INDUSTRY 16 lipiec 2014 Aktualości biomérieux Kotrola jakości w każdych warukach Diagostyka źródłem dobrego zdrowia
Spis treści od wydawcy 2 od wydawcy 3 Szybkie badaia mikrobiologicze kosmetyków oraz produktów do higiey osobistej z wykorzystaiem techologii CHEMUNEX we współpracy z Yves Sait Lauret 7 Cytometria przepływowa w aalizie żywości 8 Przydatość systemu TEMPO do moitorowaia czystości mikrobiologiczej surowców barwych 12 Automatyzacja pracy laboratorium owoczese rozwiazaia 13 Labguard system moitorigu parametrów fizyczych 15 PREVI ColotGram automatycze barwieie preparatów metodą Grama wydawca: biomérieux Polska Sp. z o.o. Osoba odpowiedziala: Elżbieta Wójcik Osoby biorące udział w przygotowaiu r 16: Dorota Pawluch Artur Gąsior Czesław Mitek Jacek Charliński Aeta Lesiuk (korekta) Adres redakcji i wydawcy: biomérieux Polska 01-518 Warszawa, ul. Ge. Józefa Zajączka 9 tel. (22) 569 85 00 fax (22) 569 85 54 www.biomerieux.pl opracowaie graficze i druk: Agecja Wydawicza SOWA www.agecja-sowa.com.pl Szaowi Państwo, Mam adzieję,że artykuły, które zamieściliśmy w umerze 16 Aktualosci Idustry, spełiają Państwa oczekiwaia. Bardzo prosimy o opiie, które będą dla as wskazaiem, co powiiśmy zmieić w przyszłości i jakie tematy są dla Państwa waże. Nowe istrumetale metody aalizy mikrobiologiczej kosmetyków i żywości przybliży Państwu Pai Dr hab. Alia Kuicka Styczyńska. Tempo, o którym mogli Państwo przeczytać w poprzedich umerach, może być wykorzystae rówież do moitorowaia czystości mikrobiologiczej surowców barwych. Artykuł a te temat zajdziecie Państwo a stroie 8. biomérieux wprowadziło a ryek polski owy system do moitorowaia i śledzeia temperatur oraz iych parametrów fizyczych kotrolowaych w laboratoriach, chłodiach czy liiach produkcyjych o azwie: LABGUARD. Więcej a temat tego systemu mogą Państwo przeczytać w obecym umerze. W umerze 16 Aktualości Idustry, zajdziecie Państwo rówież iformacje a temat systemu do automatyczego barwieia preparatów metodą Grama. Współczese laboratoria mikrobiologicze w coraz większym stopiu dążą do skracaia czasu trwaia procesów jedostkowych, redukcji czyości maualych w celu poprawieia efektywości oraz zwiększeia przepustowości laboratorium. Stąd duże zaiteresowaie automatyzacją pracy oraz zwiększaiem wydajości. W Aktualościach przedstawiamy owe DILUMATY biomérieux: Dilumat START, Expert i EVO. Serdeczie zapraszamy Państwa do odwiedzaia aszej stroy iteretowej www.biomerieux.pl, oraz zarejestrowaia się do aszej biblioteki techiczej a stroie: www.mybiomerieux.com, dzięki której będziecie mieli Państwo dostęp do ulotek techiczych oraz Certyfikatów Kotroli Jakości aszych produktów. Dorota Pawluch Dyrektor ds. Marketigu i Sprzedaży Mikrobiologia Przemysłowa 2
Szybkie badaia mikrobiologicze kosmetyków oraz produktów do higiey osobistej z wykorzystaiem techologii CHEMUNEX we współpracy z Yves Sait Lauret owe techologie Zakłady produkujące kosmetyki oraz środki higiey osobistej wykoują badaia mikrobiologicze produktów przed wypuszczeiem ich a ryek. Rutyowo wykoują badaia w kieruku ocey ilościowej OLD (Ogóla Liczba Droboustrojów), Drożdży i Pleśi oraz testy a Obecość/Nieobecość pewych, specyficzych mikroorgaizmów. Dzięki systemowi D-Cout, techologii CHEMUNEX opartej a cytometrii przepływowej, zakłady produkujące kosmetyki mogą zwaliać swoje produkty o 2 lub 3 di wcześiej w porówaiu z tradycyją metodą badań. Yves Sait Lauret (YSL) kilka lat temu zaadaptował techologię CHEMUNEX do zwaliaia końcowych produktów, z wykorzystaiem 24 godziego testu a Obecość/Nieobecość w kieruku OLD (Ogóla Liczba Droboustrojów). W celu polepszeia jakości surowców zostało zawarte porozumieie pomiędzy YSL a CHEMUNEX, ukierukowae a opracowaie szybkiego protokołu do wykrywaia drożdży i pleśi. Protokół sprawdzoo w badaiach z wykorzystaiem większości produktów YSL, takich jak szampoy, toiki, pudry, kremy. Badaia obejmowały etapy opisae w Farmakopei EU i US oraz w The validatio of compedial methods <1225>, The PDA Techical Report 33. Procedura walidacyja zgoda była ze stadardami określoymi dla Badań Zgodości (Performace Qualificatio - PQ). Metody Próbki (szampo, żel pod pryszic, toik, puder, tusz do rzęs, krem do ciała, spray do włosów, oraz kremy do twarzy) przygotowao w astępujący sposób: 10g produktu kosmetyczego (sztuczie kotamiowaego lub ie) dodao do 90ml buliou ChemBoost C (bulio do eutralizacji koserwatów oraz amażaia, dostarczoy przez AES CHEMUNEX, stosoway rówież w aplikacji dla OLD) Homogeizowao próbkę za pomocą mieszadła typu Vortex oraz ikubowao ją 1 godzię w temperaturze pokojowej. Nastepie dodawao 1ml zeutralizowaej próbki do 20 ml buliou wzbogacającego (ChemBost F, specyficzy bulio wzbogacający dla