowitego cholesterolu, poziom LDL, poziom HDL oraz wszystkie donacje z badania od dawców zaangażowanych w badanie. Tabela 2 Grupa Liczba donorów Procent (%) Całkowity Cholesterol* (mg/dl) Wysoki (> 240) 38 5,7 Wyższy niż pożądany (200-239) 132 19,9 Akceptowalny (<200) 493 74,4 LDL* (mg/dl) Wysoki (> 160) 41 6,2 Wyższy niż pożądany (130-159) 112 16,9 Akceptowalny (<130) 510 76,9 HDL* (mg/dl) Niski (< 40, mężczyźni; <50, kobiety) Średni (40-60, mężczyźni; 50-60, kobiety) 228 34,4 341 51,4 Optymalny (>60) 94 14,2 Wszystkie 2-10 296 44,6
7 donacje badaniu w Grupa Liczba donorów Procent (%) 11-20 168 25,3 21-32 199 30,0 * Klasyfikacja AHA/NHLBI-NCEP [0036] Całkowitą liczbę donacji zbadano jako istotną zmienną w czasie badania. [0037] Uważano, że w analizie ograniczonej do rozważania ogólnej zmiany dla pełnej populacji badania możliwe było przeoczenie zmian okresowych wynikających ze specyficznych zmiennych, takich jak liczba obserwacji, dni między donacjami, poziomy podstawowe cholesterolu i inne. [0038] W związku z tym potrzebny był model statystyczny, który: (a) zastosował informację od osób i ich donacji; (b) sprawował kontrolę nad nierównymi udziałami każdej osoby; (c) umożliwił oszacowanie niezależnego udziału każdej zmiennej; oraz (d) zliczał powtarzanie pomiaru wśród osobników oraz inną liczbę obserwacji. [0039] Do analiza danych zastosowano model regresji wielozmiennowych powtarzanych pomiarów z zastosowaniem Uogólnionego Równania Szacowania (GEE). Przy zastosowaniu podejścia GEE, zestaw danych zastosowano do stworzenia modelu do szacowania wpływu plazmaferezy na poziomy cholesterolu u dawców z różnymi poziomami podstawowymi cholesterolu. W modelu bierze się pod uwagę, że prawdopodobne jest, iż pomiary cholesterolu dla danej osoby będą podobne oraz uwzględnia się zróżnicowaną liczbę wizyt kontrolnych. Model umożliwia ponadto analizę pomiaru dokonanych w różnych przedziałach czasowych dla jednego i między różnymi dawcami. [0040] Model ten interpretowano podobnie jak model regresji z wieloma zmiennymi i umożliwił on przetestowanie wpływu każdej niezależnej zmiennej z jednoczesną kontrolą wpływu innych zmiennych. Potencjalne zmienne będące przedmiotem zainteresowania obejmowały płeć, wiek, masę ciała, rasę, poziom podstawowy całkowitego cholesterolu, LDL i HDL, czas między donacjami, liczbę donacji oraz zmiany stylu życia, takie jak dieta i ćwiczenia. [0041] Wszystkie zmienne będące przedmiotem zainteresowania oceniono z zastosowaniem modelu w celu określenia, która zmienna miała istotny wpływ. W końcowym modelu zastosowano poziom podstawowy cholesterolu (3 grupy), dni między donacjami (3 grupy) oraz płeć (2 grupy), co dało 18 różnych kombinacji (3x3x2). [0042] Ustalono, że wiek, rasa, masa ciała i liczba wcześniejszych donacji dawcy miały niewielki wpływ na zmianę cholesterolu. Co więcej, odpowiedzi w kwestionariuszu dotyczącym stylu życia nie wykazały niezależnego wpływu na zmianę cholesterolu. Słuszność modelu sprawdzono poprzez porównanie wyników oszacowanych w modelu GEE z tymi rzeczywiście zaobserwowanymi w zestawie danych. [0043] Wpływ plazmaferezy na poziomy całkowitego cholesterolu u dawczyń i dawców przedstawiono na Figurach 3 i 4. Jak pokazano na Figurze 3, dawczynie mające nieprawidłowe poziomy cholesterolu doświadczyły w czasie badania obniżenia całkowitego cholesterolu w zakresie od około 5 mg/dl do
