AUTOREFERAT. Załącznik nr 3 Do wniosku o przeprowadzenie postępowania habilitacyjnego dr n. wet. Tomasza Dzieciątkowskiego

Transkrypt

1 Załącznik nr 3 Do wniosku o przeprowadzenie postępowania habilitacyjnego dr n. wet. Tomasza Dzieciątkowskiego AUTOREFERAT 1. Imię i nazwisko: Tomasz Jerzy Dzieciątkowski 2. Posiadane dyplomy i stopnie naukowe: : dyplom magistra inżyniera biotechnologii (specjalność: biotechnologia w ochronie zdrowia zwierząt), Międzywydziałowe Strudium Biotechnologii SGGW w Warszawie : stopień doktora nauk weterynaryjnych, Wydział Medycyny Weterynaryjnej SGGW w Warszawie. Rozprawa zatytułowana Wpływ końskiego herpeswirusa typu 2 (EHV-2) na produktywne zakażenie wirusem zakaźnego ronienia klaczy (EHV-1) w warunkach in vitro (promotor: dr hab. Danuta Klimuszko; recenzenci: prof. dr hab. Jerzy Kita/dr hab. Jerzy Rola) uzyskała wyróżnienie Rady Wydziału Medycyny Weterynaryjnej SGGW. 3. Informacje o zatrudnieniu: - od : biolog w Katedrze Mikrobiologii Lekarskiej Warszawskiego Uniwersytetu Medycznego - od : asystent w Zakładzie Mikrobiologii Samodzielnego Publicznego Centralnego Szpitala Klinicznego w Warszawie. 4. Wskazanie osiągnięcia wynikającego z art. 16 ust. 2 z dnia 14 marca 2003 roku o stopniach i tytule naukowym oraz o stopniach i tytule w zakresie sztuki (Dz. U. Nr 65, poz. 595 z późn. zm.) - cykl 6 publikacji poświęconych zakażeniom β-herpeswirusami wśród biorców allogenicznych przeszczepów komórek krwiotwórczych, wykonanych w Klinice Hematologii, Onkologii i Chorób Wewnętrznych Warszawskiego Uniwersytetu Medycznego

2 4.1. Autorzy i tytuły publikacji: 1. Dzieciątkowski T, Przybylski M, Tomaszewska A, Rokicka M, Łuczak M. Comparison of two methods used for monitoring low-copy cytomegalovirus infection in a patient with chronic myeloid leukemia after unrelated umbilical cord blood transplantation. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 2007; 55(3): IF 1,634 Mój wkład w powstanie tej pracy polegał na sformułowaniu hipotezy badawczej, zaplanowaniu i wykonaniu oznaczeń molekularnych oraz opracowaniu i interpretacji wyników. Własny udział procentowy szacuję na 55%. 2. Dzieciątkowski T, Przybylski M, Torosian T, Sulowska A, Łuczak M. Zakażenia cytomegalowirusem (HHV-5, CMV) u biorców allogenicznych przeszczepów komórek krwiotwórczych w Klinice Hematologii, Onkologii i Chorób Wewnętrznych Akademii Medycznej w Warszawie w latach Acta Hemat. Pol. 2007; 38(3): Mój wkład w powstanie tej pracy polegał na współudziale w sformułowaniu hipotezy badawczej, zaplanowaniu i wykonaniu oznaczeń molekularnych oraz opracowaniu i interpretacji wyników. Własny udział procentowy szacuję na 55%. 3. Dzieciątkowski T, Przybylski M, Torosian T, Tomaszewska A, Łuczak M. Prevalence of human herpesvirus 6 antibodies and DNA in allogeneic stem cell transplant patients: two-year single centre experience. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 2008; 56(3): IF 1,432 Mój wkład w powstanie tej pracy polegał na sformułowaniu hipotezy badawczej, wykonaniu oznaczeń serologicznych i molekularnych oraz opracowaniu i interpretacji wyników. Własny udział procentowy szacuję na 55%. 4. Dzieciątkowski T, Przybylski M, Kawecki D, Gieryńska M, Sulowska A, Torosian T, Łuczak M, Jędrzejczak WW, Młynarczyk G. Częstość występowania DNA ludzkiego herpeswirusa typu 6 u pacjentów Samodzielnego Publicznego Centralnego Szpitala Klinicznego w latach Przegl. Epidemiol. 2009; 63(1): Mój wkład w powstanie tej pracy polegał na współudziale w sformułowaniu hipotezy badawczej, zaplanowaniu i wykonaniu oznaczeń molekularnych oraz opracowaniu i interpretacji wyników. Własny udział procentowy szacuję na 60%. 5. Dzieciątkowski T, Przybylski M, Tomaszewska A, Basak GW, Jędrzejczak WW, Młynarczyk G. Detection of beta-herpesviruses in adult cord blood stem cell recipients by real-time PCR - single centre study. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 2010; 58(5): IF 1,989 Mój wkład w powstanie tej pracy polegał sformułowaniu hipotezy badawczej, zaplanowaniu i wykonaniu oznaczeń molekularnych oraz opracowaniu i interpretacji wyników. Własny udział procentowy szacuję na 55%.

