Probówka wskaÿnikowa do okreœlania tempa wzrostu pr¹tków z dodatkiem wzrostowym BACTEC MGIT oraz mieszank¹ antybiotykow¹ BBL MGIT PANTA

Transkrypt

1 BBL MGIT Mycobacteria Growth Indicator Tube 7 ml Probówka wskaÿnikowa do okreœlania tempa wzrostu pr¹tków z dodatkiem wzrostowym BACTEC MGIT oraz mieszank¹ antybiotykow¹ BBL MGIT PANTA L000180JAA 2007/06 Polski PRZEZNACZENIE Probówka do okreœlania wzrostu pr¹tków BBL MGIT wzbogacona o dodatek wzrostowy BACTEC MGIT oraz mieszankê antybiotykow¹ BBL MGIT PANTA, s³u y do wykrywania oraz wyodrêbniania pr¹tków za pomoc¹ Systemu BACTEC MGIT 960. Próbki, nadaj¹ce siê do stosowania w systemie, to próbki kliniczne, odka one i ekstrahowane (z wyj¹tkiem moczu) oraz sterylne p³yny ustrojowe (z wyj¹tkiem krwi). STRESZCZENIE I OBJAŒNIENIE Od 1985 do 1992 roku liczba odnotowanych przypadków zaka enia Mycobacterium tuberculosis (MTB) wzros³a o 18%. Szacuje siê, e gruÿlica nadal zabija rocznie 3 miliony osób na ca³ym œwiecie, co czyni z niej g³ówn¹ chorobê zakaÿn¹, stanowi¹c¹ przyczynê zgonów 1. Przeprowadzone pomiêdzy rokiem 1981 i 1987 badania zachorowañ na AIDS wskaza³y, e 5,5% pacjentów chorych na AIDS mia³o rozprzestrzenione niegruÿlicze zaka enia pr¹tkowe, np. wywo³ane przez MAC. Do roku 1990 skumulowana czêstoœæ wystêpowania niegruÿliczych zaka eñ pr¹tkowych osi¹gnê³a 7,6% 2. Oprócz wielu œwie ych zachorowañ na gruÿlicê pojawi³ siê nowy problem wielooporne pr¹tki (MDR-TB, multidrug-resistant MTB). OpóŸnienia laboratoriów w hodowli, identyfikacji oraz informowaniu o przypadkach MDR-TB przyczyni³y siê czêœciowo do rozprzestrzenienia choroby 3. Centrum Zapobiegania i Zwalczania Chorób w USA (CDC, Centers for Disease Control and Prevention) wyda³o zalecenia, i nale y do³o yæ wszelkich starañ, aby w laboratoriach stosowane by³y najszybsze mo liwe metody do wykrywania i badania pr¹tków. Zalecenia te obejmuj¹ stosowanie zarówno p³ynnych jak i sta³ych pod³o y do hodowli pr¹tków 3,4. Probówka wskaÿnikowa do okreœlania wzrostu pr¹tków MGIT zawiera 7 ml zmodyfikowanej bazy bulionowej Middlebrook 7H9 5,6. Pe³ne pod³o e, zawieraj¹ce œrodek wzbogacaj¹cy OADC oraz mieszankê antybiotykow¹ PANTA jest jednym z najczêœciej stosowanych p³ynnych pod³o y, wykorzystywanych do hodowli pr¹tków. Wszystkie rodzaje próbek klinicznych, zarówno p³ucnych, jak i pozap³ucnych (oprócz krwi i moczu), mog¹ byæ przetwarzane w celu wstêpnej izolacji, w probówce MGIT, przy u yciu metod konwencjonalnych 4. Przygotowana próbka jest inokulowana do probówki MGIT, umieszczana w systemie BACTEC MGIT 960 w celu ci¹g³ego monitorowania do chwili uzyskania wyniku dodatniego lub zakoñczenia protoko³u testowego. ZASADY PROCEDURY Na dnie pó³okr¹g³o zakoñczonych probówek 16 x 100 mm znajduje siê osadzony w silikonie, fluorescencyjny komponent. Jest on wra liwy na dzia³anie rozpuszczonego w po ywce bulionowej tlenu. Pocz¹tkowo pojawia siê tylko niewielka fluorescencja, poniewa wstêpna du a iloœæ rozpuszczonego tlenu absorbuje emisje pochodz¹ce z komponentu. PóŸniej aktywnie oddychaj¹ce mikroorganizmy wykorzystuj¹ tlen, co pozwala na wykrycie fluorescencji. Probówki wprowadzone do systemu BACTEC MGIT 