Wellcogen TM Bacterial Antigen Kit - Zestaw Wellcogen TM do wykrywania antygenów bakteryjnych

Transkrypt

1 Doć woę Wellogen TM Bteril Antigen Kit - Zestw Wellogen TM o wykrywni ntygenów kteryjnyh PL ZL26/R Testów 1 PRZEZNACZENIE Zestw Wellogen TM Bteril Antigen Kit zwier szereg szykih testów lteksowyh służąyh o jkośiowego wykrywni ntygenów Streptoous z grupy B, Hemophilus influenze typu, Streptoous pneumonie (pneumoous), Neisseri meningitiis (meningoous) z grup A, B, C, Y lu W135 orz Esherihi oli K1 występująyh w płynie mózgowo-rzeniowym (CSF) w wyniku infekji. Zestw możn również wykorzystywć o ni innyh płynów ustrojowyh lu superntntów z posiewów krwi l większośi z tyh ntygenów orz posiewów płytkowyh l N. meningitiis z grupy B lu Esherihi oli K1. (wskzni poprte nymi kliniznymi zestwiono w Teli 1). 2 OMÓWIENIE Zplenie opon mózgowyh może yć powoowne przez wiele różnyh zynników, zrówno zkźnyh jk i niezkźnyh. W przypku rku szykiego i skuteznego lezeni kteryjnego zpleni opon mózgowo-rzeniowyh, horo t może yć śmierteln. Wzesn ientyfikj zynnik zkźnego może mieć uże znzenie l zstosowni prwiłowej i ekwtnej hemioterpii u pjent. Zplenie opon mózgowo-rzeniowyh może yć powoowne przez wiele gtunków kterii. Streptoous z grupy B orz E. oli K1 stnowią wie njpowszehniejsze przyzyny posozniy u noworoków, ntomist w strszyh gruph wiekowyh njpowszehniejszymi izoltmi są H. influenze typu, S. pneumonie i N. meningitiis z grup A, B, C, Y orz W135. Orgnizmy te posiją speyfizne polishryowe ntygeny powierzhniowe, któryh pewn ilość yfunuje o pożywki hoowlnej lu o płynów ustrojowyh, tkih jk płyn mózgoworzeniowy lu surowi i jest wyln z mozem. Antygeny te możn wykrywć przy użyiu zułyh meto immunologiznyh, tkih jk immunelektroforez przeiwieżn orz glutynj lteksow 2,5,6,10. 3 ZASADA DZIAłANIA TESTU Ozynniki Wellogen TM zwierją ząstezki lteksu polistyrenowego, które zostły opłszzone przeiwiłmi przeiwko ntygenom kteryjnym. W oenośi wystrzjąej ilośi ntygenu homologiznego, ząstezki lteksu ulegją glutynji. Ozynniki Streptoous orz H. influenze są speyfizne opowienio l grupy B i typu, ozynnik S. pneumonie jest uwrżliwiony przeiwiłmi ozyszzonymi z omniwlentnej surowiy, poliwlentny ozynnik N. meningitiis reguje z grupmi A, C, Y i ntygenmi W135. Antygen Meningoous z grupy B jest truniejszy o wykryi 6, jk również jest strukturlnie i immunologiznie spokrewniony z ntygenem E. oli K1 7 ; oyw one regują z ozynnikiem N. meningitiis grupy B. 4 DEFINICJE SYMBOLI Numer ktlogowy Wyró meyzny o ignostyki in vitro Zwrtość wystrz o wykonni <n> testów Zpoznć się z instrukją użyi (IFU) Ogrnizeni otyząe tempertury (tempertur przehowywni) Ko prtii (numer serii) Dt przytnośi o użyi (termin wżnośi) Prouent 5 ZAWARTOŚĆ, PRZYGOTOWANIE DO UŻYCIA I PRZECHOWYWANIE ZESTAWU Zestw Wellogen TM Bteril Antigen Kit zwier ozynniki wystrzjąe o wykonni 30 testów. Ptrz również Śroki ostrożnośi, rozził 6. Wszystkie skłniki nleży przehowywć w temp. 2 o 8 C. Jest to wrunek zhowni ih ktywnośi