FOLIA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA 6, 1988

HTML
DOWNLOAD

Wielkość: px

Rozpocząć pokaz od strony:

Download "FOLIA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA 6, 1988"

Antoni Anatol Maciejewski
6 lat temu
Przeglądów:

1 A C T A U N I V E R S I T A T I S L O D Z I E N S I S FOLIA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA 6, 1988 B a rb a r a W ac h ow c N U K L E O T Y D Y A D EN Y L O W E P Ł Y T E K KRW I S SA K Ó W I T R O M B O C Y T Ó W P TA K ÓW W trombocytach ptasch, podobne jak w płytkach krw ssaków, nukleotydy adenylowe są lokalowane w różnych predałach komórk. W ce- 3 lu określena pul metabolcnej, '-adenną. trombocyty ndyka nkubowano Całkowta radoaktywność w komórce po (ok. 5 nmol/10 trombocytów) H- 1-godnnej nkubacj predstawała poom nukleotydów pul metabolcnej. adenylowych wchodących w skład Cęść nukleotydów tej pul ne prechod do 50% etanolu stanow frakcję wąaną F-aktyną. WSTĘP T r o m b o c y t y p t ak ó w p o d w g l ą d e m b u do w y m o r f o l o g c n e j, ro m ar u or a n e k t ó r y c h w ł a s n o ś c są we kr w s s a k ó w [5], u ją p o d o b e ń s t w o do k r w n e k c ą ce lo śc bl żo n e d o m e g a k a r o c y t ó w k r ąż ą c y ch n a t o m a s t w a s p e kc e p e łn on e j p ł y t k o w y c h s sa k ów nukleotydów adenylowych w r o m e s c e n a rol w ak t yw a c j ś n e j s e b ad a n a wy k a ał y, t r o m b o c y t a c h pta sch, są f r a g m e n t a ry c n e że pu l a m e t a b o l c n a n y l o w y c h w t r o m bo c y t a c h nd y ka jest w ą k s a jej p ul a w b e j ą d r a s t y c h aż 80% fu nk cj w y k a - [6, 7]. D an e d o t y ch [8, 9]. W c e - n u kl e o t y d ó w a d e - a n ż e l o dp o w a d a ją c a p ł y t k a c h krw s s a k ó w [8]. St an o w on a w s y s t k c h n u k l e o t y d ó w a d en y l o w y c h o b e c n y c h w tr o m b o cy t a c h [8] C el e m b a d a ń b y ło lo ś c o w e p r e ds t a w e n e wej t r o m b o c y t ó w n dy k a w ąa nej f rak c j n u k le o ty d o- F- aktyną. MATERIAŁ I METODY K r e w p o b e r a n o b e p o ś r e d n o ż ył y s kr yd ło we j s t y k o w y c h p r o b ó w e k a w e r a j ą c yc h 0,1 o bj ę t o śc [ 11 7 ] nd yka d o p l a - 3,8% c y t r y n a n u