3 6. Dzieciątkowski T, Przybylski M, Torosian T, Basak G, Jędrzejczak WW, Młynarczyk G. Human herpesvirus 7 in allogeneic haemopoietic stem cell transplant recipients in Central Clinical Hospital in Warsaw - three years survey. Intervirology. 2011; 54(1): IF Mój wkład w powstanie tej pracy polegał na współudziale w sformułowaniu hipotezy badawczej, zaplanowaniu i wykonaniu oznaczeń molekularnych oraz opracowaniu i interpretacji wyników. Własny udział procentowy szacuję na 60% Omówienie celu naukowego/artystycznego ww. pracy/prac i osiągniętych wyników wraz z omówieniem ich ewentualnego wykorzystania. Przeszczepienie allogenicznych komórek krwiotwórczych jest postępowaniem z wyboru w leczeniu wielu chorób rozrostowych układu krwiotwórczego, chorób limfoproliferacyjnych, zespołów niewydolności szpiku i wrodzonych zespołów niedoboru odporności w przypadkach braku zgodnego dawcy spokrewnionego [14]. Najpoważniejszym powikłaniem zabiegów przeszczepiania komórek krwiotwórczych pochodzących ze szpiku, zwłaszcza od dawców niespokrewnionych, są zakażenia wirusowe i grzybicze [15]. Uważa się natomiast, że transplantacja komórek krwiotwórczych pochodzących z krwi pępowinowej związana jest z mniejszym ryzykiem zakażenia związanego z przeniesieniem wirusa drogą wszczepienną (zwłaszcza wirusa cytomegalii oraz wirusa Epsteina-Barr) [18]. Herpeswirusy są grupą DNA-wirusów wywołujących powszechne zakażenia w populacji ludzkiej na całym świecie. Wirusy należące do β-herpeswirusów mają długi cykl replikacji a zakażone komórki ulegają często powiększeniu (cytomegalia), czemu towarzyszy pojawianie się jądrowych i cytoplazmatycznych ciałek wtrętowych. Charakterystyczną cechą jest silne związanie wirionów potomnych ze strukturami błonowymi komórek gospodarza, powoduje to między innymi powolne zakażanie sąsiednich komórek [16]. Wirusy z tej podrodziny powodują zakażenie latentne w makrofagach oraz prawdopodobnie w subpopulacji CD8 + limfocytów T i w komórkach gruczołów wydzielania wewnętrznego [12,16]. Na szczególne podkreślenie zasługuje zjawisko, iż pierwotne zakażenie produktywne herpeswirusami (w tym członkami podrodziny β-herpesvirinae) zawsze przechodzi w zakażenie latentne, które utrzymuje się do końca życia. Możliwość przejścia zakażenia latentnego w zakażenie persystentne, podczas którego odbywa się stała produkcja niewielkiej ilości wirionów potomnych bez objawów klinicznych i związane z tym utajone nosicielstwo jest jedną z przyczyn szybkiego rozprzestrzenianiem się herpeswirusów w populacji [12]. Ze względu na niezwykle szerokie rozpowszechnienie wirusa cytomegalii na całym świecie zakażenia nim wciąż pozostają jedną z najbardziej znaczących przyczyn zachorowań i śmiertelności u pacjentów po przeszczepieniu komórek krwiotwórczych [15]. Ryzyko wystąpienia

4 pełnoobjawowej choroby cytomegalowirusowej zależne jest od statusu immunologicznego dawcy i biorcy, rodzaju przeszczepu oraz typu zastosowanej immunosupresji. Najczęściej obserwowaną chorobą towarzyszącą infekcjom o etiologii CMV tej grupie chorych jest śródmiąższowe zapalenie płuc, które notuje się najczęściej w okresie około 6 do 10 tygodni po transplantacji, a ponowne symptomy w skrajnych przypadkach mogą się pojawiać wielokrotnie. Typowe objawy cytomegalowirusowego zapalenia płuc to gorączka, kaszel bez odkrztuszania, hipoksemia, przyspieszony oddech, obustronny śródmiąższowy naciek w płucach, a w obrazie radiologicznym zmiany o charakterze szkła mlecznego [13]. Skuteczność chemioterapii zależy w dużej mierze od poziomu replikacji wirusa we krwi i spada wraz z upływem czasu od początku zakażenia. Stosowana rutynowo terapia gancyklowirem, prócz swego działania mielotoksycznego, coraz częściej nie przynosi pożądanych rezultatów ze względu na rosnący odsetek szczepów CMV opornych na ten preparat, jednak nadal jest terapią z wyboru [11]. Niestety, pomimo stosowanej profilaktyki oraz leczenia wyprzedzającego (pre-emptive therapy), śmiertelność w tej grupie pacjentów jest duża i wynosi powyżej 50% [13]. Zakażenie wirusem cytomegalii jest także czynnikiem zwiększającym ryzyko wtórnych zakażeń bakteryjnych i grzybiczych oraz mogącym nasilać stopień choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi (Graft versus Host Disease GvHD). Znacznie rzadziej spotyka się przypadki innych schorzeń, jak: owrzodzeń żołądkowojelitowych, zapaleń wątroby czy zahamowania czynności szpiku kostnego [13,15]. Zakażenia spowodowane przez ludzkiego herpeswirusa 6 mogą dotyczyć 38-60% biorców przeszczepów komórek krwiotwórczych, zaś szczyt wiremii obserwuje się najczęściej w ciągu pierwszych 4-6 tygodni po transplantacji [13]. Pierwsze pozytywne wyniki testów wykrywających DNA HHV-6 notowane są zazwyczaj po dniach, zaś dla HHV-7 po dniach od przeszczepienia. Zakażenia herpeswirusem typu 6 w tej grupie chorych są obecnie wiązane z wieloma jednostkami chorobowymi, począwszy od stanów gorączkowych, poprzez neuroinfekcje do chorób limfoproliferacyjnych włącznie [13,20]. Występowanie HHV-6 oraz HHV-7 wcześniej niż zakażeń spowodowanych przez wirusa cytomegalii może sugerować interakcje pomiędzy betaherpeswirusami [3]. Obecność HHV-7 jest prawdopodobnym czynnikiem ułatwiającym reaktywację latentnej formy CMV, natomiast dokładne związki pomiędzy HHV-6 i HHV-7 wciąż pozostają niewyjaśnione. W badaniach in vitro wykazano bowiem udział HHV-7 jako czynnika przerywającego latencję HHV-6, jednak zależności tej nie udowodniono w pełni w warunkach in vivo[2]. Ze względu na fakt, iż β-herpeswirusy są potencjalnie niebezpiecznymi patogenami dla osób z niedoborami immunologicznymi, konieczne stało się opracowanie szybkich i wiarygodnych technik diagnostycznych pozwalających wykryć patogen w badanym materiale biologicznym. W diagnostyce stosuje się m.in.: detekcję wirusa w hodowli komórkowej, badania serologiczne, czy wykrywanie kwasów nukleinowych w oparciu o techniki biologii molekularnej. Ze względu na upośledzenie funkcjonowania układu odpornościowego w grupach pacjentów poddanych