drożdży i pleśi), który ikubowao 50 godzi w 25 +/- 2C w celu zwiększeia poziomu wykrywalości mikroorgaizmów. Po ikubacji próbki poddawae były homogeizacji w celu rozbicia obecej grzybi, astępie filtrowae. Kolejy etap to automatycze zakowaie i aalizowaie próbki w systemie D-Cout z użyciem specyficzych odczyików zakujących tylko żywe mikroorgaizmy. Jeda seria badań wykoywaa była w ciągu 45-60 miut, atomiast pierwszy wyik uzyskiwao po 20-25 miutach. W celu określeia Limitu Wykrywalości, każdy produkt sztuczie kotamiowao z użyciem pięciu różych mikroorgaizmów o różym poziomie kocetracji zawiesiy (Tabela 1). Tabela 1. Kocetracja zawiesiy Szczep Poziom 1 Poziom 2 Poziom 3 Cadida albicas 0 5-10 50-100 Aspergillus iger 0 5-10 50-100 Mucor plumbeus 0 5-10 50-100 Peicillium glabrum 0 5-10 50-100 Aureobasidium sp 0 5-10 50-100 Rówolegle w metodzie płytkowej sprawdzoo kocetrację zawiesi: po 50 godziej ikubacji, 1ml próbki rozcieńczoej do 1/10 posiewao a agar Sabouraud z dekstrozą i ikubowao od 3 do pięciu di w 25 C. 3
Wyiki i dyskusja System cytometrii przepływowej firmy biomerieux CHEMUNEX został zwalidoway aby wykazać spójość i pewość wyików w badaiach a obecość/ieobecość drożdży i pleśi szerokiego zakresu produktów, według zaleceń Farmakopei EU i US oraz PDA 33. Specyficzość i Selektywość metody Przeprowadzoe badaia potwierdziły możliwość wykrywaia szczepów drożdży i pleśi (Tabela 2) w teście a Obecość/Nieobecość oraz brak reakcji krzyżowych z droboustrojami iebędącymi drożdżami i pleśiami (Tabela 3) po 50 godziej ikubacji. Tabela 2. Specyficzość Drożdże Cadida albicas Tabela 3. Selektywość Pseudomoas aerugiosa Staphylococcus aureus przetrwaliki Bacillus subtilis Pleśie Aspergillus iger Mucor plumbeus Peicillium glabrum Aureobasidium sp Escherichia coli Acietobacter liquefacies Szczepy przemysłowe Graica wykrywalości (LOD) Graicę wykrywalości (LOD) określa się jako ajmiejszą liczbę droboustrojów możliwą do wykrycia, bez określeia dokładej jej wartości liczbowej, przy 50 % przedziale ufości, w daych warukach doświadczalych. Poziomy kocetracji zawiesi dla każdego szczepu podao w tabeli 4. Wskaźik 50% Edpoit Spermaa-Kabera stosoway jest do obliczaia kocetracji droboustroju (oraz graicy przedziału ufości) w daej matrycy, który to przedział odpowiada 50% prawdopodobieństwu uzyskaia wyiku dodatiego. Tabela 5 przedstawia 50% Graicę Wykrywalości (50% LOD) dla drożdży i pleśi w teście Obecy/Nieobecy, z użyciem hodowli czystych szczepów, po 50 godziej ikubacji w 25C, w bulioie ChemBoost F, w porówaiu z metodą referecyją. Korelacja wyików uzyskaych z użyciem systemu D-Cout i metody płytkowej Podczas rówoległych, trwających 6 miesięcy badań z użyciem systemu D-Cout i metody płytkowej przeprowadzoych w laboratorium YSL, wykoao 618 aaliz próbek aturalych oraz sztuczie kotamiowaych. Badaia wykazały dobrą korelację pomiędzy systemem D-Cout, a tradycyją metodą płytkową, co przedstawia tabela 6. D-Cout automatyczy cytometr przepływowy przezaczoy dla laboratoriów o średiej i dużej przepustowości próbek. 4
Tabela 4. Kocetracja zawiesiy Szczep Poziom 1 Poziom 2 Poziom 3 Poziom 4 Cadida albicas 0 1,4 1,6 17 Aspergillus iger 0 0,3 0,9 19 Peicillium glabrum 0 0,5 1,1 14 Mucor plumbeus 0 0,9 2,4 15 Tabela 5. Względy poziom wykrywalości (jtk/21 ml buliou ChemBoost F) Szczep Metoda referecyja Metoda alteratywa Cadida albicas 0,184 (0,063-0,542) 0,390 (0,109-1,398) Aspergillus iger 0,410 (0,120-1,398) 0,384 (0,102-1,443) Peicillium glabrum 0,225 (0,066-0,769) 0,449 (0,132-1,532) Mucor plumbeus 0,196 ( 0,057 0,668) 0,292 (0,082-1,0460 Tabela 6. Zestawieie wyików Wyiki ujeme Dodatie wyiki Suma w metodzie referecyjej w metodzie referecyjej Wyiki ujeme w D-Cout 516 0 516 Wyiki dodatie w D-Cout 10 92 102 Suma 526 92 618 Wioski Wykazao możliwość zwaliaia szerokiej gamy produktów YSL w ciągu 2 di po badaiach w kieruku drożdży i pleśi. We wszystkich przypadkach uzyskae dae potwierdziły zgodość wyików uzyskaych w metodzie automatyczej po 50 godziej ikubacji w bulioie amażającym, z metodą płytkową, w której wyiki uzyskiwae są po 5 diach. D-Cout umożliwia wykrywaie iskich poziomów drożdży i pleśi w badaych produktach. Nowy protokół do wykrywaia drożdży i pleśi jest stosoway główie w badaiach surowców z uwagi a ryzyko zaieczyszczeia pleśiami w porówaiu do gotowych produktów. Dlatego w laboratoriach YSL test a Obecość/Nieobecość ogólej liczby droboustrojów pozostaje główym kryterium w kotroli wyrobów gotowych. Dzięki badaiom a Obecość/Nieobecość bakterii oraz drożdży i pleśi laboratorium mikrobiologicze YSL uzyskuje komplete wyiki aaliz dla końcowych produktów, w ciągu 24 godzi dla bakterii oraz dla surowców w ciągu 2 di dla drożdży i pleśi. Dzięki temu YSL może zwaliać produkty od 3 do 5 di szybciej w porówaiu z metodą tradycyją. 5