2 t ró j so d ow e go. O so c e b o g a t o t r o m b o c y t a r n e o t r y m y w a n o w a n e p eł ne j 'krw p r e Lcbę komórek 5 mn, 50 x g, w temperature I n k u b a c j a t r o m b o c y t ó w nd y k a na 0,2 m l v/v) p ok ojow ej l c o no w k om o r e Burker a. 8-3H - a d e n n ą : * 1 m l o s o c a a - werającego 2 x 108 trombocytów nkubowano 125I-ałbumną pr e w r o - Po 60 m n nk u ba c j mesanny oleju slkonowego 10 u mo l 3H - a d e n n y (37 C) p ró b k n an o s o n o (DC 550 : MS 200, 9:1, w r o w a n o p r y x g. I lo ść o s oc a a t r y m a ne g o pr e 125 na p o d s t a w e r a d o a k t y w n o ś c I w o s a d e k o m ó rk w y l c a n o t ro mb oc y tó w. Po u w g l ę d n e n u tej w a r t o ś c nny włąconej do trombocytów T r o m b o c y t y p o nk u b a cj w y n a c a n o loś ć a d e - H - a d e n n ą w r o w a n o 15 mn, następne premywano dwukrotne modyfkowanym 350 x g, Tyroda 8 a w e s a n o w t y m s a m y m b u f o r e d o k o ń c o w e g o s t ę ż en a 2 x 10 trom- b o c y t ó w w 1 ml. buforem Zawesnę premytych trombocytów poddawano ekstra- k cj 50% e ta n ol em. Z a w a r t oś ć w y e k s t r a h o w a n y c h n u k l e o t y d ó w o n a c a - no s p e kt r o f o t o m e t r y c n e. C a ł k o w t ą a w ar t o ś ć n u k l e o t y d ó w ad e ny l o- w y c h w t r o m b o c y t a c h nd y ka p r y j ę t ą a 100% o n a c a n o s p e k t r o f o t o metrycne po ekstrakcj trombocytów kontrolnych 3H - ad e n ną ) (be n ku ba cj a p o m o c ą k w a s u n ad c hl o r o w e go. WYNIKI I DYSKUSJA C a ł k o w t a a w a rt o ś ć n u k l e o t y d ó w a d e n y l o w y c h w trombofcytach n dyka wynos 25 n m o l / t r o m b o c y t ó w s t an o w ok. 20 n mol (ok. t wo r u p r e c h o d ok. 80%). P ul a metabolcna Po e k s t r a k c j 50% e t a n o l e m do r o - 20 n mo l n u k l e o t y d ó w adenylowych T a b e l a 1 Romescene nukleotydów adenylowych w trombocytach ndyka po nkubacj 3H-adenną (n * 4) Compartmentalaton of adenne nucleotdes n turkey thrombocytes after labelng wth 3H-adenne (n A) Pula metabolcna Całkowta awartość Pula magaynowana Frakcja etanolowa o nmol/10 25,0 5,1 trombocytów 19,9 20,0 Ja k w y k a a ł y b a d a n a p r e p r o w a d o n e na p ł y t k a c h k rw l u d k c h nu-

3 k l e o t y d y a de n y lo w e są o be c ne k [1, 2, 3]. n yc h w arn,stoścach St an o w tw. w t r e c h r ó żn y c h p r e d a ł a c h k o m ó r - D we t r e c e n u k l eo t y d ó w (A DP ATP) p ul ą ma g ay no wa ną, b a r d o w o l n o w y m e n a n ą nukle - o t yd a m n aj d u j ąc y m s ą p o a a rn s t o śc a m N u k l e o t y d y o be c n e w c y t o pl a m e n k ub a cj są radoaktywnym prekursorem k u ba c j r a d o a k t y w n o ś ć p r e k u r s o r a [2], [1]. g w a ł t ow n e (3H - a d e n n a ). ne p r ec h o d do 50% etan olu, po Po 2-3 h n - n u k le o t y d ó w c a s e da j e o ce n ą w e l k o ś c p ul me ta b ol c n ej. n u k l e o t y d ó w p ul m a ga yn o wa n ej n ak ow a ne jest o be c n a ty l ko w c yt op l a m e d l a t e g o też o k r eś l e n e r a d o a k t y w ny c h lcnej l o ka l o w a - n e u c e s t n c y w p r o c e s a c h m etab olc nyc h. tym kt ór y po w od u j e e ks t ra k c j ą na cnej U H -a d e n n a po C ąś ć pul m e t a b o - c ą ś c p ul m et ab o- C -a d e n n a * m etabolcna 50% 50% etanol etanol pu l a m etabolcna HCLCl magaynowana magaynowana a) b) Rys. 1. Romescene nukleotydów adenylowych: a) w trombocytach ndyka, b) w płytkach cłoweka (wg H o l m s e n a [3]) po nkubacj radoaktywną adenną Fg. 1. Compartraentalaton of adenne nucleotdes: a) n turkey thrombocytes, b) n human blood platelets (accordng to H o l m s e n [3]) after ncubaton wth radoactve adenne