5 immunosupresji, tradycyjne badania serologiczne wyrażają się często zbyt małą czułością i zostały zastąpione przez testy PCR, ze szczególnym uwzględnieniem ilościowego PCR z detekcją w czasie rzeczywistym (real-time PCR, qpcr) [1,11]. Celem prowadzonych badań było więc zbadanie użyteczności metod opartych na zasadzie real-time PCR w diagnostyce zakażeń powodowanych przez przedstawicieli podrodziny β- herpesvirinae wśród biorców allogenicznych przeszczepów komórek krwiotwórczych, określenie częstości infekcji powyższymi patogenami w tej grupie chorych oraz zbadanie potencjalnych współzależności pomiędzy β-herpeswirusami. Badaniom poddano 1357 próbek pobranych od 100 pacjentów poddanych 104 zabiegom przeszczepienia allogenicznych komórek krwiotwórczych w Klinice Hematologii, Onkologii i Chorób Wewnętrznych WUM w latach Próbki surowicy krwi użyte w doświadczeniach pobierane były wielokrotnie (mediana: 11; przy zakresie 3-21 próbek) od poszczególnych pacjentów - pierwszy raz w dniu przeszczepienia, a następnie w odstępach 5-7 dni do 100 dnia po przeszczepieniu, w ramach rutynowego monitorowania wiremii CMV wykonywanego po zabiegach hematologicznych. Oznaczenia poziomu DNA wirusa cytomegalii wykonywane były z wykorzystaniem komercyjnego zestawu CMV Quant Kit (Roche Diagnostics), zaś badania w kierunku DNA herpeswirusów typu 6 i 7 prowadzono używając ilościowych metod real-time PCR zaprojektowanych i zwalidowanych w Katedrze i Zakładzie Mikrobiologii Lekarskiej WUM. Jednocześnie w próbkach surowic pobranych przed zabiegiem przeszczepieienia badano przy pomocy testów ELISA obecność swoistych przeciwciał anty-cmv (NovaTec) oraz anty-hhv-6 (PanBio) w klasach IgM oraz IgG. Nie wykonano oznaczenia przeciwciał skierowanych przeciwko herpeswirusowi typu 7, ze względu na brak na rynku stosownych zestawów diagnostycznych. W okresie przedprzeszczepowym nie stwierdzono przeciwciał w klasie IgM skierowanych przeciwko wirusowi cytomegalii u żadnego badanego pacjenta. Swoiste przeciwciała w klasie IgG wykryto natomiast u 89 biorców allogenicznych przeszczepów komórek krwiotwórczych (89%). W tej grupie chorych wykazano także obecność przeciwciał w klasie IgM skierowanych przeciwko HHV-6 u 6 osób (6%), zaś w klasie IgG w 61 próbkach uzyskano wyniki dodatnie, w 21 wątpliwe i w 18 ujemne [7]. Podczas badań technikami biologii molekularnej obecność specyficznych sekwencji wirusa cytomegalii stwierdzono w materiale pobranym od 29 pacjentów (29,0%), zaś DNA HHV-6 oraz HHV-7 wykryto u odpowiednio 33 (33%) i 47 (47%) osób po przeszczepieniu allogenicznych komórek krwiotwórczych w latach [6,7,8]. Po porównaniu markerów serologicznych zakażenia CMV u dawcy i biorcy można przypuszczać, że w 22 przypadkach (76%) wystąpienie choroby cytomegalowirusowej miało najprawdopodobniej charakter reaktywacji endogennego wirusa ze stanu latencji pod wpływem zastosowanej terapii immunosupresyjnej. Etiologia pozostałych 7 przypadków (24%), gdzie wykryto przeciwciała anty-cmv zarówno u pacjenta i