8 około 50 mg/dl L. Dawczynie przechodzące plazmaferezę z od 2 do 4 dni między sesjami i mające nieprawidłowe poziomy całkowitego cholesterolu doświadczyły największego obniżenia, mieszczącego się w zakresie od około 20 mg/dl do około 50 mg/dl, podczas gdy te przechodzące plazmaferezę z od 5 do 9 dniami między sesjami doświadczyły obniżeń wynoszących około 10 mg/dl do około 35 mg/d, a te przechodzące plazmaferezę po 10 lub większej liczbie dni od poprzedniej plazmaferezy zaobserwowały obniżenie wynoszące od około 5 mg/dl do około 25 mg/dl. [0044] Jak pokazano na Figurze 4, dawcy z nieprawidłowymi poziomami cholesterolu doświadczyli w czasie badania obniżenia całkowitego cholesterolu w zakresie od około 1 mg/dl do około 35 mg/dl. Dawcy przechodzący plazmaferezę z od 2 do 4 dni od poprzedniej sesji plazmaferezy i mający nieprawidłowe poziomy całkowitego cholesterolu doświadczyli największego obniżenia, mieszczącego się w zakresie od około 20 mg/dl do około 35 mg/dl, podczas gdy ci przechodzący plazmaferezę z od 5 do 9 dniami między sesjami doświadczyli obniżeń wynoszących około 8 mg/dl do około 15 mg/dl, a ci przechodzący plazmaferezę po 10 lub większej liczbie dni od ostatniej sesji plazmaferezy zaobserwowali obniżenie wynoszące od około 1 mg/dl do około 20 mg/dl. [0045] Na Figurach 5 i 6 zilustrowano zmianę z poziomu podstawowego całkowitego cholesterolu oraz obserwacje z badania porównawczego z szacunkami z modelu GEE. Jak pokazano na Figurze 5, kobiety z wysokimi poziomami całkowitego cholesterolu (tj. większymi niż 240 mg/dl) doświadczyły obniżeń nieco mniejszych niż te oszacowane, podczas gdy kobiety z poziomami granicznymi całkowitego cholesterolu (tj. od około 200 mg/dl do około 239 mg/dl) doświadczyły nieco większych obniżeń niż te oszacowane w modelu GEE. [0046] Jak pokazano na Figurze 6, mężczyźni z wysokimi poziomami całkowitego cholesterolu (tj. większymi niż 240 mg/dl) doświadczyli obniżeń nieco mniejszych niż te oszacowane dla wszystkich okresów z wyjątkiem większego niż 10 dni między rundami. Mężczyźni z granicznymi poziomami całkowitego cholesterolu (tj. od około 200 mg/dl do około 239 mg/dl) doświadczyli poziomów cholesterolu, które były zasadniczo takie same jak te oszacowane w modelu GEE, z wyjątkiem sytuacji, w których więcej niż 10 dni upłynęło między rundami plazmaferezy. W takim przypadku zaobserwowane obniżenia były nieco większe niż oszacowane. [0047] Na Figurach 7 i 8 zilustrowano wpływ plazmaferezy na poziomy LDL u dawczyń i dawców. [0048] Jak pokazano na Figurze 7, dawczynie z nieprawidłowymi poziomami LDL doświadczyły w czasie badania obniżenia poziomów LDL w zakresie od około 5 mg/dl do około 40 mg/dl. Dawczynie przechodzące plazmaferezę po od 2 do 4 dni od ostatniej plazmaferezy i mające nieprawidłowe poziomy LDL doświadczyły obniżeń mieszczących się w zakresie od około 15 mg/dl do około 40 mg/dl, podczas gdy te przechodzące plazmaferezę po od 5 do 9 dni od ostatniej plazmaferezy doświadczyły obniżeń wynoszących około 10 mg/dl do około 25 mg/dl, a te przechodzące plazmaferezę po 10 lub większej liczbie dni od poprzedniej plazmaferezy zaobserwowały obniżenie wynoszące od około 5 mg/dl do około 30 mg/dl. Należy zauważyć, że pacjenci z najwyższymi poziomami LDL (tj. większymi niż około 160 mg/dl) doświadczyli największych spadków kiedy terapie były rozdzielone od około 2 do około 4 dni lub więcej niż około 10 dni niż ci, u których rundy były rozdzielone od około 5 do około 9 dniami.