o koń terminu wżnośi zestwu. Prze użyiem nleży oprowzić wszystkie ozynniki o tempertury pokojowej (18-30 C) i wymieszć je. Po użyiu, niewykorzystne ozynniki nleży umieśić z powrotem w hłozire. Instrukj użyi Jenorzowe krtoniki rekyjne (2 opkowni) Jenorzowe ptyzki o mieszni (5 wiązek) Jenorzowe zkrplze (1 pojemnik) Czrny smozek gumowy (1) Lteksy testowe Strep B (różow zkrętk) H. influenze (jsnonieiesk zkrętk) S. pneumonie (żółt zkrętk) N. meningitiis ACY W135 (szr zkrętk) N. meningitiis B/E. oli K1 (rązow zkrętk) Pięć utelezek z zkrplzem, po jenej spejlnie l kżej z powyższyh grup, zwierjąyh 0.5% zwiesiny ząstezek lteksu polistyrenowego w uforze zwierjąym 0.05% preprtu Broniox i/ lu 0.1% zyku sou jko konserwnt. Cząstezki lteksu opłszzone są opowienim przeiwiłem królizym ponym n etykieie, z wyjątkiem ozynnik N. meningitiis grupy B/E. oli K1, który jest opłszzony mysim przeiwiłem monoklonlnym. Lteksy kontrolne 5 utelezek z zkrplzem (iemnonieiesk zkretk), zwierjąyh 0.5% zwiesiny ząstezek lteksu polistyrenowego w uforze zwierjąym 0.05% preprtu Broniox i/lu 0.1% zyku sou jko konserwnt. Cząstezki lteksu opłszzone są opowienim preprtem glouliny królizej, w przypku lteksu N. meningitiis grupy B/E. oli K1, mysim przeiwiłem monoklonlnym wyhoownym przeiwko Boretell ronhisepti. Zwiesiny lteksowe są ostrzne gotowe o użyi i nleży je przehowywć w temp. 2 o 8 C w pozyji pionowej, o terminu wżnośi zestwu. Po łuższym okresie przehowywni w górnej zęśi utelezki może wystąpić ngromzenie lu wysuszenie lteksu. W tkiej sytuji nleży energiznie wstrząsć utelezką przez kilk sekun, ż o łkowitego ponownego wytworzeni zwiesiny. NIE ZAMRAŻAĆ. Poliwlentn kontrol otni Dwie utelezki (zerwon zkrętk) zwierjąe liofilizowne ekstrkty kteryjne zwierjąe ntygeny z reprezenttywnyh szzepów kżego gtunku kterii, l którego ostrzono lteks. Zwier 0.01% ronopolu prze przygotowniem orz 0.004% po przygotowniu o użyi. 1

2 6 ŚRODKI OSTROŻNOŚCI Rozpuśić używją 3.6 ml sterylnej woy estylownej. Po oniu woy utelezkę nleży ostwić n kilk minut, nstępnie wymieszć ruhem orotowym. Rozpuszzony ntygen możn przehowywć w temp. 2 o 8 C przez mksymlnie 6 miesięy. Kontrol ujemn Jen utelezk z zkrplzem (ił zkrętk) zwierją ufor gliynowy w roztworze soli fizjologiznej, ph 8.2, z 0.05% preprtu Broniox jko konserwnt. Ozynniki przeznzone są wyłąznie o użyi w ignostye in vitro. Wyłąznie o użytku profesjonlnego. Ostrzeżenie: Wyró zwier suhy kuzuk nturlny. Informje n temt skłników potenjlnie nieezpieznyh pono w Krie Chrkterystyki Sustnji (MSDS) i n etykieth prouktu. INFORMACJE DOTYCZĄCE ZDROWIA I BEZPIECZEŃSTWA 6.1 Lteksy testowe orz preprty kontrolne l Streptoous grupy B, H. influenze typu, S. pneumonie orz N. meningitiis ACY W135 zwierją 0.1% zyku sou, który jest sklsyfikowny przez opowienie yrektywy Europejskiej Wspólnoty Gosporzej (EEC) jko szkoliwy (Xn). Poniżej pono opowienie określeni otyząe ryzyk (zwroty R) i ezpiezeństw (zwroty S). Xn R22 Dził szkoliwie po połknięiu S36 Nosić opowienią