1. Demonstracja preparatów bakteryjnych barwionych metodą negatywną ukazujących kształty komórek bakteryjnych.

Transkrypt

1 Ćwiczenie 1. Mikrobiologia ogólna - Budowa komórki bakteryjnej. Metody barwienia preparatów bakteryjnych. Wzrost drobnoustrojów w warunkach laboratoryjnych. Uzyskiwanie czystej hodowli. Identyfikowanie bakterii na podstawie ich cech biochemicznych. 1. Demonstracja preparatów bakteryjnych barwionych metodą negatywną ukazujących kształty komórek bakteryjnych. a/ Komórki cylindryczne. b/ Komórki kuliste. 2. Demonstracja preparatu bakteryjnego ukazującego obecność otoczki (preparat barwiony metodą pozytywno-negatywną). 3. Demonstracja preparatu bakteryjnego ukazującego obecność przetrwalników (preparat barwiony zielenią malachitową). 4. Demonstracja preparatu bakteryjnego ukazującego rzęski. 5. Barwienie preparatów bakteryjnych metodą Grama. a/ Omówienie i demonstracja barwienia preparatu bakteryjnego metodą Grama. b/ Omówienie i demonstracja pracy z mikroskopem świetlnym przy oglądaniu preparatów bakteryjnych. 6. Demonstracja wzrostu dwóch rodzajów bakterii na agarze ukazującą wynik posiewu redukcyjnego (uzyskiwanie pojedynczych kolonii). 7. Identyfikowanie bakterii na podstawie ich cech biochemicznych. a/ Demonstracja testów biochemicznych wykorzystywanych do identyfikowania bakterii (test API). b/ Określanie właściwości hemolitycznych bakterii hemoliza typu alfa, beta i gamma. 1. Przerysowanie preparatów demonstracyjnych (jeden preparat barwiony metodą negatywną, preparat ukazujący otoczki, preparat ukazujący przetrwalniki i preparat ukazujący rzęski).

2 Ćwiczenie 2. Mikrobiologia ogólna Występowanie bakterii w środowisku człowieka i w jego organizmie. Wpływ czynników fizycznych i chemicznych na bakterie. 1. Bakterie w środowisku i w organizmie człowieka. a/ Występowanie bakterii w powietrzu badanie metodą sedymentacji na agarze z krwią przez 30 minut. b/ Występowanie bakterii na powierzchni stołu badanie przy użyciu płytki kontaktowej (agar z krwią). c/ Występowanie bakterii na odzieży badanie metodą odciskową na agarze z krwią powierzchni fartucha. d/ Występowanie bakterii na powierzchni skóry odciśnięcie opuszki palca na agarze z krwią przed umyciem rąk, po ich normalnym umyciu oraz po przetarciu preparatem odkażającym. 2. Wpływ czynników fizycznych i chemicznych na bakterie. a/ Wpływ temperatury posiew hodowli płynnej gronkowca złocistego i laseczki siennej na pożywkę agarową przed i po 10 minutach gotowania. b/ Wpływ promieniowania UV naświetlanie przez 10 minut częściowo osłoniętej papierem hodowli pałeczki okrężnicy na płytce agarowej. c/ Wpływ preparatu odkażającego posiew na płytkę agarową hodowli pałeczki okrężnicy na pożywce płynnej przed i po 10 minutach działania na nią 5% roztworu fenolu. 1. Przerysowanie preparatu barwionego metodą Grama z odcisku na szkiełku podstawowym języka (preparat zabarwia asystent).

3 Ćwiczenie 3. Antybiotyki i chemioterapeutyki. Oznaczanie liczebności różnych grup bakterii w jamie ustnej. 1. Demonstracja wykonania antybiogramu metodą krążkowo-dyfuzyjną. 2. Demonstracja antybiogramu wykonanego metodą krążkowo-dyfuzyjną. 3. Posiew 0,1 ml różnych rozcieńczeń śliny na pożywki wybiórcze w celu oznaczenia liczebności w ślinie paciorkowców (agar z krwią i azydkiem), pałeczek kwasu mlekowego (agar Rogosy) oraz bakterii wytwarzających zewnątrzkomórkowe wielocukry (agar z sacharozą). 1. Odczytanie i opisanie wyników doświadczeń wykonanych na poprzednim ćwiczeniu. 2. Ocena mikrobiologicznej czystości powietrza: x = liczba bakterii w 1 m 3 powietrza = a x p x t x 0,2 a = liczba kolonii na płytce (średnia arytmetyczna z co najmniej 5 płytek) p = powierzchnia płytki (πr 2, π = 3,14) t = czas ekspozycji (30) 0,2 = stała Klasa czystości wg normy MZiOS: I do 70 komórek/m 3 II do 300 komórek/m 3 III do 700 komórek/m 3 3. Przerysowanie preparatu ze śliny (preparat zabarwia asystent).

4 Ćwiczenie 4. Mikrobiologia jamy ustnej. Bakteriologia próchnicy zębów i chorób przyzębia. 1. Oznaczenie ph śliny. 2. Uwidocznienie płytki nazębnej. 3. Demonstracja bakterii będących czynnikiem etiologicznym próchnicy zębów barwionych metodą Grama. a/ Streptococcus sp. b/ Lactobacillus sp. c/ Actinomyces sp. 1. Odczytanie wyników posiewów wykonanych na poprzednim ćwiczeniu i ustalenie liczebności bakterii w 1 ml śliny wg wzoru: X = liczba kolonii na płytce x odwrotność rozcieńczenia x Przerysowanie preparatów demonstracyjnych.

5 Ćwiczenie 5. Mikrobiologia jamy ustnej. Bakteriologia próchnicy zębów i chorób przyzębia. 1. Demonstracja preparatów niektórych bakterii będących czynnikiem etiologicznym stanów zapalnych dziąseł i przyzębia: a/ Prevotella sp. b/ Porphyromonas sp. c/ Fusobacterium sp. i Treponema vincentii (martwiczo-wrzodziejące zapalenie dziąseł). 1. Przerysowanie preparatów demonstracyjnych. 2. Po uwidocznieniu płytki nazębnej zdjąć ją z powierzchni zęba, zawiesić w kropli wody, zabarwić metodą Grama (wykonuje asystent) i przerysować.