9 [0049] Jak pokazano na Figurze 8, dawcy z nieprawidłowymi poziomami LDL (tj. 130 mg/dl i powyżej) doświadczyli w czasie badania obniżenia poziomów LDL w zakresie od około 0 mg/dl do około 35 mg/dl. Dawcy przechodzący plazmaferezę po od 2 do 4 dni od ostatniej plazmaferezy i mający nieprawidłowe poziomy LDL doświadczyli obniżeń mieszczących się w zakresie od około 15 mg/dl do około 40 mg/dl, podczas gdy ci przechodzący plazmaferezę po od 5 do 9 dni od ostatniej plazmaferezy doświadczyli obniżeń wynoszących około 10 mg/dl do około 25 mg/dl, a ci przechodzący plazmaferezę po 10 lub większej liczbie dni od ostatniej plazmaferezy zaobserwowali obniżenie wynoszące od około 0 mg/dl do około 20 mg/dl. Należy zauważyć, że pacjenci płci męskiej z najwyższymi poziomami LDL (tj. większymi niż około 160 mg/dl) doświadczyli największych spadków kiedy terapie następowały 2 do około 4 dni po poprzedniej plazmaferezie lub więcej niż około 10 dni po poprzedniej plazmaferezie niż ci, u których rundy były rozdzielone przez od około 5 do około 9 dni. Jednak pacjenci płci męskiej z granicznymi poziomami LDL mieszczącymi się w zakresie od około 130 mg/dl do około 150 mg/dl doświadczyli pomijalnego obniżenia poziomów LDL kiedy rundy plazmaferezy były rozdzielone przez więcej niż 10 dni. [0050] Na Figurach 9 i 10 zilustrowano zmianę z poziomu podstawowego LDL oraz obserwacje z badania porównawczego z szacunkami z modelu GEE. Jak pokazano na Figurze 9, kobiety z wysokimi poziomami LDL (tj. większymi niż 160 mg/dl) doświadczyły obniżeń niższych niż te oszacowane. Kobiety z granicznymi poziomami całkowitego cholesterolu (tj. od około 130 mg/dl do około 159 mg/dl) doświadczyły obniżeń niższych niż te oszacowane w modelu GEE, z wyjątkiem sytuacji, w których więcej niż 10 dni upłynęło między rundami plazmaferezy. [0051] Jak pokazano na Figurze 10, mężczyźni z wysokimi poziomami całkowitego cholesterolu (tj. większymi niż 160 mg/dl) doświadczyli obniżeń nieco mniejszych niż te oszacowane dla wszystkich okresów z wyjątkiem większego niż 10 dni między rundami. Mężczyźni z granicznymi poziomami całkowitego cholesterolu (tj. od około 130 mg/dl do około 159 mg/dl) doświadczyli poziomów cholesterolu, które były zasadniczo takie same jak te oszacowane w modelu GEE, z wyjątkiem sytuacji, w których więcej niż 10 dni upłynęło między rundami plazmaferezy. [0052] Jak pokazano, dawcy płci męskiej i żeńskiej od plazmaferezy, z wysokimi lub wyższymi niż pożądane poziomami podstawowymi całkowitego cholesterolu (tj. większymi niż około 200 mg/dl) i poziomami LDL (tj. wyższymi niż około 130 mg/dl), mieli oszacowany, statystycznie istotny spadek cholesterolu kiedy plazmaferezę przeprowadzono po od 2 do 4 dni po poprzedniej. Ta przewidywana zmiana była większa u dawców płci żeńskiej. Przewidywany spadek poziomów całkowitego cholesterolu i LDL był mniejszy u dawców z dłuższymi przerwami między donacjami, co sugeruje, że nie występuje długotrwały efekt po przerwaniu donacji osocza. Co więcej, dawcy z akceptowalnym poziomem podstawowym całkowitego cholesterol (tj. mniejszym niż około 200 mg/dl) i LDL (mniejszym niż około 130 mg/dl) mieli bardzo małą oszacowaną zmianę lub zmianę, która nie była statystycznie istotna. Dodatkowo, wyniki oszacowane w modelu GEE były bliskie wynikom zaobserwowanym w badaniu. [0053] Na Figurach 11 i 12 zilustrowano wpływ plazmaferezy na poziomy HDL u dawców płci męskiej i żeńskiej.