6 dawcy, nie jest jednoznaczna i wymagałaby kosztownej szczegółowej analizy sekwencji badanego szczepu wirusa. Badany za pomocą techniki real-time PCR poziom wiremii CMV u większości pacjentów oscylował na niskim poziomie i wynosił około kopii/ml krwi, choć sporadycznie osiągał wyższe wartości ( kopii/ml) [7]. DNA cytomegalowirusa stwierdzano najczęściej w pierwszym trymestrze po transplantacji (od 45 do 80 dnia), rzadziej w okresie późniejszym. Wiremia na poziomie wykrywalnym technikami biologii molekularnej utrzymywała się przez okres 2-5 tygodni. Obserwacje te zgodne są z danymi literaturowymi, gdzie mediana czasu, po którym zanotowano ujawnienie się zakażenia CMV wynosi około 42 dni, zaś średni czas trwania infekcji to 19 dni [11, 13]. Aktywne zakażenie wirusem cytomegalii u większości pacjentów poddanych zabiegowi allogenicznego przeszczepienia komórek krwiotwórczych najczęściej przebiegało bez wyraźnie zaznaczonych objawów klinicznych: obserwowano gorączkę i sporadycznie objawy ze strony układu oddechowego [9]. Tylko u dziewięciu osób stwierdzono pełnoobjawową chorobę cytomegalowirusową, przebiegającą z ciężkim zapaleniem płuc o prawdopodobnej etiologii CMV; u trzech innych w trakcie trwania wiremii nastąpiło dodatkowo zaostrzenie choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi [6]. Podczas retrospektywnych badań w kierunku DNA ludzkiego herpeswirusa typu 6 wykonanych z użyciem metody real-time PCR, obecność specyficznych sekwencji HHV-6 stwierdzono u 33% badanych pacjentów poddanych zabiegowi przeszczepienia allogenicznych komórek krwiotwórczych [7]. Materiał genetyczny HHV-6 stwierdzano zazwyczaj w ciągu pierwszych 6 tygodni po zabiegu transplantacji komórek krwiotwórczych (od 18 do 41 dnia), zaś jego wykrywalny poziom utrzymywał się najczęściej przez 7-25 dni. Badany ilościowo za pomocą metody real-time PCR poziom kopii wirusa u większości osób był niski i wynosił zazwyczaj ok kopii/ml surowicy krwi [7,8]. Dokładne powiązanie występowania DNA HHV-6 ze śmiertelnością okołoprzeszczepową nie jest możliwe, choć dwunastu pacjentów (12%) zmarło w trakcie wykrywalnej wiremii [7]. Objawy kliniczne obserwowane w tym czasie manifestowały się zazwyczaj gorączką, zaostrzeniem choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi lub też dodatkowo zaburzeniami neurologicznymi. Rozpowszechnienie herpeswirusa typu 6 w populacji powoduje, iż obecność jego DNA stwierdzano w Polsce zarówno u pacjentów po przeszczepieniach narządów unaczynionych [4], jak i komórek krwiotwórczych [19]. Choć dane pochodzące z kraju są skąpe i dotyczą nielicznych ośrodków, to zakażenia o etiologii HHV-6 powinny być brane pod uwagę u osób z niedoborami immunologicznymi, zwłaszcza gdy rutynowe badania w kierunku innych herpeswirusów, takich jak CMV i EBV dają wyniki negatywne. Opisywana w literaturze światowej częstość wykrywania DNA herpeswirusa typu 6 u pacjentów onko-hematologicznych jest zbliżona do zaobserwowanej w badaniach prowadzonych w Katedrze Mikrobiologii Lekarskiej WUM i waha się pomiędzy 30-50% [8,20]. W diagnostyce różnicowej, prócz coraz powszechniej stosowanych testów biologii

7 molekularnej, pomocny może być okres zachorowania. Obserwuje się bowiem, że do zakażeń HHV-6 najczęściej dochodzi pomiędzy 15 a 40 dniem po przeszczepieniu, a więc wcześniej niż do infekcji spowodowanych przez wirusa cytomegalii czy wirusa Epsteina-Barr [20]. W wykonanych podobnie jak w przypadku DNA HHV-6 oznaczeniach materiału genetycznego herpeswirusa typu 7, jego sekwencje wykryto w próbkach pobranych od 47 chorych (47%). U czworga z nich DNA HHV-7 stwierdzono w pojedynczej próbce, u pozostałych wynik dodatni uzyskano w dwóch lub większej ilości próbek [10]. Poziom wiremii określony za pomocą ilościowego badania real-time PCR był zazwyczaj niski (pomiędzy 200 a 3000 kopii/ml), zaś sama wiremia obserwowana była pomiędzy 20 a 60 dniem po przeszczepieniu. Zakażenia te były najprawdopodobniej efektem reaktywacji latentnej formy HHV-7 pod wpływem zastosowanej immunosupresji. Jest to jednak wyłącznie hipoteza, oparta na biologii pozostałych herpeswirusów, jako że brak jest standaryzowanych metod służących do badania obecności przeciwciał skierowanych przeciwko HHV-7 [10]. Zakażenia herpeswirusem typu 7 u osób z zaburzeniami odporności wiązane są głównie: z zapaleniami wątroby u pacjentów poddanych jej przeszczepieniu, zapaleniami mózgu w grupie chorych po transplantacji komórek krwiotwórczych oraz sporadycznie z ostrym odrzuceniem przeszczepu. Dostępne dane literaturowe wskazują także na możliwość uczestniczenia HHV-7 w reaktywacji wirusa cytomegalii ze stanu latencji oraz zaostrzania przebiegu choroby cytomegalowirusowej, co sugerować może wcześniejsze wykrywanie DNA herpeswirusa typu 7 w cięższych przypadkach zakażeń CMV [3]. Podobne obserwacje uzyskano na podstawie badań przeprowadzonych w Katedrze Mikrobiologii Lekarskiej WUM, choć zaznaczyć należy iż obserwowano także przypadki wiremii HHV-7 podczas aktywnego zakażenia cytomegalowirusem. Większość pacjentów, u których wykrywano DNA herpeswirusa typu 7 wykazywała łagodne objawy określane głównie jako gorączka o nieustalonej etiologii. Nie wykazano natomiast żadnego związku pomiędzy wiremią HHV-7 a zwiększoną śmiertelnością w badanej grupie chorych [10]. Prawidłowe monitorowanie oraz profilaktyka zakażeń potransplantacyjnych stanowią istotny czynnik w terapii osób poddanych przeszczepieniu komórek krwiotwórczych. Dotyczy to zwłaszcza diagnostyki zakażeń herpeswirusami, których rozpowszechnienie w populacji zwiększa ryzyko zakażeń oportunistycznych w tej grupie chorych. Wykorzystując technikę ilościowej realtime PCR w badaniach prowadzonych w Katedrze i Zakładzie Mikrobiologii Lekarskiej WUM wykazano, iż infekcje spowodowane przez β-herpeswirusy dotyczą poważnego odsetka pacjentów po transplantacji allogenicznych komórek krwiotwórczych, szczególnie osób poddanych przeszczepieniom komórek macierzystych izolowanych z krwi pępowinowej [9]. Jednocześnie stwierdzono, że zjawisko współzakażeń tymi patogenami jest powszechne [9,10]. Dotyczy to zwłaszcza koinfekcji herpeswirusem typu 7 oraz wirusem cytomegalii, gdzie dalsze badania prowadzone we współpracy z Kliniką Przeszczepiania Komórek Krwiotwórczych Instytutu