ozież ohronną Azyki mogą whozić w rekję z miezią i ołowiem wykorzystywnymi w niektóryh instljh knlizyjnyh, tworzą sole wyuhowe. Ilośi użyte w omwinym zestwie są niewielkie, jenkże w trkie utylizji mteriłów zwierjąyh zyek, nleży je spłukiwć użą ilośią woy. 6.2 Zgonie z zsmi orej prktyki lortoryjnej (GLP), zeyownie zle się trktownie płynów ustrojowyh jko potenjlnie zkźne i ohozenie się z nimi z zhowniem wszelkih konieznyh śroków ostrożnośi. 6.3 Pozs ohozeni się z riometryzną pożywką o posiewu krwi nleży przestrzegć postwowyh zs ezpiezeństw riologiznego. Są to mięzy innymi nstępująe reguły: ) Mterił rioktywny nleży przehowywć w wyznzonym miejsu w ztwierzonym pojemniku. ) Ohozenie się z sustnjmi rioktywnymi winno oywć się w wyznzonym miejsu. ) Zrni się pipetowni mteriłów rioktywnyh ustmi. ) Zrni się jezeni, pii i pleni tytoniu w wyznzonym miejsu. e) Po użyiu mteriłów rioktywnyh nleży okłnie umyć ręe. f) W sprwh otyząyh usuwni mteriłów nleży skonsultowć się z miejsowym inspektorem s. ezpiezeństw riologiznego. 6.4 Przyrząy wielorzowego użytku nleży po użyiu sterylizowć z wykorzystniem opowieniej metoy. Preferown jest sterylizj w utoklwie przez 15 minut w temp. 121 C. Przyrząy jenorzowego użytku nleży sterylizowć w utoklwie lu splć. Rozlne płyny, ęąe potenjlnymi mteriłmi zkźnymi, nleży utylizowć niezwłoznie przy użyiu hłonnyh ręzników ppierowyh, zniezyszzone miejs nleży przetrzeć tmponem zwilżonym stnrowym ntykteryjnym preprtem ezynfekująym lu 70% lkoholem. NIE stosowć pohlorynu sou. Mteriły używne przy zyszzeniu rozlnyh płynów, włąznie z rękwimi, nleży utylizowć tk, jk iologizne opy nieezpiezne. 6.5 Nie pipetowć ustmi. Pozs ohozeni się z prókmi i wykonywni testu nleży nosić rękwie jenorzowe i śroki ohrony ozu. Po zkońzeniu pr nleży okłnie umyć ręe Używne zgonie z zsmi orej prktyki lortoryjnej, włśiwymi stnrmi higieny pry orz wytyznymi ponymi w niniejszej instrukji użyi, ostrzone ozynniki nie są uwżne z groźne l zrowi. ANALITYCZNE ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 6.7 Nie używć ozynników po upływie ponego terminu wżnośi. 6.8 Prze użyiem nleży oprowzić ozynniki lteksowe o tempertury pokojowej (18-30 C). Ozynniki lteksowe, nosząe oznki zryleni się ząstezek prze użyiem, mogły yć zmrożone i zrni się ih użyi. 6.9 Pozs używni utelezek z zkrplzem wżne jest, y trzymć je pionowo, kropl musi tworzyć się w końówe wylotowej zkrplz. Zmozenie wylotu zkrplz spowouje uformownie niewłśiwej ojętośi wokół jego koń, nie n smym końu. Jeśli o tego ojzie, prze wykonniem lszyh zynnośi nleży osuszyć wylot zkrplz Ozynniki ostrzone w kżym zestwie są o sieie opsowne po wzglęem ziłni i nie nleży ih używć wrz z ozynnikmi z zestwu o innym numerze serii Nie otykć pól rekyjnyh n krtonikh W tym teśie możn wykorzystywć rottory mehnizne. Poniższe hrkterystyki zostły uznne z zowljąe: i) Rottory płskie ziłjąe z prękośią 100 o 150 or./min. o śreniy owoowej 3.0 o 3.4 m. Prze ozytem, krtonik nleży zjąć z rottor i krótko kołysć. ii) Rottory oritlne (znne również jko rottory przestrzenne), ziłjąe z prękośią 25 or./min. z kątem orotu w przyliżeniu 9 o 10.5 stopni lu ziłjąe z prękośią 18 or./min z kątem orotu 16 o 17.5 stopni Unikć mikroiologiznyh zniezyszzeń ozynników, poniewż może to oprowzić o łęnyh wyników. 