960 s¹ w sposób ci¹g³y inkubowane w temperaturze 37 C i monitorowane co 60 min pod wzglêdem wzrastaj¹cej fluorescencji. Analiza fluorescencji stosowana jest do okreœlenia, czy w probówce uzyskany zosta³ wynik dodatni, tzn. czy badana próbka zawiera ywe drobnoustroje. Probówka z wynikiem dodatnim zawiera œrednio 10 5 do 10 6 jednostek tworz¹cych kolonie na mililitr (CFU/mL). Fiolki do hodowli, dla których wynik pozostaje ujemny przez co najmniej 42 dni (do 56 dni) i które nie wykazuj¹ w ocenie wzrokowej cech wyniku dodatniego, usuwa siê z aparatu jako wynik ujemny i przed likwidacj¹ poddaje sterylizacji. Dodatek wzrostowy BACTEC MGIT dodawany jest do ka dej probówki MGIT, aby zapewniæ substancje niezbêdne do szybkiego wzrostu pr¹tków. Kwas oleinowy jest wykorzystywany przez pr¹tki gruÿlicy i odgrywa wa n¹ rolê w procesach metabolicznych organizmów pr¹tków. Albumina pe³ni rolê ochronn¹, wi¹ ¹c wolne kwasy t³uszczowe, które mog¹ byæ toksyczne dla gatunków Mycobacterium i tym samym przyspiesza ich wzrost. Dekstroza stanowi Ÿród³o energii. Katalaza niszczy toksyczne nadtlenki, które mog¹ byæ obecne w po ywce. Zanieczyszczenie mo na zmniejszyæ przez dodanie (przed wykonaniem inokulacji próbki klinicznej) do bazy bulionowej BBL MGIT ze œrodkiem wzbogacaj¹cym BACTEC MGIT mieszanki antybiotykowej BBL MGIT PANTA. ODCZYNNIKI Probówka wskaÿnikowa do okreœlania tempa wzrostu pr¹tków BBL MGIT zawiera: 110 µl wskaÿnika fluorescencyjnego oraz 7 ml bulionu. WskaŸnik zawiera: piêciowodny chlorek tri-4,7-difenylo-1,10-fenantrolinorutenu w bazie z kauczuku silikonowego. Probówki s¹ przep³ukiwane 10% CO 2 i zamykane zatyczkami z polipropylenu. Przybli ona formu³a* na litr wody oczyszczonej: Zmodyfikowana baza bulionowa Middlebrook 7H9... 5,9 g Pepton kazeinowy... 1,25 g Dodatek wzrostowy BACTEC MGIT zawiera 15 ml œrodka wzbogacaj¹cego Middlebrook OADC. Przybli ona formu³a* na litr wody oczyszczonej: Albumina bydlêca... 50,0 g Katalaza... 0,03 g Dekstroza... 20,0 g Kwas oleinowy... 0,1 g Stearynian polioksyetylenu (POES)... 1,1 g Fiolka BBL MGIT PANTA zawiera liofilizowan¹ mieszaninê antybiotyków. Przybli ona formu³a* na fiolkê liofilizowanej mieszaniny PANTA: Polimyksyna B jedn. Trimetoprim µg Amfoterycyna B µg Azlocylina µg Kwas nalidyksowy µg *Skorygowany i/lub uzupe³niony zgodnie z wymaganiami kryteriów dzia³ania. Przechowywanie odczynników: Probówki wskaÿnikowe BBL MGIT nale y przechowywaæ w temperaturze 2 25 C. NIE ZAMRA AÆ. Chroniæ przed dzia³aniem œwiat³a. Bulion powinien byæ przejrzysty i bezbarwny. Nie stosowaæ, je eli po ywka jest mêtna. Probówki MGIT, jeœli przed u yciem s¹ przechowywane zgodnie z zaleceniami na etykiecie, mog¹ byæ poddane inokulacji do wygaœniêcia daty wa noœci oraz inkubowane przez okres do oœmiu tygodni. Dodatek wzrostowy BACTEC MGIT Po otrzymaniu przechowywaæ w ciemnym pomieszczeniu, w temperaturze 2 8 C. Unikaæ zamra ania oraz przegrzania. Nie otwieraæ do chwili u ycia. Chroniæ przed dzia³aniem œwiat³a. Mieszanina antybiotykowa BBL MGIT PANTA Po otrzymaniu przechowywaæ fiolki z liofilizatem w temperaturze 2 8 C. Po rozpuszczeniu mieszaninê PANTA przechowywaæ w temperaturze 