Nowoczese rozwiązaia biomérieux w badaiach mikrobiologiczych D-Cout BactiFlow ALS Zwaliaj swoje produkty szybciej dzięki ultra szybkim wyikom Sprawdzoa techologia zakowaia tylko żywych komórek. Wsparcie podczas badań walidacyjych. Wykrywaie bakterii, drożdży oraz pleśi w żywości i kosmetykach test a Obecość/Nieobecość Wysoka czułość: możliwość wykrywaia 1 komórki w opakowaiu (żywość) lub1 komórki a gram (kosmetyki) szybki, prosty i pewy odczyt wyików próbek o iskim oraz wysokim stopiu zaieczyszczeia Wyiki po 24 godziach wykrywaie bakterii i drożdży (zależie od aplikacji) Wydajość 25, 50, 64 próbki a godzię. Możliwość bezpośrediego liczeia, bez ikubacji. Czułość od 100 komórek dla drożdży i od 1000 komórek dla bakterii Wykrywaie mikoorgaizmów ze środowisk stresogeych, o obiżoej zawartości skladików odżywczych lub zawierających środki koserwujące Systemy D-Cout oraz BactiFlow ALS zapewiają iii optymalizację zarządzaia persoelem oraz czasem pracy iii zmiejszeie pracochłoości oraz zmiejszeie zużycia materiałów iii uzyskaie pewych wyików po 24 lub 48 godziach iii szybkie wykrywaie zakażeń, wczese podejmowaie działań korekcyjych iii szybkie zwolieie produktu, zwiększeie powierzchi magazyowej iii skróceie czasu kwaratay produktów
Cytometria przepływowa w aalizie żywości Alia Kuicka-Styczyńska Istytut Techologii Fermetacji i Mikrobiologii Politechiki Łódzkiej owe techologie Istrumetale metody aalizy mikrobiologiczej są z powodzeiem wykorzystywae w zakładach wytwarzających żywość. Automatyzacja i komputeryzacja poprzez wprowadzeie owoczesych systemów aalityczych zapewia wiarygodość wyików i komfort pracy oraz poprawia efektywość laboratorium przemysłowego. Na ryku pojawiają się koleje aparaty, które dają możliwość wykoaia coraz większej liczby aaliz w tym samym czasie, a metody, które początkowo wydawały się być dedykowae wyłączie do pracy aukowej, zajdują aplikacje w mikrobiologii przemysłowej. Jedą z ajowszych techik stosowaych w aalityce mikrobiologiczej jest cytometria przepływowa. Metoda ta jest uiwersalym arzędziem przezaczoym do prowadzeia ieiwazyjej charakterystyki fizyczej i chemiczej komórek, w tym rówież komórek mikroorgaizmów. Pozwala ie tylko a wykrycie pojedyczych komórek i poszczególych populacji droboustrojów zajdujących się w badaej matrycy, ale rówież daje możliwość moitorowaia przebiegu zachodzących tu procesów biologiczych. Zasada ozaczeia polega a detekcji komórek przechodzących przez strumień światła laserowego. W celu zróżicowaia, dokouje się zakowaia fluorescecyjego komórek, co daje możliwość rówoczesego wykrycia różych orgaizmów bądź też komórek tego samego orgaizmu w różych fazach rozwojowych (p. komórek wegetatywych i przetrwalików). Niekwestioowaą zaletą cytometrów jest szybkość oraz wysoka czułość aalizy. Komercyje cytometry przezaczoe do rutyowych badań przemysłowych pozwalają a oceę zaieczyszczeia mikrobiologiczego testowaej matrycy awet po 30 miutach (włączając czas przygotowaia próbki) i wykrycie pojedyczych komórek w opakowaiu jedostkowym produktu. Wydajość aparatów jest bardzo duża, a poziomie setek próbek aalizowaych w ciągu jedej zmiay. Systemy cytometrii przepływowej biomérieux AES Chemuex przezaczoe do pracy w warukach przemysłowych (D-Cout i BactiFlow ALS), umożliwiają wykrycie droboustrojów poprzez zakowaie wyłączie żywych komórek za pomocą opatetowaego markera Fluorassure. Te w pełi zautomatyzowae aalizatory mikrobiologicze są już wykorzystywae do określaia wskaźików jakości mikrobiologiczej w tak trudych aalityczie matrycach, jak fermetowae produkty mlecze czy przetwory z dodatkiem wsadów owocowych. Przy iskim poziomie zaieczyszczeia, obecość drożdży zostaje określoa w ciągu 24 godzi, a ogóla liczba droboustrojów 48 godzi, w czasie o od 1 do 3 di krótszym iż w aalizie metodami stadardowymi. Cytometry pozwalają a uzyskaie wyików badań jałowości po 24 godziach dla deserów mleczych i 24-72 godziach dla mleka UHT oraz liczby bakterii z rodziy Eterobacteriaceae już po 10 godziach. Kolejym przykładem aplikacji w przemyśle spożywczym jest zastosowaie tych systemów do ocey mikrobiologiczej kocetratów, pulp i soków owocowych oraz apojów. Czas podstawowych ozaczeń mikrobiologiczych obejmujących określeie ogólej liczby droboustrojów czy liczby drożdży w kocetratach owocowych, produktach owocowych i wodzie ie przekracza 30 miut. Wyik aalizy uzyskay w tak krótkim czasie pozwala a szybką selekcję surowca lub iemal atychmiastową korektę parametrów procesu techologiczego. Aaliza mikrobiologicza produktów końcowych wymagających wstępej ikubacji, takich jak soki, ektary, czy mrożoa herbata, może być wykoaa w czasie od 24 do 48 godzi. Ocea większości produktów wytwarzaych przez producetów soków owocowych i apojów w kieruku obecości drożdży i pleśi oraz określeia ogólej liczby droboustrojów zostaje skrócoa o 3-5 di i ie przekracza 26 godzi. Wykorzystaie, projektowaych iegdyś główie do badań w hematologii i okologii, cytometrów przepływowych a potrzeby przemysłu spożywczego stało się faktem. Zaczące skróceie czasu aalizy mikrobiologiczej przekłada się ie tylko a efekty ekoomicze zakładu produkcyjego, ale rówież zapewia wzrost bezpieczeństwa wytwarzaej żywości. BactiFlow, jest półautomatyczym, ajlepszym rozwiązaiem dla małych i średich serii. 7
