Wymagania dotyczące pierwszorzędowych materiałów odniesienia produktów zielarskich

Transkrypt

1 Wymagania dotyczące pierwszorzędowych materiałów odniesienia produktów zielarskich Agnieszka Kossakowska sigma-aldrich.com Warszawa,

2 Wymagania prawne dla materiałów odniesienia European Pharmacopoeia 5.12: Reference standards are shown to be suitable for their intended purpose; they are not necessarily suitable for other purposes. If a reference standard is to be used for any purpose other than that for which it has been established, its suitability for the new use has to be fully demonstrated. Any value assigned to a reference standard is valid for the intended use and not necessarily for other uses. Materiały odniesienia: odpowiednie tylko do określonego zastosowania nie zawsze odpowiednie do innych celów jeśli do innych celów niż te, do których je zatwierdzono trzeba wykazać, że się do tego kwalifikują każda wartość przypisana do danego materiału odniesienia dotyczy tylko danego zastosowania

3 Wymagania prawne dla materiałów odniesienia W analizach farmaceutycznych, materiał odniesienia: musi być zawarty w dokumentacji pozwolenia na dopuszczenie do obrotu leku / produktu farmaceutycznego musi być używany w kontroli jakości w testach stabilności w kontroli produkcji w kontroli surowców Nieodpowiednie materiały odniesienia są trzecim największym źródłem niedociągnięć wyłapywanym przez audytorów!

4 Dostępność pierwszorzędowych materiałów odniesienia Dostawcy: USP, EDQM (European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare, Strasbourg, France) dostawcy komercyjni dostępność koszty dokumentacja Samodzielne wytwarzanie i kwalifikowanie: Know-how i możliwości produkowania Know-how i możliwości kwalifikowania Know-how w kwestii interpretacji danych z badań strukturalnych Materiały odniesienia dla produktów zielarskich są bardzo rzadko dostępne.

5 Kwalifikacja skład pierwszorzędowego materiału odniesienia Identyfikacja za pomocą badań spektroskopowych, np. 1 H-NMR, 13 C-NMR, MS, UV, IR (sprawdzenie enancjomerów w razie potrzeby) Określenie zawartości za pomocą dwóch niezależnych zwalidowanych metod analitycznych, takich jak czystość chromatograficzna uwzględniająca: rozpuszczalniki resztkowe zawartość wody (miareczkowanie Karla Fischera) ewentualnie także analiza elementarna lub oznaczanie pozostałości po prażeniu (zanieczyszczenia nieorganiczne)

6 Klasyczna metoda określania zawartości gdzie: C - zawartość materiału odniesienia [%] C - wynik dla materiału odniesienia z danej metody analitycznej [%] R - zawartość rozpuszczalników resztkowych [%] W - zawartość wody [%] I - zawartość zanieczyszczeń nieorganicznych [%] X C = C ( R - W - I - X 100 ) - pozostałe zanieczyszczenia

7 Klasyczna metoda określania zawartości wady Większa niepewność oznaczonej wielkości (sumowanie) Zawartość chromatograficzna jest poprawna tylko jeśli: czystość przekracza 99,5% (rzadko dla produktów wyizolowanych z roślin), lub współczynniki adsorpcji dla analitu i zanieczyszczeń są równe (rzadko) Oczyszczanie materiałów odniesienia dla produktów zielarskich jest zazwyczaj wykonywane technikami chromatograficznymi (zanieczyszczenia nie zawsze widoczne) Dla różnych metod analitycznych potrzebne są dosyć duże ilości cennych materiałów

8 Ziołowe produkty lecznicze (Herbal Medicinal Products, HMPs) Zawierają: ekstrakty z roślin leczniczych przerobione części roślin leczniczych O 0,16 0,14 Ekstrakt z korzenia arcydzięgla (Angelica archangelica) AU 0,12 0,10 0,08 0,06 0,04 0,02 0,00 0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00 Minu tes

9 Ziołowe produkty lecznicze Materiałem odniesienia może być: standardowa postać leku preparat leku (np. ekstrakt lub nalewka) określona chemiczna substancja

10 Ziołowe produkty lecznicze definicje przewodnika EMA (European Medicines Agency) Komponent o znanej aktywności terapeutycznej" ogólnie przyjęte za wnoszące znaczący wkład do aktywności terapeutycznej rzadko znane "Aktywny znacznik" ogólnie przyjęte za wpływające na aktywność terapeutyczną, ale nie odpowiedzialne za całościowy efekt leczniczy Znacznik analityczny" charakterystyczne składniki służące wyłącznie do celów analitycznych występujące tylko w danej roślinie