2 8 C i wykorzystaæ w ci¹gu 5 dni. OSTRZE ENIA I ŒRODKI OSTRO NOŒCI: Do stosowania w diagnostyce in vitro. Produkt zawiera suchy kauczuk naturalny. W próbkach klinicznych mog¹ byæ obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirusy zapalenia w¹troby i wirus HIV. Przy kontakcie z ka dym materia³em zanieczyszczonym krwi¹ lub innymi p³ynami ustrojowymi nale y przestrzegaæ Uniwersalnych œrodków ostro noœci 7-10 oraz instrukcji stosowanych w placówce. Praca z hodowlami Mycobacterium tuberculosis wymaga stosowania metod dzia³ania oraz u ywania zabezpieczaj¹cego sprzêtu laboratoryjnego, zgodnych z wytycznymi praktyk bezpieczeñstwa biologicznego (BSL, Biosafety Level) poziomu 3. 4 Przed u yciem nale y sprawdziæ, czy probówka MGIT nie jest zanieczyszczona lub uszkodzona. Wyrzuciæ wszelkie probówki, które wydaj¹ siê nieodpowiednie.

2 Nale y dok³adnie sprawdziæ probówki, które zosta³y upuszczone. Jeœli widoczne s¹ jakiekolwiek uszkodzenia, probówkê nale y wyrzuciæ. W przypadku st³uczenia probówki: 1) Zamkn¹æ szuflady urz¹dzenia; 2) Wy³¹czyæ urz¹dzenie; 3) Niezw³ocznie opuœciæ miejsce; 4) Sprawdziæ wytyczne instytucji (CDC). Probówka, w której zachodzi wzrost bakterii, a przecieka lub zosta³a st³uczona, mo e doprowadziæ do powstawania aerozolu pr¹tków; nale y z ni¹ odpowiednio postêpowaæ. Przed wyrzuceniem nale y wysterylizowaæ w autoklawie wszystkie probówki MGIT, które poddano inokulacji. POBIERANIE PRÓBEK I POSTÊPOWANIE Z NIMI Wszystkie próbki nale y pobieraæ i transportowaæ zgodnie z zaleceniami CDC, podrêcznikiem Clinical Microbiology Procedures Handbook lub podrêcznikiem procedur laboratoryjnych, obowi¹zuj¹cym w laboratorium U ytkownika 11. TRAWIENIE, ODKA ANIE I ZAGÊSZCZANIE MATERIA U Próbki pobrane z ró nych miejsc cia³a powinny byæ przygotowane do inokulacji w probówkach MGIT w nastêpuj¹cy sposób: PLWOCINA: Próbki nale y przetwarzaæ z zastosowaniem metody NALC-NaOH, zgodnie z wytycznymi CDC zawartymi w Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory 4. Ewentualnie mo na stosowaæ zestaw BBL MycoPrep, przeznaczony do przetwarzania próbek zawieraj¹cych pr¹tki (zobacz czêœæ Dostêpnoœæ ). TREŒÆ O DKOWA: Próbki powinny byæ oczyszczane tak jak plwocina. Jeœli objêtoœæ próbki przekracza 10 ml, nale y j¹ zagêœciæ poprzez odwirowanie. Rozcieñczyæ osad w oko³o 5 ml sterylnej wody, a nastêpnie oczyœciæ. Je eli próbka jest gêsta lub œluzowata, dodaæ niewielk¹ iloœæ proszku NALC ( mg). Po oczyszczeniu, a przed dokonaniem inokulacji w probówce MGIT, ponownie zagêœciæ zawiesinê. P YNY USTROJOWE: (p³yn mózgowo-rdzeniowy, p³yn stawowy, p³yn z jamy op³ucnej itd.): Próbki pobrane w sposób ja³owy, w których nie s¹ spodziewane adne inne zanieczyszczenia bakteryjne, mo na inokulowaæ bez odka ania. Jeœli objêtoœæ próbki przekracza 10 ml, nale y j¹ zagêœciæ poprzez odwirowanie przez 15 minut przy 3000 x g. Wylaæ nads¹cz. Dokonaæ inokulacji probówki MGIT za pomoc¹ osadu. Próbki, w których istnieje ryzyko obecnoœci innych bakterii, musz¹ zostaæ poddane oczyszczeniu. TKANKA: Próbki z tkanki nale y przygotowaæ zgodnie z wytycznymi CDC zawartymi w Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory 4. Rutynowa inokulacja pod³o a sta³ego jest szczególnie wa na dla optymalnej izolacji pr¹tków z próbek tkankowych, poniewa próbki te s¹ szczególnie podatne na izolacjê sporadycznych drobnoustrojów. STOLEC: Zawiesiæ 1 g próbki ka³u w 5 ml bulionu Middlebrook. Mieszaæ zawiesinê na mieszadle przez 5 s. Przejœæ do procedury NALC-NaOH zgodnie z zaleceniami Przewodnika dla Laboratoriów III Poziomu CDC's Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory 4. UWAGA: We wszystkich metodach przygotowania próbek nale y stosowaæ roztwór buforu fosforanowego (ph 6,8) do rozcieñczenia mieszaniny odka aj¹cej próbki do 50 ml przed wirowaniem. Rozcieñczenie osadu nale y równie wykonywaæ, stosuj¹c œwie o przygotowany roztwór buforu fosforanowego (ph 6,8). PROCEDURA Dostarczane materia³y: Probówki wskaÿnikowe wzrostu pr¹tków BBL MGIT oraz zestaw dodatków BACTEC MGIT 960, zawieraj¹cy dodatek wzrostowy BACTEC MGIT i mieszankê antybiotykow¹ BBL MGIT PANTA (zobacz czêœæ Dostêpnoœæ ). Materia³y niezbêdne, ale niedostarczane: Probówki do wirówki o pojemnoœci 50 ml marki Falcon, 4% wodorotlenek sodu, 2,9% roztwór cytrynianu sodu, proszek N-acetylo-L-cysteiny, fosforanowy roztwór buforowy o ph 6,8, urz¹dzenie do mieszania, inkubator (37 C), sterylne pipety 1 ml, sterylne pipety transferowe, pod³o e BBL Middlebrook and Cohn 7H10 Agar, BBL MycoPrep zestaw do trawienia / odka ania próbki, po ywka bulionowa BBL Middlebrook 7H9 (zobacz czêœæ Dostêpnoœæ ) lub inny agar pr¹tkowy lub œrodek oparty na jajku kurzym. Homogenizator tkankowy lub sterylne waciki, fizjologiczny roztwór soli BBL (zobacz czêœæ Dostêpnoœæ ), szczepy ATCC #27294, 12478, 6841, mikroskop i materia³y do barwienia, pipety o zmienianej objêtoœci 1000 µl, odpowiadaj¹ce im koñcówki, p³ytki z 5% agarem z dodatkiem krwi owczej oraz przeciwpr¹tkowy œrodek odka aj¹cy. INOKULACJA PROBÓWEK MGIT: Probówki BBL MGIT 7 ml musz¹ byæ stosowane z urz¹dzeniem BACTEC MGIT Rozpuœciæ liofilizat zawartej w fiolce mieszaniny antybiotykowej BBL MGIT PANTA w 15 ml dodatku wzrostowego BACTEC MGIT. 2. Oznaczyæ probówkê MGIT numerem próbki. 3. Odkrêciæ nakrêtkê i w sposób ja³owy dodaæ 0,8 ml dodatku wzrostowego/mieszaniny antybiotykowej MGIT PANTA. W celu uzyskania lepszych rezultatów dodatek wzrostowy/mieszaninê antybiotykow¹ MGIT PANTA nale y dodaæ bezpoœrednio przed wykonaniem inokulacji próbki. 4. Dodaæ 0,5 ml zagêszczonej zawiesiny próbki, przygotowanej wed³ug powy ej opisanej procedury. Kroplê (0,1 ml) próbki nanieœæ równie na p³ytkê z agarem 7H10 lub innym pr¹tkowym agarem sta³ym, albo z pod³o em opartym na jajku kurzym. 5. Dok³adnie zamkn¹æ probówkê i dobrze wymieszaæ. 6. Probówki wprowadzone do urz¹dzenia bêd¹ badane automatycznie przez okres zalecanego 42 dniowego protoko³u testowego. Dla próbek, w których mog¹ znajdowaæ siê pr¹tki o ró nych wymaganiach inkubacyjnych, mo na zastosowaæ drug¹ probówkê MGIT i poddaæ j¹ inkubacji w odpowiedniej temperaturze, np. 30 lub 42 C. Dokonaæ inokulacji i inkubowaæ w wymaganej temperaturze Probówki te musz¹ byæ odczytywane rêcznie (patrz Podrêcznik U ytkownika BACTEC MGIT 960). Je eli w próbkach podejrzewa siê obecnoœæ Mycobacterium haemophilum, do probówki nale y w chwili inokulacji dodaæ Ÿród³o heminy oraz inkubowaæ probówkê w temperaturze 30 C. Przed inokulacj¹ próbki w sposób ja³owy umieœciæ jeden pasek BBL Taxo z czynnikiem X w ka dej probówce MGIT wymagaj¹cej dodatku heminy (zobacz czêœæ Dostêpnoœæ ). Probówki te musz¹ byæ odczytywane rêcznie (patrz Podrêcznik U ytkownika BACTEC MGIT 960). 