4 l cnej. T a f r a k c ja n u k l e o t y d ó w a d e n y l o w y c h 50% e t a n o l u s kł a d a sę g ł ó w n e A DP Znakowane radoaktywne je st m e t o d ą mórce [1]. M e t o d ą tą a s t o s o w a n o 109 ynowana c h od 5 M oż n a uw aż ać, (5,1 nmol ), t a b o l c n e, tj. ok. n mo l a ją ok. ok. aktywnych m e - Do 50 % e t a n o l u n e p r e w s kł a d p ul meta bolcnej. f r a k c j ą A DP w ą a n ą b a ł k e m kurclwym, f r ak c j n u k l e o t y d o we j (ADP) p t a k ó w ta p u l a n u k l e o t y d o w a w y n o s ok. w p r e l c a n u na kt ó r e a w e r a - w ą a ne j ( 3 ), w t r o m b o c y t a c h n mo l Jak wyka- p r e c h o d p ul a m a g a - W p o r ó w n a n u p ł y t k a m kr w c ło w e ka, 0,5 w ko- 20 n mo l n u k l e o t y d ó w t ak ż e w ę k s o ś ć n u k l e o t y d ó w nukleotydów wchodących 0,3 um ol w [3]. do o k r e ś l e n a f r ak c j n u k l e o t y - że d o e t a n o l u 14,9 n mo l N u k l e o t y d y te s t a n o w ą F- a kt yn ą. nukleotydów w ą a n y c h a k t y n ą t r o m b o c y t ó w ndyka. 50% e t a n o l p o w a l a na e k s t r a k c j ą ko m óre k. F-aktyną n u k l e o t y d ó w a d e n y l o w y c h ko mórk p o w a l a j ą c ą o c e n ć r o m e s c e n e dów adenylowych ano, otopem neropuscalna w ą a n e g o jest komórek a kt y ną węksa (rys. 1 ). LITERATURA [ 1] D a n e l J. L., M o l s h R., H o l r a s e n H. (1980), Bochm. Bophys. Acta, [ 2] H o 1 m s e n H., D a y H. J., S t o r m E. (1969), Bo- chm. Bophya. Acta, [3] H o 1 m s e n [4] F r e n c h H. (1981), Vox Sang., suppl. 1, 40, 1-7. [5] T a b a» s o 1 M. [ 6] W a c h o w c B.. P., W a c h o w c B. (1974), Haemostass, 3, (1980), Blood, 55, K r a j e w s k T. (1979), Thrombos. Haemostas., 42, [7] W a c h o w c [ 8] W a c h o w c [9] W e s e m a n n B. (1982), Haemostass, 11,, B., (1984), Cel Bochem. Funct., 2, W., v o n P u s c h I., P a u l N. (1979), Eur. J. Cell. Bol., 19, Zakład Bochem Ogólnej Instytut Bochem Unwersytet Łódk

5 Barbara Wachowc ADENINE NUCLEOTIDES IN MAMMALIAN PLATELETS AND AVIAN THROMBOCYTES In avan thtorabocytes, lke n mammalan cleotdes are present blood n three dstngushable plateleta compartments. the adenne nufor studes of adenne nucleotde metabolc pool the turkey thrombocytes were prelabeled wth 3 ' H-adenne. The level of metabolc nucleotdes was follewed by measurng ther total radoactvty. Part of the metabolc not extracted by 50% ethanol. g /10 thrombocytes) adenne Ths ethanol-nsoluble nucleotde pool was fracton (about 5 nmol/ represents adenne nucleotdes bound to F-actn.

Podobne dokumenty

Ę Ę ĘŚ Ą Ł Ę ł ł ś ą ź ż ź ą ż ć ąż ą ś ą

Ń Ę ł ó ó ł ż ć ó ś ą ą ż ą ą ń ł ś ś ąż ą Ę łó Ą Ę Ą Ó ą ż ą ł ą ź ć Ę ą ś ą ą Ł Ł ł ą Ą Ę Ą Ł ą ąż ą ż ć ą Ż ć ą Ę Ę ĘŚ Ą Ł Ę ł ł ś ą ź ż ź ą ż ć ąż ą ś ą ó ó ż ą ą ż ś ż Ę ź Ą ł ł ł ą ó ń ń Ę ż ż ń