kotrola żywości Przydatość systemu TEMPO do moitorowaia czystości mikrobiologiczej surowców barwych Alia Kuicka-Styczyńska Istytut Techologii Fermetacji i Mikrobiologii Politechiki Łódzkiej, Łódź Wprowadzeie Moitorowaie czystości mikrobiologiczej produktów spożywczych i surowców stosowaych do ich wytworzeia jest obecie rutyowo prowadzoe w zakładach przemysłu spożywczego. Zastosowaie owoczesych metod aalizy zaczie usprawia kotrolę jakości produkcji i do wprowadzeia owoczesych systemów aalityczych ie trzeba już producetów przekoywać. Skomputeryzowae systemy automatycze ie tylko dają możliwość wykoywaia dużej liczby aaliz w tym samym czasie, ale pozwalają a rówoczese rejestrowaie wyików i tworzeie obszerych baz daych. System TEMPO został wprowadzoy do Polski w 2006 roku i z powodzeiem jest wykorzystyway do ocey zaieczyszczeia mikrobiologiczego różorodych matryc żywości. Okazuje się jedak, że użytkowicy systemu oprócz badań surowców i produktów walidowaych, podejmują próby rozszerzeia jego zastosowań, dostosowując do własych potrzeb. Idywidualizacja zakresu pracy systemu i wprowadzeie owych protokołów badań są możliwe, a podejmowae działaia zwykle kończą się sukcesem. We właściwym dopracowaiu procedur pomoca jest zajomość zasady działaia aparatu. Należy pamiętać, że awet w przypadku dużej elastyczości metody, ie jest możliwe prowadzeie ozaczeń wszystkich matryc żywości. Każda alteratywa, szybka metoda aalizy mikrobiologiczej ma pewe ograiczeia. W wielu zakładach produkcji żywości jedym z wielu surowców są przyprawy zielarskie czy mączki skrobiowe lub kukurydziae. Ozaczeia czystości mikrobiologiczej tych matryc ie są stadardowo walidowae dla większości metod alteratywych. Poadto, surowce te staowią źródła substacji barwych, związków działających przeciwdroboustrojowo i ezymów, które mogą powodować zafałszowaia odczytu. W stadardowej metodzie płytkowej, w pożywce o objętości około 15ml kocetracja tych związków zaczie maleje, a duża bezwładość umożliwia regeerację droboustrojów w czasie 2-3 di ikubacji. Powstaje zatem pytaie o wiarygodość metod alteratywych w ozaczaiu poziomu mikroorgaizmów przypraw i mączek skrobiowych. 8
Krótko o zasadzie działaia systemu TEMPO W systemie TEMPO wykorzystao klasyczą metodę rozcieńczeń Listera ozaczaia ajbardziej prawdopodobej liczby droboustrojów (NPL). Chociaż ozaczeie NPL jest dokłade, to w klasyczej formie metoda ta jest pracochłoa, materiałochłoa i czasochłoa. Z tego też względu, stosowaa jest rzadko w praktyce laboratoryjej. O ile iterpretacja odczytaych wyików jest jedozacza, gdyż prowadzoa jest w oparciu o dae statystycze zebrae w formie tablic Mc Crady ego, to trudości może stwarzać prawidłowa ocea wzrostu mikroorgaizmów w hodowlach płyych. Wątpliwości rosą, gdy koiecze jest stosowaie pożywek zawierających barwiki, a poziom zaieczyszczeia badaych matryc jest iski. Podobie, gdy roztwory matryc o iskich rozcieńczeiach są silie zabarwioe. Należy rówież podkreślić, że dokładość ozaczeia rośie wraz z liczbą powtórzeń posiewów z jedego rozcieńczeia. W systemie TEMPO w pełi zachowao reguły klasyczego ozaczeia NPL, ale dokładość odczytu zaczie zwiększoo poprzez prowadzeie hodowli w trzech kolejych dziesięciokrotych rozcieńczeiach, ale w 16 powtórzeiach każde. System automatyczie apełia iokulowaą pożywką kartę zawierającą 3 szeregi po 16 cel w trzech różych objętościach: 2,25μl; 22,5μl i 225μl i ją zamyka. Zmiejszeie objętości hodowli z 10ml do 2,25-225μl zacząco zmiejsza bezwładość układu i przyspiesza odczyt. Detekcja mikroorgaizmów jest odmiea iż w klasyczej metodzie NPL. System ie wykrywa zmia turbidymetryczych hodowli wywołaych wzrostem liczebości populacji jak w metodzie probówkowej, ale detekcja oparta jest a wykryciu specyficzej aktywości metaboliczej komórek w hodowli. Wysoka czułość systemu została osiągięta poprzez wprowadzeie odczytu fluorescecji celki a skutek reakcji chemiczej specyficzych metabolitów poszukiwaych grup droboustrojów ze składikiem pożywki. Związek wykazujący fluorescecję może być zawarty w