7. Probówki, w których uzyskano wynik dodatni za pomoc¹ urz¹dzenia BACTEC MGIT 960, nale y przesiaæ i przygotowaæ do barwienia na kwasoopornoœæ (zobacz czêœæ Wyniki ). Wszystkie badania kontroli jakoœci, ponowne przygotowania próbek, przygotowania rozmazów, przesiania itd., z probówek, w których wynik jest przypuszczalnie dodatni, musz¹ byæ wykonywane za pomoc¹ metod i sprzêtu przeznaczonego do laboratoriów III poziomu bezpieczeñstwa. Postêpowanie z probówk¹ MGIT, w której uzyskano wynik dodatni: UWAGA Wszystkie czynnoœci powinny byæ wykonywane w komorze zapewniaj¹cej bezpieczeñstwo biologiczne. 1. Wyj¹æ probówkê MGIT z urz¹dzenia i przenieœæ do obszaru bezpiecznego, stosuj¹c metody i materia³y zgodne z BSL III. 2 Za pomoc¹ sterylnej pipety transferowej pobraæ próbkê z dna probówki (oko³o 0,1 ml) w celu poddania jej barwieniu (barwienie na kwasoopornoœæ i barwienie metod¹ Grama). 3. Zbadaæ rozmaz i barwienie. Po dokonaniu oceny barwienia na kwasoopornoœæ zg³osiæ wstêpne wyniki. Po zakoñczeniu szeœciu tygodni inkubacji dokonaæ wzrokowej kontroli wszystkich probówek, w których uzyskano wynik ujemny za pomoc¹ urz¹dzenia. Je eli probówka wydaje siê dodatnia w ocenie wzrokowej (tzn. wystêpuje w niej niejednorodne zmêtnienie, ma³e ziarenka lub zgrupowania) powinna zostaæ przesiana, powinno byæ wykonane barwienie na kwasoopornoœæ i nale y traktowaæ j¹ jako przypuszczalnie dodatni¹, je eli wynik barwienia na kwasoopornoœæ jest dodatni. Je eli probówka nie wykazuje cech dodatnich, nale y j¹ przed wyrzuceniem poddaæ sterylizacji.positive. Postêpowanie z zanieczyszczonymi probówkami MGIT: Zanieczyszczone probówki MGIT mo na poddaæ ponownemu odka aniu i zagêszczaniu przy zastosowaniu procedury przedstawionej w Dodatku E Dodatkowe Procedury w Podrêczniku U ytkownika BACTEC MGIT 960. Kontrola jakoœci przez u ytkownika: Po otrzymaniu nowej dostawy lub nowego numeru serii probówek MGIT zaleca siê przygotowanie zawiesin kontrolnych drobnoustrojów ATCC przedstawionych w Tabeli 1 w bulionie Middlebrook 7H9. 1. Przygotowaæ zawiesinê z hodowli na pod³o u sta³ym, nie starszych ni 15 dni, w po ywce bulionowej Middlebrook 7H9. 2. Odstawiæ zawiesinê na 20 min. 3. Przelaæ nads¹cz do pustej, sterylnej probówki i odstawiæ na kolejne 15 min. 2

3 4. Zlaæ nads¹cz do innej, sterylnej probówki. 5. Dostosowaæ stopieñ zmêtnienia zawiesiny do standardu McFarland nr 0,5. 