7 POBIERANIE I PRZECHOWYWANIE PRÓBEK 7.1 Próki płynów ustrojowyh (np. płyn mózgowo-rzeniowy, surowi, moz) nleży ć tk szyko po porniu, jk to tylko możliwe. Jeżeli płynu nie możn przeć ntyhmist, możn go przehowć o nstępnego ni w temperturze 2 o 8 C, ąź przez łuższe okresy zsu w posti zmrożonej w temp. 15 o 25 C. Jeżeli wymgne są nlizy kteriologizne próki, nleży je zplnowć prze wykonniem testu lteksowego, y nie opuśić o zniezyszzeni próki. 7.2 Próki posiewów krwi możn poierć i ć po 18 o 24 gozinh inkuji w temp. 37 C i/lu ntyhmist po zoserwowniu wzrostu kterii. 7.3 Posiewy płytkowe (tylko N. meningitiis B/E. oli K1). Wyizolowne kolonie rosnąe n wzogonej pożywe growej (np. pożywk krww, gr zekolowy) mogą yć ne n rugi zień po inkuji w temp. 37 C. Nleży wykonć rwienie rwnikiem Grm, y ułtwić interpretję wyników testu lteksowego. 8 SPOSÓB WYKONANIA TESTU WYMAGANE MATERIAłY DOSTARCZONE Ptrz Zwrtość zestwu, rozził 5. MATERIAłY WYMAGANE, LECZ NIE DOSTARCZONE Wrzą łźni won Wirówk lortoryjn lu filtry memrnowe (0.45 µm) Rottor (opjonlnie ptrz: Śroki ostrożnośi, rozził 6) PRZYGOTOWANIE PRÓBEK KLINICZNYCH 8.1 Próki płynów ustrojowyh muszą zostć ogrzne prze niem zgonie z proeurą Wellogen TM, y zminimlizowć rekje nieswoiste 4,6. Zle się stosownie nstępująyh proeur: ) W przypku płynu mózgowo-rzeniowego i mozu, prókę nleży ogrzewć przez 5 minut we wrząej łźni wonej. Prze wykonniem testu prókę nleży ohłozić o tempertury pokojowej (18 o 30 C) i wyklrowć poprzez wirownie lu filtrję memrnową (0.45 µm). W elu zpewnieni mksymlnej zułośi, próki mozu możn zgęśić mksymlnie 25-krotnie w zgęszzzu Minion B-15.

3 Prze wykonniem testów nleży okonć klrowni zgonie z powyższym opisem. ) W przypku surowiy nleży oć 3 ojętośi 0.1 M kwsu etylenoimiotetrotowego w posti soli wusoowej (EDTA), ph 7.4, n 1 ojętość surowiy, ogrzewć prókę przez 5 minut we wrząej łźni wonej, ohłozić o tempertury pokojowej (18 o 30 C) i wyklrowć zgonie z wześniejszym opisem. Dostępny jest opowieni roztwór EDTA (10 ml) (nr kt. ZL29/R ). 8.2 Posiewy krwi. Wirowć 1 o 2ml próki, y oprowzić o peletyzji krwinek zerwonyh - np. z przeiążeniem 1000 g przez 5 o 10 minut. Wykonć test lteksowy n superntnie. Jeżeli wystąpi nieswoist rekj l superntntu z posiewu krwi (ptrz: Interpretj wyników, rozził 10), nleży ogrzewć prókę we wrząej łźni wonej przez 5 minut, shłozić o tempertury pokojowej (18 to 30 C), wyklrowć przez wirownie i powtórzyć nie. 8.3 Posiewy płytkowe (tylko N. meningitiis B/E. oli K1). Test ezpośrenio z hoowli n płyte. PROCEDURA Prze wykonniem ni zle się uwżne przezytnie zęśi otyząej Śroków ostrożnośi, rozził 6. Próki płynów ustrojowyh i superntnty z posiewów krwi: UWAGA: Jeżeli ostępn jest tylko ogrnizon