pożywce, a jego fluorescecja zaika w wyiku reakcji z metabolitami rosących mikroorgaizmów, bądź też fluorescecja zostaje wzbudzoa jako rezultat specyficzych reakcji metabolitów z substacją zawartą w pożywce. Odczyt jest odpowiedzią biarą dla każdej celki (+ lub -), co dla trzech szeregów rozcieńczeń geeruje odpowiedź iterpretowaą automatyczie według tablic Mc Crady ego. Aparat automatyczie prowadzi obliczeia statystycze i podaje iterpretację wyiku w postaci liczby komórek w 1g lub 1ml produktu. Przy zastosowaiu takiego systemu odczytu, istieje rówież iebezpieczeństwo maskowaia fluorescecji hodowli w obecości związków barwych wprowadzoych wraz z badaą próbką. Problem te może być wyelimioway przez rozcieńczaie próbki i prowadzeie ozaczeia przyajmiej począwszy od rozcieńczeia 1/400 lub 1/4000. Rozwiązaie takie jest możliwe jedyie wtedy, gdy zaieczyszczeie próbek w jedostce masy czy objętości przekracza odpowiedio 100 lub 1000 jtk. Porówaie metody TEMPO oraz referecyjej metody płytkowej W celu odiesieia metody TEMPO do stadardowych metod referecyjych, wykorzystao rutyowo stosowae w laboratoriach metody płytkowe. W praktyce, jeśli wprowadzaa jest metoda alteratywa, to zastępuje oa te właśie klasycze ozaczeia. Do badań wybrao osiem przypraw: cebulę w postaci grysu suszoego, cyamo, czosek w postaci grysu suszoego, ekstrakt papryki czerwoej, gorczycę, majeraek, suszoą atkę pietruszki, pieprz czary ziaristy oraz skrobię kukurydziaą. Każdą próbkę badao rówocześie za pomocą systemu TEMPO oraz stadardową metodą płytkową. Próbki zaieczyszczao mieszaią bakterii Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, Eterobacter aerogees ATCC 13048 i drożdży Cadida albicas ATCC 10231 do poziomu 10 2-10 3 jtk/g. W stadardowej metodzie płytkowej liczbę droboustrojów określao według odpowiedich orm PN-EN ISO. W metodzie TEMPO wykorzystao astępujące testy: AC (Aerobic Cout) do ozaczaia ogólej liczby droboustrojów tleowych, TC (Total Coliforms), do określeia liczby bakterii z grupy coli wg ISO w temperaturze 30 C, EC (Escherichia coli) do określeia liczby Escherichia coli, YM (Yeasts ad Moulds), do określeia liczby drożdży i pleśi. Badaia przeprowadzoo w Istytucie Techologii Fermetacji i Mikrobiologii Politechiki Łódzkiej. Przedstawioe a wykresach 1-4 wyiki staowią średią arytmetyczą 3 powtórzeń. Wykres 1. Porówaie wyików ozaczeia ogólej liczby droboustrojów tleowych metodą TEMPO AC i metodą płytkową. Wykres 2. Porówaie wyików ozaczeia liczby bakterii z grupy coli metodą TEMPO TC i metodą płytkową. 9
Wykres 3. Porówaie wyików ozaczeia liczby Escherichia coli metodą TEMPO EC i metodą płytkową. Dla czterech matryc badaych przypraw (cyamou, czosku, gorczycy i pietruszki) wyiki uzyskae metodą alteratywą i referecyją były podobe (Wykres 1), a różica ozaczeń ie przekraczała 0,1 jedostki logarytmiczej. Rówocześie, ie stwierdzoo zależości prawidłowości ozaczeia w metodzie TEMPO od itesywości zabarwieia zawiesiy. Wysoką zgodość wyików uzyskao dla ozaczeń liczby bakterii z grupy coli (test TEMPO TC) i liczby bakterii Escherichia coli (test TEMPO EC). W przypadku tego ostatiego testu, jedyie dla cyamou odotowao zaczące odchyleie od metody płytkowej, a różica wyosiła 0,71 jedostki logarytmiczej (Wykres 2 i 3). Przeprowadzoe badaia wskazują rówież a przydatość testu TEMPO YM do ozaczeie poziomu zaieczyszczeia grzybami. Różice w odczycie testu YM i metody płytkowej były iewielkie i wyosiły od 0,03 do 0,48 jedostki logarytmiczej (Wykres 4). Wybrae do badaia matryce różią się stopiem zabarwieia i są klasyfikowae jako mało barwe (grys cebuli, grys czosku, gorczyca, pieprz czary ziaristy i skrobia kukurydziaa), średio barwe (cyamo i atka pietruszki) oraz barwe (ekstrakt czerwoej papryki). Spośród stosowaych testów TEMPO, trzy testy (TC, EC i YM) wykazują Wykres 4. Porówaie wyików ozaczeia liczby drożdży i pleśi metodą TEMPO YM i metodą płytkową. dobrą zgodość ze stadardową metodą płytkową, iezależie od stopia zabarwieia roztworu podstawowego matrycy. W testach tych stosowae są pożywki selektywe, umożliwiające rozwój specyficzych grup droboustrojów, podczas gdy pozostałe mikroorgaizmy zaieczyszczające ie wykazują aktywości metaboliczej. Detekcja w systemie TEMPO jest wyikiem obecości specyficzych ezymów wytwarzaych przez rosące droboustroje, a dla kokretego testu jest to zwykle jede ezym; i tak dla poszczególych testów: TC - -galaktozydaza, EC - -glukuroidaza i YM - itroreduktaza. Jak wyika zatem z powyższych badań, testy te są miej wrażliwe a iterferecje z powodu swojej wysokiej specyficzości. Ideą testu AC jest określeie liczby wszystkich droboustrojów tleowych zajdowaych w próbce, co wymaga zaczie miejszej specyficzości. Detekcja