6. Rozcieñczyæ zawiesinê drobnoustrojów kontrolnych, postêpuj¹c zgodnie ze schematem rozcieñczania, przedstawionym w Tabeli Wykonaæ inokulacjê probówek MGIT wed³ug procedury Inokulacja probówek MGIT. Jeœli w probówkach z kontrol¹ jakoœci MGIT nie uzyskano oczekiwanych wyników, nale y zrezygnowaæ z u ywania pozosta³ych probówek; skontaktowaæ siê z lokalnym przedstawicielem firmy BD. Tabela 1 Rozcieñczanie Dni do uzyskania Gatunki Numer ATCC zawiesiny 0,5 McFarland wyniku dodatniego w roztworze soli fizjologicznej w urz¹dzeniu M. tuberculosis : M. kansasii : M. fortuitum : Nale y postêpowaæ zgodnie z obowi¹zuj¹cymi wymogami kontroli jakoœci, wynikaj¹cymi z przepisów miejscowych, krajowych i (lub) federalnych, wymogami akredytacji i rutynowymi procedurami kontroli jakoœci w danym laboratorium. U ytkownikowi zaleca siê zapoznanie z odpowiednimi procedurami kontroli jakoœci, zawartymi w zaleceniach NCCLS i przepisach CLIA. WYNIKI Wynik dodatni próbki okreœlany jest przez system BACTEC MGIT 960 i potwierdzany przez barwienie na kwasoopornoœæ. PODAWANIE WYNIKÓW Probówki odczytane jako dodatnie przez urz¹dzenie musz¹ zostaæ potwierdzone poprzez barwienie na kwasoopornoœæ. Dodatni wynik barwienia na kwasoopornoœæ wskazuje na obecnoœæ pr¹tków. Je eli barwienie na kwasoodpornoœæ jest dodatnie, przesiaæ na pod³o e sta³e i podaæ wynik jako: Wynik dodatni, barwienie na kwasoopornoœæ dodatnie, identyfikacja w trakcie. Je eli wystêpuj¹ drobnoustroje inne ni kwasooporne, podaæ wynik jako: Wynik dodatni, barwienie na kwasoopornoœæ ujemne. Próbka zanieczyszczona. Je eli nie wystêpuj¹ adne drobnoustroje: Ponownie wprowadziæ probówkê do urz¹dzenia jako probówkê w dalszym ci¹gu ujemn¹, w ci¹gu 5 h od jej wyjêcia. Odczekaæ do zakoñczenia protoko³u. Nie mo na podaæ wyniku. Wykonaæ przesianie bakterii z probówki BBL MGIT w celu identyfikacji oraz oceny wra liwoœci na leki. OGRANICZENIA PROCEDURY Izolacja pr¹tków w probówce MGIT zale y od iloœci obecnych w próbce drobnoustrojów, metod pobierania próbki, czynników dotycz¹cych pacjenta, takich jak wystêpowanie objawów, wczeœniejszego leczenia i sposobu przygotowania. Zaleca siê odka anie przy zastosowaniu metody z wykorzystaniem N-acetylo-L-cysteinowego wodorotlenku sodowego (NALC-NaOH). Inne metody odka ania nie zosta³y przetestowane w powi¹zaniu z pod³o em BBL MGIT. Roztwory trawi¹co-odka aj¹ce mog¹ mieæ szkodliwy wp³yw na pr¹tki. Morfologia oraz pigmentacja kolonii mo e byæ okreœlona wy³¹cznie na pod³o ach sta³ych. Pr¹tki mog¹ ró niæ siê pod wzglêdem kwasoopornoœci w zale noœci od szczepu, wieku hodowli i innych zmiennych. Zgodnoœæ morfologii mikroskopowej na pod³o u BBL MGIT nie zosta³a jak dot¹d ustalona. W celu identyfikacji oraz przeprowadzenia testów wra liwoœci szczepu nale y dokonaæ przesiania zawartoœci probówki MGIT, w której uzyskano dodatni wynik przy barwieniu AFB, zarówno na pod³o e selektywne, jak i nieselektywne dla pr¹tków. Probówki MGIT, które uzyska³y w urz¹dzeniu wynik dodatni, mog¹ zawieraæ gatunki inne ni pr¹tki. Inne gatunki mog¹ przerastaæ wystêpuj¹ce pr¹tki. Takie probówki MGIT powinny zostaæ ponownie odka one i przesiane (patrz Podrêcznik U ytkownika BACTEC MGIT 960). Zaleca siê ponowne obrobienie próbki, zw³aszcza je eli oryginalna próbka nie mo e byæ ³atwo pobrana ponownie, np. próbka tkankowa. Probówki MGIT, które uzyska³y w urz¹dzeniu wynik dodatni, mog¹ zawieraæ jeden lub wiêcej gatunków pr¹tków. Gatunki pr¹tków szybciej rosn¹ce mog¹ zostaæ wykryte wczeœniej ni wolniej rosn¹ce pr¹tki, dlatego te w celu