10 [0054] Jak pokazano na Figurze 11, dawcy płci żeńskiej z granicznymi poziomami HDL (tj. poziomami wynoszącymi od około 130 mg/dl do około 60 mg/dl) doświadczyli w czasie badania obniżenia poziomów HDL w zakresie od około 0 mg/dl do około 5 mg/dl. Dawcy z niskimi poziomami HDL (tj. niższymi niż 50 mg/dl) doświadczyli wzrostu HDL wynoszącego od około 2 mg/dl do około 4 mg/dl kiedy zabiegi przeprowadzano 5-9 dni po ostatniej plazmaferezie lub więcej niż 10 dni po poprzedniej plazmaferezie. Ponadto, jakiekolwiek spadki zaobserwowane u pacjentów z prawidłowymi poziomami HDL (tj. większymi niż około 60 mg/dl) były takie, że pacjenci utrzymywali wciąż prawidłowe poziomy HDL po zabiegu. [0055] Jak pokazano na Figurze 12, dawcy płci męskiej z nieprawidłowymi poziomami HDL doświadczyli spadku poziomów HDL w zakresie od około 0 mg/dl do około 4 mg/dl w czasie badania, a ci z niskimi HDL (tj. niższymi niż około 40 mg/dl) lub granicznymi poziomami HDL (tj. od około 40 do około 60 mg/dl) doświadczyli wzrostów HDL wynoszących od około 1 mg/dl do około 5 mg/dl. Ponadto, jakiekolwiek spadki zaobserwowane u pacjentów z prawidłowymi poziomami HDL (tj. większymi niż około 60 mg/dl) były takie, że pacjenci utrzymywali wciąż prawidłowe poziomy HDL po zabiegu. [0056] Na Figurach 13 i 14 zilustrowano zmianę z poziomów podstawowych HDL oraz obserwacje z badania porównawczego z szacunkami z modelu GEE. Jak pokazano, wyniki oszacowane w modelu GEE były bliskie wynikom zaobserwowanym w badaniu. Dawcy z niskim poziomem podstawowym HDL (tj. kobiety z poziomami podstawowymi wynoszącymi mniej niż 50 mg/dl i mężczyźni z poziomami podstawowymi wynoszącymi mniej niż 40mg/dl), mieli oszacowany, statystycznie istotny wzrost poziomów HDL. Ta przewidziana zmiana była większa wraz z dłuższymi przerwami w donacjach. Co więcej, dawcy z niemal optymalnymi lub optymalnymi poziomami HDL mieli oszacowany, statystycznie istotny spadek poziomów HDL. Ta przewidziana zmiana była mniejsza wraz z dłuższymi przerwami w donacjach. [0057] Rutynowe monitorowanie dawców obejmowało: pomiar ciśnienia krwi, pulsu, temperatury, wagi oraz monitoring wszelkich zmian, hematokrytu, całkowitego białka i testowanie pod kątem chorób zakaźnych. Wyniki badania wykazały, że nie było bezpośredniej korelacji z całkowitą liczbą donacji i liczbą przerw dla danej osoby. [0058] Objawy niepożądane zarejestrowano jedynie w 0,15% donacji. Jedynie 14 dawców doświadczyło jakichkolwiek efektów ubocznych. Nie zarejestrowano ciężkich objawów lub efektów ubocznych, co sugeruje, że opisane niniejszym leczenie jest bezpieczne do terapii zaburzeń cholesterolu we krwi. [0059] Wyniki tego badania sugerują, że proces plazmaferezy wpływa na poziomy cholesterolu w dni następujące po plazmaferezie. Wielkość zaobserwowanego efektu zależy od poziomu podstawowego cholesterolu i czasu między donacjami. [0060] Przywrócenie poziomów cholesterolu w kierunku poziomu podstawowego u dawców z długimi przerwami między donacjami sugeruje, że nie istnieją długoterminowe efekty po przerwaniu donacji osocza. W związku z tym opisany niniejszym sposób przeznaczony jest do długotrwałego i/lub
11 przerywanego zastosowania terapeutycznego w leczeniu pacjentów cierpiących z powodu różnych zaburzeń cholesterolu.