mikroorgaizmów w teście AC powiązaa jest z obecością kilku ezymów takich jak fosfataza, glukozydaza czy peptydaza, działających optymalie przy różych wartościach ph. Wprowadzoe z próbką barwiki i ie substacje o aktywości przeciwdroboustrojowej mogą zarówo hamować wzrost pewych grup droboustrojów, jak rówież zmieiać ich aktywość ezymatyczą. W przypadkach iektórych matryc skutkuje to iedoszacowaiem liczby droboustrojów bądź maskowaiem fluorescecji przy iskim poziomie ezymów. Podsumowaie System TEMPO staowi wiarygodą i elastyczą platformę w aalizie mikrobiologiczej żywości, oferując testy umożliwiające moitorig produktów w pełym zakresie ormatywym. Możliwe jest rozszerzeie aaliz a produkty i surowce, których aalizy ie zostały zwalidowae. Warukiem koieczym jest jedak sprawdzeie kompatybilości testów z metodami referecyjymi dla kokretych asortymetów. Przy wyborze matryc ależy uwzględić dopuszczaly ormatywy poziom zaieczyszczeia. Metody alteratywe ie są zalecae do badaia próbek o wysokim stopiu zabarwieia i wysokiej czystości mikrobiologiczej. Przy poziomie zaieczyszczeia rzędu 10 2 i powyżej, rozcieńczeie próbki przed aalizą zwykle zaczie zmiejsza ryzyko iterferecji odczytu. 10
NEW biomérieux wprowadza owy, szybki test TEMPO BC do wykrywaia bakterii Bacillus cereus w żywości i próbach środowiskowych Certyfikat z walidacji AOAC RI dostępy w lipcu 2014 Walidacja według ISO 16140 w trakcie badań (plaowae zakończeie koiec 2014) Tempo BC 1410070 2014-10-07 20121410070000113009 2ºC 8ºC 155638 TEMPO BC pozwala a liczeie bakterii Bacillus cereus w czasie 24 godzi Wyiki w ciągu 24 godzi bez koieczości potwierdzaia Wykrywaie komórek wegetatywych oraz przetrwalików szybki, prosty i pewy odczyt wyików próbek o iskim oraz wysokim stopiu zaieczyszczeia Dostępe trzy progi czułości zależie od wymagań klieta: < 10, < 50, < 100 jtk/g TEMPO zapewia iii iii iii optymalizację zarządzaia persoelem oraz czasem pracy zmiejszeie pracochłoości oraz zmiejszeie zużycia materiałów uzyskaie dokładych wyików, bez koieczości potwierdzaia, w ciągu 24 godzi Szeroki zakres badaych matryc: produkty zbożowe, warzywa, żywość dla iemowląt, sery i desery mlecze, produkty cukiericze, żywość gotowa do spożycia, mleko i jaja w proszku, ryby, mięso, karma dla zwierząt domowych, próbki środowiskowe Bardzo dobra zgodość wyików z ISO 7932 (badaia objęły 595 próbek aturalych oraz sztuczie kotamiowaych) iii efektywe śledzeie próbki oraz zwiększeie wydajości laboratorium
iformacje o produkcie Automatyzacja pracy laboratorium owoczese rozwiązaia Współczese laboratoria mikrobiologicze w coraz większym stopiu dążą do skracaia czasu trwaia procesów jedostkowych, redukcji czyości maualych w celu poprawieia efektywości oraz zwiększeia przepustowości laboratorium. Stąd duże zaiteresowaie automatyzacją pracy oraz zwiększaiem wydajości. biomérieux jako wieloleti parter chcąc sprostać rosącym oczekiwaiom klietów wprowadziła a ryek aparaty służące do automatyczego przygotowywaia próbek. Firma w swojej ofercie posiada trzy systemy: Dilumat Start, Expert oraz Evo. Różią się oe wydajością oraz parametrami pracy. Aparaty spełiają wymogi stadardów ISO 7218 oraz ISO 6887-1 określającymi maksymaly błąd ważeia jako 1 % oraz maksymaly błąd rozcieńczaia jako 5%. Posiadają owoczesą, kompaktową budowę, dodatkowo wyposażoe zostały w tryb pracy czuwaie, włączik główy umiejscowioy w przedim paelu aparatu, jak rówież kolorowe diody LED iformujące o statusie pracy. Elemety te zdecydowaie ułatwiają pracę podczas przygotowywaia próbki. Główą zaletą urządzeń jest owoczesy pael dotykowy, który może być przez użytkowika ustawioy w dowolej pozycji oraz odległości od aparatu. Koleja zaleta to iezwykle prosty iterfejs oraz przycisk pomocy, który po aktywacji wyświetla iformacje dla daej fukcji aparatu, dzięki czemu możliwe jest przygotowaie próbki bez wcześiejszej lektury książki użytkowika. Oprócz podstawowych fukcji takich jak: rozcieńczaie z programowaymi współczyikami od 2 do 1000, rozcieńczaie od 5g do 2000g (Dilumat Start), od 3g do 3000g (Dilumat Expert) lub od 8g do 7000g (Dilumat Evo), dozowaie, możliwość rozbudowy o dodatkowe pompy (dodatkowa pompa w Dilumacie Start, dodatkowe cztery pompy w Dilumatach Expert i Evo), aparaty posiadają fukcję Auto start, dzięki czemu przygotowaie próbki zostało skrócoe do miimum. W tym przypadku przygotowaie próbki sprowadza się do jej odważeia, atomiast aparat po wcześiejszej aktywacji fukcji Autotary uruchamia proces rozcieńczaia (fukcja dostępa w dilumatach Expert oraz Evo). Maksymalizacja automatyzacji rozcieńczaia pozwala zwiększyć przepustowość zwłaszcza w laboratoriach wykoujących dużą liczbę badań. Poadto stadardowo urządzeia (poza Dilumatem Start) dają możliwość wyboru pracy pomp: tryb woly, średi oraz szybki co ma zaczeie w przypadku rozcieńczaia próbek pylistych bądź rozpryskujących. Aparaty są iezwykle szybkie, rozcieńczaie stadardowej próbki w Dilumacie Start trwa 16 sekud, w Dilumacie Expert i Evo 10 sekud, dodatkowo dwa ostatie dilumaty pozwalają a przygotowaie rozcieńczeń 1:10 lub 1:4, próbek o masie 375 g. W tym przypadku aparaty wyposażoe zostały w dodatkowe statywy a średie oraz duże torebki jak rówież dodatkowy czujik dla większego zakresu ważeia. Warto wspomieć rówież o możliwości rejestrowaia przez aparaty ich pracy, idetyfikacji próbki, rozcieńczalika czy użytkowika. Jest to możliwe ie tylko dzięki programowaiu ale rówież przez możliwość podłączeia czytików kodów, kamery, systemu LIMS, drukarki. Poadto biomérieux wyposażyło dilumaty w owatorskie rozwiązaie, wbudoway czytik kodu RFID, który pozwala iezwykle szybko zidetyfikować próbkę oraz rozcieńczalik, zwiększając wydajość oraz przepustowość laboratorium. Dilumaty Start, Expert oraz Evo charakteryzują się wodoodporą, odporą a zarysowaia obudową, kompaktową budową, wyposażoe zostały w ruchome ramię dozujące, umożliwiające wykoaie sześciu różych operacji rozcieńczaia bądź dozowaia. Zapewiają pełe programowaie, z uwzględieiem różych użytkowików, rozcieńczalików, współczyików rozcieńczeń jak rówież zakresów wagowych badaych próbek Szeroki zakres wagowy rozcieńczeń, których dokładość jest zgoda z wymogami ISO, pozwala a zastosowaie dilumatów w badaiach żywości, kosmetyków lub farmaceutyków. Aparty Start, Expert oraz Evo to ajowocześiejsze rozwiązaia w automatyzacji laboratorium, które spełią oczekiwaia ajbardziej wymagających klietów. 12
Labguard system moitorigu parametrów fizyczych iformacje o produkcie System Labguard wykorzystyway do moitorowaia parametrów fizyczych został po raz pierwszy zastosoway w roku 1995. Od tego czasu system jest rozwijay i udoskoalay, a obeca wersja (Labuguard 2) jest już piątą geeracją. Labguard gwaratuje Państwu zachowaie optymalych waruków aaliz w laboratorium ale może być rówież wykorzystyway do moitorowaia liii produkcyjych, magazyów czy trasportu. System Labguard jest kompletym rozwiązaiem zapewiającym ciągły moitorig (24 godziy a dobę 7 di w tygodiu) parametrów fizyczych, w czasie rzeczywistym. Dzięki systemowi mogą Państwo bez problemów spełić wymagaia zawarte w różych ormach (EN ISO 17025 / CN ISO 15189 / EN ISO 7218 / EN 12830 / EN ISO 22716BPF) czy rekomedacji FDA CFR 21 część 11. dokładość w całym zakresie pracy (od -80 C do +80 C) wyosi maksymalie +/- 0,2 C. Każdy adajik posiada włase zasilaie (bateria) wykorzystywae w przypadku pracy rutyowej lub jako zasilaie awaryje. Dodatkowo adajiki mają pamięć obejmującą 4500 pomiarów dzięki czemu praktyczie ie ma możliwości utraty daych spowodowaych brakiem zasilaia lub awarią któregoś z elemetów systemu. Najpopulariejsze elemety systemu Labguard Nadajik z cyfrowym czujikiem temperatury Może być o wykorzystay do moitorowaia i kotroli temperatury oraz iych parametrów fizyczych takich jak: wilgotość, poziom CO 2, ilość cząstek, różicę ciśień i wiele iych dzięki możliwości podłączeia dowolego czujika z wyjściem 4-20mA (0-5V). Możliwe jest moitorowaie od 1 do poad 1500 różych puktów. Labguard to ie tylko czujiki oraz oprzyrządowaie ale rówież komplete oprogramowaie, peła dokumetacja oraz wszechstroy serwis. System działa w wykorzystaiem techologii bezprzewodowej. Każdy czujiki podłączoy jest do adajika, który przechowuje pomiary w pamięci wewętrzej, a astępie przekazuje je drogą bezprzewodową do odbiorika. Następie odbiorik podłączoy bezpośredio do komputera albo do sieci komputerowej (Etheret) przekazuje dae do oprogramowaia. Dzięki wykorzystaiu ajowszych rozwiązań techologiczych system Labguard może być wykorzystay ie tylko w jedym laboratorium (firmie) ale rówież umożliwia istalacje wielostrefowe. W przypadku istalacji wielostrefowych odbiorik przekazuje dae do serwera z wykorzystaiem protokołu IP/TCP, a astępie każdy użytkowik posiadający komputer podłączoy do Iteretu ma dostęp do wszelkich daych z wykorzystaiem adresu IP serwera. Dostęp do daych jest zabezpieczoy, a każdemu użytkowikowi moża adać odpowiedie uprawieia. Wszystkie logowaia do systemu i wszelkie zmiay są moitorowae. Stadardowe czujiki temperatury wchodzące w skład systemu Labguard zostały zaprojektowae specjalie z myślą o wykorzystaiu w laboratorium. Rozdzielczość pomiarowa takiego czujika temperatury to 0,0625 C, a jego Dostarczae z 1 lub 2 czujikami temperatury, uchwytem umożliwiającym przytwierdzeie do ściay/urządzeia oraz baterią litową 3,6 V. Zakres pomiarowy -80 C to +80 C. Odbiorik IP Odbiorik sygałów radiowych systemu Labguard dostarczoy razem z kablem sieciowym 13
Akcesoria płaski kabel TomProbe Nadajiki umieszczoe są a zewątrz urządzeia, a czujik umieszczae wewątrz. W przypadku kiedy urządzeie ie jest wyposażoe w tzw. wejście techicze, płaski kabel może zostać wykorzystay do podłączeia czujika z adajikiem przez drzwi bez uszkodzeia uszczelki. Modem GPRS TomProbe jest iezależym czujikiem temperatury wykorzystywaym do mierzeia temperatury w zakresie od -20 C do +125 C oraz określeia wilgotości względej od 0% do 100%. Może być wykorzystywae zarówo w przypadku moitorowaia waruków trasportu jak rówież do kotroli pracy autoklawu. Serwis oraz świadectwa wzorcowaia: Na życzeie klieta firma biomérieux dostarcza świadectwa wzorcowaia. Wzorcowaie odbywa się w akredytowaych przez PCA laboratoriach wzorcujących. Biorąc pod uwagę wieloletie doświadczeie biomérieux oraz wymagaia zawarte w dokumecie EA-04/10 wydaym przez Polskie Cetrum Akredytacji staowiącym uzupełiei do ormy EN ISO/IEC 17025, serwis techiczy rekomeduje wykoaie raz do roku sprawdzeia czujików. Stadardy i zgodości: Modem umożliwiający wysyłaie alarmów z wykorzystaiem SMS, fax czy poczty głosowej. Dostarczoy z ateą, kablem trasmisji głosu oraz kablem USB. Techologia bezprzewodowa spełia Europejskie (868 Mhz) stadardy telekomuikacyje oraz rekomedacje EN300-220. Jest rówież zgody z astępującymi dyrektywami: 89/336/EC dotycząca zgodości elektromagetyczej R TTE 99/5/EC dotycząca testów radiowych 73/23/EEC dotycząca badań bezpieczeństwa elektryczego TomKey TomKey jest iezależym czujikiem temperatury, wykorzystywaym do moitorowaia waruków trasportu, pracującym w zakresie temperatur -30 C do +80 C. Zawiera wyświetlacz pokazujący wartości takie jak: ostati pomiar, wartość górego czy dolego alarmu i ie. Każdy czujik ma pamięć a 8000 lub 16000 pomiarów i może być podłączoy bezpośredio do komputera przez port USB 14
PREVI ColorGram automatycze barwieie preparatów metodą Grama iformacje o produkcie Preparat barwioy metodą Grama pozostaje jedą z podstawowych techik stosowaych w diagostyce mikrobiologiczej, pomimo ciągłych zmia zmierzających do jej przyspieszeia. Niesie o ze sobą wiele ceych iformacji, które mogą ukierukować dalszą diagostykę lub postawieie wstępej diagozy. Wydaje się ieoceioy w przypadku badań płyu mózgowo-rdzeiowego, dodatich posiewów krwi, materiałów pobraych z ra i wielu iych. Niestety wielu mikrobiologów uważa preparat za uciążliwy w wykoaiu ze względu a wiele czyości maualych, koieczość dokładego odmierzaia czasu, powstające iebezpiecze, brudzące odpady. Nowoczesym rozwiązaiem problemów związaych z procesem barwieia metodą Grama jest owa wersja aparatu Aparat te umożliwia w pełi automatycze wybarwieie preparatów od utrwaleia do wysuszeia. Nowoczesa liia, wyposażeie w graficze oprogramowaie z ekraem dotykowym i czytik kodów kreskowych dla kotroli odczyików i preparatów, to owe cechy systemu. Zastosowaa specjala metoda rozpylaia barwików poprzez dysze, gwaratuje stadaryzację procesu barwieia, optymalizuje zużycie odczyików i ograicza ilość odpadów. Dzięki wprowadzoym w owej wersji PREVI Color czujikom, użytkowik ma możliwość automatyczego adzorowaia poziomu zarówo odczyików, jak i odpadów. Proces barwieia odbywa się w układzie zamkiętym, a odpady są usuwae do zitegrowaego z aparatem pojemika. Zapewia to czystość w laboratorium i pełe bezpieczeństwo operatora. Niewielkie wymiary aparatu pozwalają a ustawieie go w dowolym miejscu laboratorium. Nie jest to rówież uzależioe od dostępu do wody, zlewu itp. Z uwagi a dużą elastyczość systemu PREVI Color Gram może stać się elemetem wyposażeia każdego laboratorium, iezależie od jego wielkości i specyfiki. Dwie wielkości rotora a preparaty umożliwiają jedoczese barwieie 1-12 lub 1-30 szkiełek. W zależości od rodzaju lub grubości preparatu użytkowik wybiera jede z dziesięciu różych programów lub w razie koieczości wprowadza własy. Itegralą część systemu PREVI Color Gram staowią gotowe do bezpośrediego użytku odczyiki w specjalych butelkach dopasowaych do aparatu. W ofercie zajduje się kilka wersji odczyika kotrastowego, tak by laboratorium mogło wybrać ajlepszy z puktu widzeia swoich potrzeb i przyzwyczajeń. Aby zagęścić baday materiał przed wykoaiem preparatu barwioego metodą Grama rotor do barwieia moża zamieić a specjaly rotor do cytowirowaia. W te sposób jede aparat w zależości od potrzeb może stać się cytowrówką lub systemem do automatyczego barwieia. Podsumowując PREVI Color Gram to system, który w każdym laboratorium pomoże uzyskać preparat barwioy metodą Grama w sposób wystadaryzoway, bezpieczy, ograiczając maualą pracę i możliwość popełieia błędu. PREVI Color v.2 15
TECHNOLOGIA KTÓREJ MOŻESZ ZAUFAĆ