prawid³owej identyfikacji wszystkich obecnych w próbce gatunków pr¹tków jest wa ne, aby dokonaæ przesiania probówek MGIT, w których uzyskano wynik dodatni. Ze wzglêdu na bogactwo po ywki bulionowej MGIT oraz nieselektywny charakter wskaÿnika MGIT jest wa ne, aby postêpowaæ zgodnie z procedur¹ rozcieñczania/dekontaminacji w celu zmniejszenia prawdopodobieñstwa zanieczyszczenia. Postêpowanie wed³ug instrukcji procedury, równie stosowanie zalecanej objêtoœci inokulum (0,5 ml), jest istotne dla optymalnej izolacji pr¹tków. Stosowanie mieszaniny antybiotykowej PANTA, mimo i jest konieczne dla próbek niesterylnych, mo e mieæ hamuj¹cy wp³yw na rozwój niektórych pr¹tków. Przeprowadzono badania hodowli dwudziestu czterech gatunków pr¹tków (szczepów ATCC oraz szczepów dzikich), u ywaj¹c inokulum w zakresie od 10 1 do 10 2 CFU/mL. Za pomoc¹ systemu BACTEC MGIT 960 wykryto nastêpuj¹ce gatunki jako wynik dodatni: M. avium* M. gordonae* M. nonchromogenicum M. terrae M. abscessus M. haemophilum M. phlei M. trivale M. bovis M. intracellulare M. simiae* M. tuberculosis* M. celatum M. kansasii* M. scrofulaceum M. xenopi* M. fortuitum* M. malmoense M. smegmatis M. gastri M. marinum M. szulgai* *Gatunki wyizolowane podczas klinicznej oceny systemu BACTEC MGIT 960. Ponadto w jednym osrodku klinicznym wyizolowano M. mucogenicum. M. haemophilum wyizolowano, stosuj¹c dodatek heminy do probówki MGIT przed inokulacj¹. W badaniach klinicznych wyizolowano pr¹tki z próbek pobranych z uk³adu oddechowego, treœci o³¹dkowej, tkanek, stolca i ja³owych p³ynów ustrojowych, z wyj¹tkiem krwi; nie dokonano izolacji pr¹tków z innych p³ynów ustrojowych za pomoc¹ tego produktu. OCZEKIWANE WARTOŒCI 3

4 Rysunek 1 Rozk³ad czasu izolacji próbnych klinicznych próbek ocenionych jako dodatnie w systemie BACTEC MGIT 960 CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŒCIOWA System BACTEC MGIT 960 poddano ocenie w szeœciu oœrodkach klinicznych, oddalonych od siebie pod wzglêdem po³o enia geograficznego, w tym w jednym poza USA, które obejmowa³y laboratoria publicznej s³u by zdrowia, jak równie du e szpitale z oddzia³ami ostrego dy uru. Przebadana populacja pacjentów, obejmowa³a chorych z HIV, chorych z upoœledzonym uk³adem odpornoœciowym oraz biorców przeszczepów. System BACTEC MGIT 960 porównywano z systemem radiometrycznym BACTEC 460TB oraz z konwencjonalnymi pod³o ami sta³ymi, s³u ¹cymi do wykrywania i izolacji pr¹tków z próbek klinicznych, z wyj¹tkiem krwi. Badaniom poddano ³¹cznie próbek. W 353 próbkach uzyskano wynik dodatni, co odpowiada³o 362 szczepom wyizolowanym podczas badania. Rozk³ad wyników dodatnich w zale noœci od rodzaju próbki jest nastêpuj¹cy: uk³ad oddechowy (90%), tkanka (7%), p³yny ustrojowe (1%), stolec (0,85%) i szpik kostny (0,65%). Z tych 362 szczepów 289 (80%) otrzymano w probówkach systemie BACTEC MGIT 960, 271 (75%) w systemie BACTEC 460TB oraz 250 (69%) na konwencjonalnych pod³o ach sta³ych. Spoœród próbek krwi przebadanych w badaniu klinicznym, w 27 (0,8%) probówkach MGIT 960 uzyskano wynik fa³szywie dodatni (odczyt z aparatu dodatni, rozmaz i (lub) hodowla dodatkowa ujemne). Spoœród 313 probówek