11 Zastosowanie materiałów odniesienia dla HMPs g 0,080 Ekstrakt z ostu (Silybum marianum) 0,070 0,060 AU 0,050 0,040 Sylibina 0,030 0,020 silibin a - 29,100 silibin b - 30,784 0,010 0,000 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00

12 Zastosowanie materiałów odniesienia dla HMPs AU 0,080 0,070 0,060 0,050 0,040 0,030 0,020 Herbal Medicinal Product silibin a - 29,120 silibin b - 30,812 Stat. Phase: Ascentis Express C18, 100 x 2.1 mm (2.7 µm) Mob. Phase: Water/TFA/ACN/MeOH, Gradient Flow rate: 0,4 ml/min Temp.: 30 C Det.: 287 nm HPLC system: Waters Acquity UPLC 0,010 0,000 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00

13 qnmr jest relatywną metodą pierwszorzędową Quantitative NMR (qnmr) Intensywność sygnału jest: proporcjonalna do ilości protonów niezależna od struktury chemicznej

14 Zalety qnmr Niskie niepewności Nie niszczy próbki Idenfytikacja struktury Identyfikacja zanieczyszczeń Wymaga małych ilości próbki

15 qnmr: procedura Internal Standard Highprecision weighing Sample Solvent 1 H-NMR measurements Data processing

16 Oznaczanie zawartości poprzez qnmr Analyte Internal Standard with known content Acenaphthene 4 protons Dimethylsulfone 6 protons ppm

17 Podstawy techniczne ilościowego NMR Wzorzec wewnętrzny i materiał odniesienia są odważane razem do probówki NMR (z rozpuszczalnikiem). Do obliczeń wykorzystuje się intensywności odpowiednich sygnałów dla materiału odniesienia (I x ) i dla wzorca wewnętrznego (I Std ). Zawartość P x może być wyznaczona z równania: N x, N Std liczba protonów biorących udział w rezonansie M x, M Std masy molowe m x, m Std masy naważek P Std czystość wzorca wewnętrznego

18 Podstawy techniczne ilościowego NMR Wzorce wewnętrzne 20

19 Podstawy techniczne ilościowego NMR Ginsenozyd Rc Rozpuszczalnik: pirydyna-d 5 Problem: skomplikowane widmo z wieloma pikami ppm

20 Podstawy techniczne ilościowego NMR Ginsenozyd Rc: wybór odpowiedniego wzorca wewnętrznego

21 Zalety stosowania qnmr oznaczanie rozpuszczalników resztkowych Kwas cykoriowy Metanol Etanol Octan sodu R-CH 2 -CH 3 Metanol: 1,5 g/g % GC (HWI): 0,56 % Etanol: 0,08 g/g % GC (HWI): 0,02 % 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0

22 Zalety stosowania qnmr można wykryć więcej zanieczyszczeń niż w metodach chromatograficznych zapewnia równocześnie dowód tożsamości metoda zwalidowana dla oznaczania zawartości zgodnie z odpowiednim przewodnikiem ICH [1] wykazano, że metoda ta jest odpowiednio powtarzalna (porównanie międzylaboratoryjne z 22 uczestnikami z przemysłu, instytucji badawczych i uniwersytetów) [2] ICH - International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use [1] ICH Q2R: Validation of analytical procedures. Available at: [2] Analytix (2010) 1

23 Jak takie materiały odniesienia wyglądają? Dokładna zawartość jest podana na pudełku i na fiolce!

24 Jak takie materiały odniesienia wyglądają?

25 Pierwszorzędowe materiały odniesienia dla HMPs Aktualnie dostępnych jest 56 pierwszorzędowych materiałów odniesienia dla ziołowych produktów leczniczych. Kwalifikacja prowadzona przez uznanego wytwórcę farmaceutyczncyh materiałów odniesienia HWI ANALYTIK kompletna dokumentacja do celów autoryzacyjnych wszystkich wzorców jest dostarczana bezpośrednio przez HWI ANALYTIK Więcej informacji dostępne na stronie:

26 Podsumowanie Metoda qnmr: niższe niepewności oznaczanych wielkości ortogonalna do technik chromatograficznych pozwala na wykrycie większych ilości zanieczyszczeń niż w metodach chromatograficznych bardziej rzetelne dane dotyczące oznaczonej zawartości potrzebuje mniejszych ilości cennych substancji zapewnia równoczesne potwierdzenie tożsamości redukcja kosztów metoda zwalidowana zgodnie z wytycznymi ICH zaakceptowana przez audytorów Wzorce HWI: dokładna zawartość podana na każdej fiolce znacznie ułatwia pracę

27 DZIĘKUJĘ ZA UWAGĘ!