12 Zastrzeżenia patentowe 1. Komórki pełnej krwi bez osocza, przy czym osocze oddziela się od komórek pełnej krwi poprzez plazmaferezę pozaustrojową, do stosowania w leczeniu zaburzeń cholesterolowych, przy czym wymienione komórki pełnej krwi podaje się pacjentowi z nieprawidłowym cholesterolem całkowitym, nieprawidłowymi poziomami LDL i/lub nieprawidłowymi poziomami HDL zmierzonymi przed leczeniem, w pierwszym schemacie leczenia obejmującym dwie lub większą liczbę rund, przy czym pierwszy schemat leczenia obniża poziomy LDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami LDL i/lub podwyższa poziomy HDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami HDL i przy czym każda kolejna runda pierwszego schematu leczenia utrzymuje nowy, niższy poziom całkowitego cholesterolu, niższy poziom LDL i/lub wyższy poziom HDL. 2. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, znamienne tym, że każda kolejna runda pierwszego schematu leczenia jest przeprowadzana od około 2 do około 4 dni po poprzedniej rundzie. 3. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, znamienne tym, że każda kolejna runda pierwszego schematu leczenia jest przeprowadzana od około 5 do około 9 dni po poprzedniej rundzie. 4. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, znamienne tym, że każda kolejna runda pierwszego schematu leczenia jest przeprowadzana od około 10 do około 14 dni po poprzedniej rundzie. 5. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, znamienne tym, że pierwszy schemat leczenia obejmuje zastosowanie co najmniej jednej statyny przed, w trakcie i/lub po pierwszym schemacie leczenia. 6. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, zawierające dodatkowo roztwór soli fizjologicznej. 7. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, znamienne tym, że objętość krwi leczonej w każdej rundzie pierwszego schematu leczenia dla uzyskania komórek pełnej krwi jest mniejsza niż około 1000 ml. 8. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1,
13 znamienne tym, że pierwszy schemat leczenia obniża poziomy LDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami LDL przed pierwszym schematem leczenia o od około 5 mg/dl do około 45 mg/dl. 9. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 8, znamienne tym, że pierwszy schemat leczenia obniża poziomy LDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami LDL przed pierwszym schematem leczenia o od około 10 mg/dl do około 35 mg/dl. 10. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, znamienne tym, że pierwszy schemat leczenia podwyższa poziomy HDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami HDL przed pierwszym schematem leczenia o od około 1 mg/dl do około 5 mg/dl. 11. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 10, znamienne tym, że pierwszy schemat leczenia podwyższa poziomy HDL u pacjentów z nieprawidłowymi poziomami HDL przed pierwszym schematem leczenia o od około 2 mg/dl do około 4 mg/dl. 12. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, znamienne tym, że pierwszy schemat leczenia trwa przez co najmniej około 2 tygodnie lub więcej. 13. Komórki pełnej krwi do stosowania według zastrz. 1, zawierającego ponadto dopasowanie pierwszego schematu leczenia w oparciu o poziomy całkowitego cholesterolu, LDL i/lub HDL u pacjenta.
14 Figura 1
15 Figura 2
16 Kobiety Zmiana całkowitego cholesterolu (mg/dl) 2-4 dni 5-9 dni 10 dni Figura 3
17 Mężczyźni Zmiana całkowitego cholesterolu (mg/dl) 2-4 dni 5-9 dni 10 dni Figura 4
18 Figura 5
19 2-4 dni 5-9 dni 10 dni Figura 6
20 Figura 7
21 Figura 8
22 Figura 9
23 Figura 10
24 Figura 11
25 Figura 12
26 Figura 13
27 Figura 14
ODNOŚNIKI CYTOWANE W OPISIE 28 Poniższa lista odnośników cytowanych przez zgłaszającego ma na celu wyłącznie pomoc dla czytającego. Nie stanowi ona części dokumentu patentu europejskiego. Pomimo, że dołożono największej staranności przy jej tworzeniu, nie można wykluczyć błędów lub przeoczeń i EPO nie ponosi żadnej odpowiedzialności w tym względzie. Literatura inna niż patentowa cytowana w opisie EVANS, KATIE D.Low- Density Lipoprotein Apheresis in Patients with Severe Familial Hypercholesterolemia Refractory to, or Intolerant of, Lipid-Lowering Drug Therapy: Preventing the Onset or Progression of Cardiovascular DiseaseSchool of Physician Assistant Studies, 2011, 268- [0005] YOKOYAMA, S. et al.selective Removal of Low Density Lipoprotein by Plasmapheresis in Familial HypercholesterolemiaArtheriosclerosis, 1985, vol. 5, 6613-622 [0006]