MGIT 960, w których uzyskano wynik dodatni w urz¹dzeniu, 27 (8,6%) okreœlono jako fa³szywie dodatnie. Odsetek wyników fa³szywie ujemnych (ujemny odczyt z aparatu, rozmaz i (lub) hodowla dodatkowa dodatnie) wynosi³ 0,5%, na podstawie koñcowych hodowli z 15% fiolek z wynikiem ujemnym w urz¹dzeniu. Œredni odsetek zanieczyszczeñ dla systemu BACTEC MGIT 960 wynosi³ 8,1%, przy zakresie 1,8 14,6%. Tabela 2: Wykrywanie szczepów pr¹tków w badaniach klinicznych Szczepy Razem Razem MGIT Ca³kowita liczba BACTEC Razem Pod³o a Pod³o a konwencjonalne Szczepy MGIT 960 tylko w BACTEC 460TB 460TB tylko konwencjonalne tylko MTB MAC M. asiaticum M. fortuitum/chelonae M. genavense M. kansasii M. malmoense M. marinum M. mucogenicum M. simiae M. szulgai M. xenopi MOTT Mycobacteria spp M. gordonae M. nonchromogenicum Wszystkie pr¹tki DOSTÊPNOŒÆ Nr kat. Opis Probówki wskaÿnikowe wzrostu pr¹tków BBL MGIT, 7 ml, opakowanie 100 sztuk Zestaw dodatków BACTEC MGIT 960, 6 fiolek, 15 ml, dodatek wzrostowy BACTEC MGIT i 6 fiolek liofilizowana mieszanka antybiotykowa BBL MGIT PANTA Ka dy fiolka z dodatkiem wzrostowym/panta wystarcza na probówek MGIT Pod³o e BBL Lowenstein-Jensen Medium Slants, opakowanie 10 sztuk (20 x 148 mm probówki z nakrêtk¹) Pod³o e BBL Lowenstein-Jensen Medium Slants, opakowanie 100 sztuk (20 x 148 mm probówki z nakrêtk¹) Zestaw trawi¹co/odka aj¹cy próbki BBL MycoPrep, dziesiêæ butelek po 75 ml zawieraj¹cych roztwór NALC-NaOH i 5 opakowañ buforu fosforanowego. Nr kat. Opis Zestaw trawi¹co/odka aj¹cy próbki BBL MycoPrep, dziesiêæ butelek po 150 ml zawieraj¹cych roztwór NALC-NaOH i 10 opakowañ buforu fosforanowego Pod³o e BBL Middlebrook and Cohn 7H10 Agar, opakowanie 20 sztuk BBL Middlebrook 7H9 bulion, 8 ml, opakowanie 10 probówek BBL sól fizjologiczna, 5 ml, opakowanie 10 sztuk BBL sól fizjologiczna, 5 ml, opakowanie 100 sztuk Paski BBL Taxo X Factor, 1 fiolka, 50 pasków. 4

5 PIŒMIENNICTWO 1. Bloom, B.R., and C.J.L. Murray Tuberculosis: commentary on a reemergent killer. Science 257: Horsburg, C.R., Jr., Mycobacterium avium complex infection in the acquired immunodefieciency syndrome. N. Engl. J..Med. 324: Tenover, F.C., et al, The resurgence of tuberculosis: is your laboratory ready? J. Clin. Microbiol. 31: Kent, P.T., and G.P. Kubica Public health mycobacteriology: a guide for the level III laboratory. USDHHS, Centers for Disease Control, Atlanta. 5. Cohn, M.L., R.F. Waggoner and J.K. McClatchy The 7H11 medium for the cultivation of mycobacteria. Am. Rev. Respir. Dis. 98: Youmans, G.P Cultivation of mycobacteria, the morphology and metabolism of mycobacteria, p Tuberculosis. W.B. Saunders Co., Philadelphia. 7. National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 8. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 10. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Offical Journal L262, 17/10/2000, p Isenberg, Henry D. (ed.) Clinical microbiology procedures handbook. vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5

6 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, BBL, Falcon, MGIT, MycoPrep, PANTA and Taxo are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD