III. Fizjologia bakterii i zasady diagnostyki bakteriologicznej

Transkrypt

1 III. Fizjologia bakterii i zasady diagnostyki bakteriologicznej Ćwiczenie 1. Rodzaje pożywek i ich zastosowanie a. Podłoże stałe - proste Agar zwykły (AZ) b. Podłoża wzbogacone Agar z dodatkiem 5% odwłóknionej krwi baraniej (AK) typ hemolizy wygląd kolonii.. Bulion cukrowy (BC) Typy wzrostu..

2 c. Podłoża wybiórczo-namnażające bulion z żółcią i zielenią brylantową. podłoże SF wg Leifsona d. Podłoża wybiórczo-różnicujące podłoże Chapmana (Ch) podłoże Mac Conkey a (MC)

3 e. Podłoża specjalne podłoże Tarrozziego-Wrzoska podłoże Löwensteina-Jensena podłoże Sabourauda

4 f. Podłoża transportowe bakteriologiczny zestaw transportowy nr Ćwiczenie 2. Badanie właściwości biochemicznych drobnoustrojów a. wykonanie próby na katalazę Zasada metody: Próbę wykonuje się przez umieszczenie badanych bakterii, pobranych z hodowli na pożywce stałej, w kropli 3% wody utlenionej na szkiełku podstawowym. Uwalnianie pęcherzyków tlenu świadczy o wyniku dodatnim - zdolności produkcji katalazy Wykonanie: 1. Przygotować szkiełko podstawowe 2. Nanieść na szkiełko1 kropę 3% wody utlenionej 3. Wyjałowić i ostudzić ezę z oczkiem, pobrać 1 kolonię za pomocą jałowej ezy i umieścić w 3% wodzie utlenionej 4. Opisać zaobserwowane zmiany Szczep badany Staphylococcus epidermidis Streptococcus viridans obserwowane wyniki Wnioski... b. wykonanie próby na oksydazę Zasada metody: Pasek impregnuje się odczynnikiem na oksydazę (tetrametyl-pfenylodiamina) i kwasem askorbinowym. Bakterie wytwarzające oksydazę, w obecności tlenu atmosferycznego i cytochromu c utleniają fenylodiaminę do indofenolu. Wykonanie: 1. Dwa paski bibuły filtracyjnej położyć na szkiełka podstawowe i nasączyć paroma kroplami odczynnika do wykrywania oksydazy.

5 2. Jałową ezą pobrać 1 kolonię szczepu Pseudomonas aeruginosa i rozprowadzić na pasku, następnie wyjałowić ezę i na drugi pasek pobrać szczep Escherichia coli. Zaobserwować zmianę zabarwienia w czasie 0,5-2 minut Szczep badany Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli obserwowane wyniki Wnioski... c. ocena zdolności biochemicznych bakterii na podłożach stałych i płynnych podłoże Kliglera - badanie zdolności bakterii do rozkładu cukrów (glukoza, laktoza gazowo lub bezgazowo) oraz zdolności redukcji tiosiarczanu do siarkowodoru. Podłoże czyste Obserwowane zmiany Wnioski... woda peptonowa z 10% laktozą pod parafiną - badanie zdolności bakterii do rozkładu laktozy w warunkach beztlenowych Podłoże czyste Obserwowane zmiany Wnioski... woda peptonowa z tryptofanem - badanie zdolności bakterii do rozkładu tryptofanu do indolu przed odczytem na powierzchnię podłoża nawarstwić 1-2 krople odczynnika Ehrlicha lub Kovacha Podłoże czyste Obserwowane zmiany Wnioski...

6 woda peptonowa z mannitolem i rurką Durhama - badanie zdolności bakterii do gazowego rozkładu mannitolu Podłoże czyste Obserwowane zmiany Wnioski... podłoże Christensena - badanie zdolności bakterii do wytwarzania ureazy i rozkładu mocznika Podłoże czyste Obserwowane zmiany Wnioski... d. wykorzystanie komercyjnych testów API do oceny zdolności biochemicznych bakterii Zasada metody: Sprawdzanie właściwości biochemicznych drobnoustrojów jest jednym z etapów diagnostyki mikrobiologicznej. W badaniach tych wykorzystuje się najczęściej reakcje kataboliczne, tj. zdolność do rozkładu substratów za pomocą enzymów komórkowych. Produkty tych reakcji wykrywa się za pomocą wskaźników, odczynników lub specjalnych testów. Paski API 20 E składają się z 20 mikroprobówek zawierających odwodnione substraty. Integralną częścią testu API 20 E jest też test na oksydazę. Substraty zostają uwodnione poprzez dodanie zawiesiny bakterii. Uwodnione substraty stanowią również podłoża do hodowli bakterii. Procesy metaboliczne zachodzące podczas inkubacji powodują zmiany koloru, które są albo spontaniczne, albo wywołane przez dodanie odczynników. Odczyt testu: Dodać do mikroprobówek TDA, VP, IND odpowiednie odczynniki wg schematu: 1. test TDA: dodać 1 kroplę odczynnika TDA (chlorek żelaza). Czerwono-brązowy kolor wskazuje na reakcję pozytywną 2. test VP: dodać po 1 kropli z każdego odczynnika VP1 (α-naftol) i VP2 (KOH). Odczekać przynajmniej 10 min; różowy lub czerwony kolor wskazuje na reakcję pozytywną; jeśli po 10 min pojawi się blado różowy kolor, reakcję należy uznać za negatywną 3. test IND: dodać 1 kroplę odczynnika JAMES; różowy kolor powstający w całej probówce wskazuje na reakcję pozytywną

7 Odczytać pozostałe testy wg załączonej instrukcji a wyniki wpisać do tabeli: TEST wynik Określana cecha ONPG ADH LDC ODC CIT H 2 S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX Wnioski: Ćwiczenie 3. Wykonanie posiewu redukcyjnego i murawkowego 1. Przygotować stanowisko pracy, pobrać 1 szalkę z podłożem agarowym. 2. Podzielić szalkę na połowę wg rysunku. 3. Jałową ezą pobrać zawiesinę hodowli bakteryjnej na podłożu płynnym i wykonać posiew murawkowy na ½ podłoża. Opalić ezę 4. Następnie pobrać aseptycznie zawiesinę hodowli bakteryjnej i wykonać posiew redukcyjny na drugiej połowi podłoża agarowego. 5. Całość inkubować godziny w 37 0 C.

8 6. Narysować i opisać sposób wykonania posiewu redukcyjnego i murawkowego posiew murawkowy posiew redukcyjny posiew murawkowy.. posiew redukcyjny..... Ćwiczenie 4. Wykonywanie posiewów na podłoże płynne, płynne pod parafiną, podłoże w formie skosu. 1. Przygotować 3 probówki zawierające podłoże płynne (BC), podłoże płynne z 10% laktozą pod parafiną i podłoże w formie skosu (podłoże Kliglera). 2. Za pomocą jałowej ezy z oczkiem zachowując warunki aseptyczne dokonać posiewu hodowli szczepu E.coli na podłoże płynne i płynne pod parafiną. 3. Za pomocą ezy igłowej zachowując warunki aseptyczne dokonać posiewu hodowli szczepu E.coli na podłoże w formie skosu. 4. Probówki inkubować godziny w temperaturze 37 0 C.

9 5. Opisać sposób wykonania posiewów Ćwiczenie 5. Narysować schemat toku badania bakteriologicznego

10 Ćwiczenie 6. Opisać zastosowanie i zasady pobierania materiału przy pomocy przedstawionego sprzętu