8 Hematologii i Transfuzjologii w Warszawie, wykazały iż wiremia HHV-7 nasila poziom wiremii CMV oraz czas jej trwania [17]. Użycie w rutynowych procedurach diagnostyce ultraczułych metod biologii molekularnej gwarantuje wykrycie materiału genetycznego wirusów przy niezwykle niskim poziomie wiremii, wynoszącym około kilkudziesięciu kopii/ml materiału badanego [5]. Umożliwia to odpowiednio wczesne zastosowanie właściwego leczenia przeciwwirusowego i ograniczenie czasu trwania wiremii. Jest to zgodne z obserwacjami innych autorów, gdzie opisywana skuteczność chemioterapii zależała w dużej mierze od poziomu wirusów we krwi i spadała wraz z upływem czasu od początku zakażenia. Stosowana rutynowo w przypadku zakażeń β-herpeswirusami terapia z użyciem gancyklowiru, pomimo swego działania mielotoksycznego, jest nadal terapią z wyboru [11]. Istotne jest więc jak najszybsze ograniczenie podawanych dawek w miarę spadku wykrywalnej wiremii. Podsumowując w wyniku badań prowadzonych w Katedrze Mikrobiologii Lekarskiej WUM, poświęconych zakażeniom β-herpeswirusami wśród biorców allogenicznych przeszczepów komórek krwiotwórczych, wykazano jednoznacznie celowość rutynowego monitorowania zakażeń wirusem cytomegalii z użyciem techniki real-time PCR. Jednocześnie stwierdzono przydatność oznaczania poziomu DNA ludzkich herpeswirusów typu 6 i 7 w tej samej grupie chorych; badania takie pomogły bowiem ustalić potencjalne współzależności pomiędzy tymi patogenami. Dodatkowo w wyniku powyższych prac ustalono częstość występowania DNA wirusa cytomegalii oraz herpeswirusów typu 6 i 7, a także przedziały czasowe największego zagrożenia zakażeniami o etiologii β-herpesvirinae u osób poddanych zabiegom allogenicznej transplantacji komórek krwiotwórczych w Polsce. Wnioski: 1. Testy biologii molekularnej oparte na technice real-time PCR są użytecznym narzędziem do wykrywania zakażeń o etiologii β-herpesvirinae u osób poddanych zabiegowi przeszczepienia allogenicznych komórek krwiotwórczych. Umożliwiają one zarówno wczesne wykrycie zakażenia, jak i zastosowanie oraz monitorowanie odpowiedniego leczenia przeciwwirusowego. 2. Ze względu na rozpowszechnienie HHV-5 w populacji i potencjalne ryzyko dla pacjentów poddanych immunosupresji wskazane jest ciągłe monitorowanie cytomegalowirusa w tej grupie chorych. 3. Obserwowane równoczesne zakażenia pozostałymi β-herpeswirusami mogą wskazywać na istniejące pomiędzy nimi oddziaływania synergistyczne. 4. Osoby dorosłe poddane przeszczepieniu komórek krwiotwórczych pochodzących z krwi pępowinowej są szczególnie narażone na zakażenia spowodowane przez przedstawicieli β- herpesvirinae a spowodowane najprawdopodobniej przez ich reaktywację ze stanu latencji.

9 Piśmiennictwo: 1. Allice T, Enrietto M, Pittaluga F, Varetto S, Franchello A, Marchiaro G, Ghisetti V. Quantitation of cytomegalovirus DNA by real-time polymerase chain reaction in peripheral blood specimens of patients with solid organ transplants: comparison with end-point PCR and pp65 antigen test. J Med Virol 2006; 78(7): Boutolleau D, Fernandez C, André E, Imbert-Marcille BM, Milpied N, Agut H, Gautheret- Dejean A. Human herpesvirus (HHV)-6 and HHV-7: two closely related viruses with different infection profiles in stem cell transplantation recipients. J Infect Dis 2003; 187(2): Chapenko S, Trociukas I, Donina S, Chistyakov M, Sultanova A, Gravelsina S, Lejniece S, Murovska M. Relationship between beta-herpesviruses reactivation and development of complications after autologous peripheral blood stem cell transplantation. J Med Virol 2012; 84(12): Dęborska-Materkowska D, Sadowska A, Matłosz B, Zegarska J, Durlik M. Zakażenie ludzkim wirusem herpes typu 6 u biorcy alloprzeszczepu nerki - opis przypadku. Przegl Epidemiol 2006; 60(1): Dzieciątkowski T, Przybylski M, Tomaszewska A, Rokicka M, Łuczak M. Comparison of two methods used for monitoring low-copy cytomegalovirus infection in a patient with chronic myeloid leukemia after unrelated umbilical cord blood transplantation. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 2007; 55(3): Dzieciątkowski T, Przybylski M, Torosian T, Sulowska A, Łuczak M. Zakażenia cytomegalowirusem (HHV-5, CMV) u biorców allogenicznych przeszczepów komórek krwiotwórczych w Klinice Hematologii, Onkologii i Chorób Wewnętrznych Akademii Medycznej w Warszawie w latach Acta Hemat Pol 2007; 38(3): Dzieciątkowski T, Przybylski M, Torosian T, Tomaszewska A, Łuczak M. Prevalence of human herpesvirus 6 antibodies and DNA in allogeneic stem cell transplant patients: two-year single centre experience. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 2008; 56(3): Dzieciątkowski T, Przybylski M, Kawecki D, Gieryńska M, Sulowska A, Torosian T, Łuczak M, Jędrzejczak WW, Młynarczyk G. Częstość występowania DNA ludzkiego herpeswirusa typu 6 u pacjentów Samodzielnego Publicznego Centralnego Szpitala Klinicznego w latach Przegl Epidemiol 2009; 63(1): Dzieciątkowski T, Przybylski M, Tomaszewska A, Basak GW, Jędrzejczak WW, Młynarczyk G. Detection of beta-herpesviruses in adult cord blood stem cell recipients by real-time PCR - single centre study. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 2010; 58(5): Dzieciątkowski T, Przybylski M, Torosian T, Basak G, Jędrzejczak WW, Młynarczyk G. Human herpesvirus 7 in allogeneic haemopoietic stem cell transplant recipients in Central Clinical Hospital in Warsaw - three years survey. Intervirology 2011; 54(1):

10 11. Emery VC. Investigation of CMV disease in immunocompromised patients. J Clin Pathol 2001; 54(2): Goodrum F, Caviness K, Zagallo P. Human cytomegalovirus persistence. Cell Microbiol 2012; 14(5): Griffiths PD, Clark DA, Emery VC. Betaherpesviruses in transplants recipients. J Antimicrob Chemother 2000; 45(S3): Ljungman P, Urbano-Ispizua A, Cavazzana-Calvo M, Demirer T, Dini G, Einsele H, Gratwohl A, Madrigal A, Niederwieser D, Passweg J, Rocha V, Saccardi R, Schouten H, Schmitz N, Socie G, Sureda A, Apperley J. Allogeneic and autologous transplantation for haematological disaeses, solid tumours and immune disorders: definitions and current practice in Europe. Bone Marrow Transplant 2006; 37(5): Parody R, Martino R, Rovira M, Vazquez L, Vázquez MJ, de la Cámara R, Blazquez C, Fernández-Avilés F, Carreras E, Salavert M, Jarque I, Martín C, Martínez F, López J, Torres A, Sierra J, Sanz GF. Severe infections after unrelated donor allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in adults: comparison of cord blood transplantation with peripheral blood and bone marrow transplantation. Biol Blood Marrow Transplant 2006; 12(7): Sinclair J, Sissons P. Latency and reactivation of human cytomegalovirus. J Gen Virol 2006; 87(P7): Tomaszewska A, Kryśko A, Dzieciątkowski T, Przybylski M, Basak GW, Hałaburda K, Piekarska K, Sulowska A, Nasiłowska-Adamska B, Młynarczyk G, Jędrzejczak WW, Mariańska B. Co-infections with cytomegalovirus and human herpesvirus type 7 in adult Polish allogeneic haematopoietic stem cell transplant recipients. Arch Immunol Ther Exp. (Warsz) 2013; 61: DOI: /s z 18. Tse W, Laughlin MJ. Umbilical cord blood transplantation: a new alternative option. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2005, Zawilinska B, Kopec J, Szostek S, Piatkowska-Jakubas B, Skotnicki AB, Kosz-Vnenchak M. Lymphotropic herpesvirus DNA detection in patients with active CMV infection - a possible role in the course of CMV infection after hematopoietic stem cell transplantation. Med Sci Monit 2011; 17(8): Zerr DM, Corey L, Kim HW, Huang ML, Nguy L, Boeckh M. Clinical outcomes of human herpesvirus 6 reactivation after hematopoietic stem cell transplantation. Clin Infect Dis 2005; 40(7): Pozostałe osiągnięcia naukowe: Pracę naukową rozpocząłem jako student 4 roku Międzywydziałowego Studium Biotechnologii SGGW w Pracowni Wirusologii Katedry Mikrobiologii i Immunologii, Wydziału

11 Weterynaryjnego. Tematem mojej pracy magisterskiej było badanie ekspresji RNA związanego z latencją (LR-RNA) herpeswirusa koni typu 1 w leukocytach krwi obwodowej koni. Badania dotyczące zakażeń końskimi herpeswirusami kontynuowałem podczas studiów doktoranckich prowadzonych w Katedrze Nauk Przedklinicznych, Wydziału Medycyny Weterynaryjnej. Zostały one uwieńczone obroną rozprawy doktorskiej, zatytułowanej: Wpływ końskiego herpeswirusa typu 2 (EHV-2) na produktywne zakażenie wirusem zakaźnego ronienia klaczy (EHV-1) w warunkach in vitro. Promotorem jej była dr hab. Danuta Klimuszko, zaś recenzentami prof. dr hab. Jerzy Kita oraz dr hab. Jerzy Rola. Sama praca uzyskała zaś wyróżnienie Rady Wydziału Medycyny Weterynaryjnej SGGW. Po obronie pracy doktorskiej i zatrudnieniu w Katedrze i Zakładzie Mikrobiologii Lekarskiej Warszawskiego Uniwersytetu Medycznego tematyka moich badań skupiona była na wirusowych zakażeniach u osób poddanych zabiegowi przeszczepienia komórek krwiotwórczych. Oprócz prac prowadzonych nad występowaniem infekcji o etiologii β-herpesvirinae w tej grupie chorych, które wskazałem jako znaczące osiągnięcie wynikające z art. 16 ust. 2 z dnia 14 marca 2003 roku o stopniach i tytule naukowym oraz o stopniach i tytule w zakresie sztuki (Dz. U. Nr 65, poz. 595 z późn. zm.), tematem moich pozostałych prac było zastosowanie techniki reakcji łańcuchowej polimeryzacji z detekcją w czasie rzeczywistym (real-time PCR; qpcr) w wykrywaniu i/lub analizie ilościowej materiału genetycznego wirusów. Zaprojektowane i zwalidowane z moim współudziałem testy do wykrywania DNA lub RNA wirusów wykorzystywane były w trakcie dalszych badań prowadzonych w Katedrze i Zakładzie Mikrobiologii Lekarskiej WUM a poświęconych zakażeniom adenowirusami u osób z zaburzeniami odporności oraz w ramach współpracy z Kliniką Przeszczepiania Komórek Krwiotwórczych Instytutu Hematologii i Transfuzjologii w Warszawie podczas oznaczeń częstości zakażeń α-herpeswirusami oraz koinfekcji wirusem cytomegalii i herpeswirusem typu 7 u pacjentów poddanych transplantacji allogenicznych komórek krwiotwórczych. Mój dotychczasowy dorobek naukowy obejmuje 61 publikacji, o łącznej wartości IF= 28,134 oraz 40 doniesień prezentowanych na międzynarodowych i krajowych konferencjach naukowych. Osiągnęły one według punktacji naukowej MNiSzW łączną liczbę 639 punktów, zaś ich Index Copernicus (IC) wynosi 431,84. Sumaryczny impact factor publikacji, których jestem pierwszym autorem wynosi IF= 17,345, w tym prac wskazanych jako znaczące osiągnięcie wynikające z art. 16 ust. 2 z dnia 14 marca 2003 roku o stopniach i tytule naukowym oraz o stopniach i tytule w zakresie sztuki (Dz. U. Nr 65, poz. 595 z późn. zm.) IF= 7,392. Publikacje mojego współautorstwa cytowane były (bez autocytowań) na podstawie bazy Web of Science 16 razy i osiągnęły indeks Hirscha h= 3 (dane z dn ). Prace powyższe opublikowane były w: Acta Haematologica Polonica (2), Acta Virologica (1), Annales of Medical Sciences (1), Archives of Virology (2), Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis (6), Ginekologia Praktyczna (2), Intervirology (1), Journal of Clinical Virology

12 (1), Medycyna Doświadczalna i Mikrobiologia (11), Medycyna Weterynaryjna (4), Planta Medica (1), Polish Journal of Veterinary Science (5), Postępy Mikrobiologii (10), Przegląd Dermatologiczny (4), Przegląd Epidemiologiczny (3), Transplantation Proceedings (1), Zakażenia (3), Życie Weterynaryjne (3). 6. Życiorys dydaktyczny: 6.1 Prowadzona działalność dydaktyczna: Prowadzenie wykładów i ćwiczeń z przedmiotu mikrobiologia lekarska dla studentów 3 roku II Wydziału Lekarskiego WUM w latach Prowadzenie wykładów i ćwiczeń z przedmiotu diagnostyka mikrobiologiczna dla studentów 4 roku Oddziału Analityki Medycznej Wydziału Farmaceutycznego WUM w latach Udział w organizacji i prowadzeniu wykładów na kursie specjalizacyjnym Etiologia, obraz kliniczny i diagnostyka zakażeń wirusowych, organizowanym przez WUM w latach 2006, 2007, 2008, 2010 oraz 2013 w ramach specjalizacji mikrobiologia medyczna. Udział w organizacji i prowadzeniu wykładów oraz ćwiczeń na kursach specjalizacyjnych Metody biologii molekularnej w dagnostyce mikrobiologicznej, organizowanym przez WUM w roku 2010 w ramach specjalizacji mikrobiologia medyczna. Udział w organizacji i prowadzeniu wykładów oraz ćwiczeń na kursach specjalizacyjnych Serologiczna diagnostyka wybranych zakażeń bakteryjnych, wirusowych i grzybiczych oraz zakażeń pasożytniczych, organizowanym przez WUM w roku 2010 w ramach specjalizacji mikrobiologia medyczna. 6.2 Promotorstwo prac dyplomowych: Promotorstwo pracy magisterskiej Łukasza Chabrosa: Modyfikacja i optymalizacja metod PCR do wykrywania regionu MIE ludzkiego herpeswirusa typu 5, obronionej w roku 2008 na Międzywydziałowym Studium Biotechnologii SGGW w Warszawie. Promotorstwo pracy magisterskiej Agnieszki Roli: Zastosowanie metody real-time PCR z użyciem sond TaqMan do wykrywania zakażeń adenowirusami człowieka, obronionej w roku 2008 na Wydziale Rolnictwa i Biologii SGGW w Warszawie. Promotorstwo pracy inżynierskiej Eweliny Osińskiej: Zakażenia betaherpeswirusami u pacjentów z wtórnymi niedoborami odporności, obronionej w roku 2010 na Międzywydziałowym Studium Biotechnologii SGGW w Warszawie. Promotorstwo pracy magisterskiej Sylwii Rynans: Występowanie zakażeń adenowirusowych u pacjentów hematologicznych z wtórnymi zaburzeniami odporności,

13 obronionej w roku 2010 na Międzywydziałowym Studium Biotechnologii SGGW w Warszawie Promotorstwo pracy magisterskiej Karoliny Karabin: Zastosowanie metody real-time PCR z użyciem sond TaqMan do wykrywania zakażeń ludzkimi herpeswirusami typu 1 i 2, obronionej w roku 2010 na Wydziale Rolnictwa i Biologii SGGW w Warszawie. Promotorstwo pracy magisterskiej Emilii Chudzik: Zastosowanie metody real-time PCR z użyciem sond typu HybProbe do wykrywania zakażeń ludzkimi herpeswirusami typu 1 i 2, obronionej w roku 2010 na Wydziale Rolnictwa i Biologii SGGW w Warszawie. Promotorstwo pracy licencjackiej Angeliki Długosz: Udział ludzkich wirusów brodawczaka w onkogenezie, obronionej w roku 2010 na Wydziale Rolnictwa i Biologii SGGW w Warszawie. Promotorstwo pracy magisterskiej Eweliny Osińskiej: Zastosowanie metody real-time PCR z użyciem sond typu HybProbe do wykrywania DNA końskiego herpeswirusa typu 2 (EHV-2), obronionej w roku 2011 na Międzywydziałowym Studium Biotechnologii SGGW w Warszawie Promotorstwo pomocnicze w przewodzie doktorskim mgr. inż. Sylwii Rynans (promotor: prof. dr hab. Grażyna Młynarczyk). Przewód doktorski zatytułowany Częstość zakażeń wywoływanych przez ludzkie adenowirusy wśród biorców allogenicznych przeszczepów komórek krwiotwórczych w Klinice Hematologii, Onkologii i Chorób Wewnętrznych WUM w latach , otwarty został na I Wydziale Lekarskim Warszawskiego Uniwersytetu Medycznego planowany termin obrony: czerwiec Prowadzona działalność popularyzująca naukę: Wykład gościnny Metody diagnostyki zakażeń CMV, wygłoszony w Klinice Niewydolności Serca i Transplantologii Instytutu Kardiologii w Warszawie. Wykład gościnny Metody współczesnej diagnostyki mikologicznej, wygłoszony na posiedzeniu Mazowieckiego Oddziału Polskiego Towarzystwa Anestezjologii i Intensywnej Terapii. Wykład gościnny Molekularne metody diagnostyki wirusologicznej, wygłoszony w Klinice Niewydolności Serca i Transplantologii Instytutu Kardiologii w Warszawie. Wykład gościnny Metody badań wirusologicznych, wygłoszony w dla studentów 4 roku Wydziału Medycyny Weterynaryjnej w Szkole Głównej Gospodarstwa Wiejskiego w Warszawie. Wykład Molekularne metody diagnostyki wirusologicznej, wygłoszony podczas konferencji Pacjent w obliczu współczesnej diagnostyki laboratoryjnej. Warszawa,

14 Wykład gościnny Podstawy chemioterapii zakażeń wirusowych, wygłoszony w dla studentów 2 roku Międzywydziałowego Studium Biotechnologii w Szkole Głównej Gospodarstwa Wiejskiego w Warszawie. Wykład Testy qpcr do diagnostyki mikrobiologicznej wymogi CE dla odczynników i aparatury, wygłoszony podczas konferencji Kontrowersje wokół jakości w laboratorium molekularno-genetycznym, Poznań Wykład Molekularne metody diagnostyki mikrobiologicznej, wygłoszony dla oddziału rzeszowskiego Polskiego Towarzystwa Diagnostyki Laboratoryjnej. Wykład Herpeswirus typu 7 niewinny winowajca?, wygłoszony na posiedzeniu warszawskiego oddziału Polskiego Towarzystwa Wirusologicznego. Wykład Wykorzystanie techniki FilmArray w diagnostyce zakażeń dróg oddechowych u osób z niedoborami odporności, wygłoszony podczas III Lubelskich Dni Wirusologicznych. 8. Członkostwo w towarzystwach naukowych: Członek Krajowej Izby Diagnostów Laboratoryjnych KIDL (od roku) Członek European Society for Clinical Virology ESCV (od 2006 roku) Członek of Gesellschaft für Virologie GfV (od 2008 roku) Członek Polskiego Towarzystwa Wirusologicznego (od 2013 roku) /Tomasz Dzieciątkowski/