ojętość nej próki, nleży ją wykorzystć w pierwszej kolejnośi o wykonni ni z lteksmi testowymi. W przypku uzyskni wyniku otniego, prókę nleży przeć przy użyiu opowieniego lteksu kontrolnego. Jeżeli ojętość próki jest wystrzją, nleży jenoześnie wykonć test i kontrolę lteksową. Krok 1 Przygotowć prókę zgonie z poniższym opisem Przygotownie próek kliniznyh. Krok 2 Wstrząsnąć ozynniki lteksowe. Krok 3 Nnieść 1 kroplę kżego lteksu testowego 1 kropl lu lteksu kontrolnego n ozielne pole n krtoniku rekyjnym. Upewnić się, że utelezki z zkrplzem są trzymne pionowo, y omierzyć kroplę o okłnej ojętośi. (Ptrz Śroki ostrożnośi, rozził 6). Krok 4 Posługują się jenorzowym zkrplzem, 1 kropl omierzyć 1 kroplę (około 40 µl) nej próki ook kżej kropli lteksu. Krok 5 Zmieszć zwrtość kżego pol przy użyiu ptyzk o mieszni i rozprowzić n łej powierzhni pol. Do kżego pol nleży używć ozielnego ptyzk i ołożyć go elem ezpieznego usunięi po użyiu. Krok 6 Kołysć krtonikiem powoli i oserwowć, 3 minuty zy zhozi glutynj przez 3 minuty, trzymją krtonik w normlnej oległośi ozytu (25 o 35 m) o ozu. Nie używć szkł powiększjąego. Ornie mehnizne (3 minuty) może yć stosowne (ptrz Śroki ostrożnośi, rozził 6). Wzory, które uzyskuje się są wyrźne i możn je rozpoznć we wszystkih normlnyh wrunkh oświetleniowyh. Krok 7 Ołożyć wykorzystny krtonik rekyjny w elu ezpieznego usunięi. Posiewy n płytkh: (Tylko Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1): Krok 1 Wstrząsnąć ozynniki lteksowe. Krok 2 Dl kżej hoowli, l której m zostć 1 kropl wykonny test, omierzyć 1 kroplę lteksu testowego w jenym polu n krtoniku rekyjnym i 1 kroplę lteksu kontrolnego w ozielnym polu. UWAGA: niezęne jest użyie lteksu kontrolnego l poejrznyh hoowli E. oli. Krok 3 Wziąć ptyzek o mieszni i porć pewną ilość hoowli z próki otykją jej płskim końem ptyzk. Orientyjnie powinn zostć porn ilość hoowli równowżn w przyliżeniu 1 użej wyrosłej kolonii. Krok 4 Zemulgowć prókę hoowli w kropli lteksu testowego poierją płskim końem ptyzk. Poierć okłnie, le nie zyt mono, y nie uszkozić powierzhni krtonik. Rozprowzić lteks, y pokryć tk użą powierzhnię pol, jk to możliwe. Ołożyć ptyzek o mieszni elem ezpieznego usunięi. Krok 5 Używją ozielnego ptyzk, zemulgowć pooną prókę hoowli w lteksie kontrolnym. Krok 6 Kołysć powoli krtonikiem i oserwowć, 20 sekun zy zhozi glutynj przez 20 sekun, trzymją krtonik w normlnej oległośi ozytu (25 o 35 m) o ozu. Nie używć szkł powiększjąego. Uzyskiwne wzory są wyrźne i możn je z łtwośią rozpoznć we wszystkih normlnyh wrunkh oświetleniowyh. Krok 7 Ołożyć wykorzystny krtonik rekyjny o ezpieznego usunięi. 9 KONTROLA JAKOŚCI Poniższe proeury nleży wykonć n pozątku stosowni kżej otrzymnej przesyłki zestwów testowyh orz l kżej serii próek pownyh niom. W prktye serię możn zefiniowć jko 24-gozinny okres wykonywni testów. Wszelkie ohylenie o wrtośi ozekiwnyh oznz możliwy prolem z ozynnikmi, którego rozwiąznie jest koniezne prze lszym postępowniem z prókmi kliniznymi. KONTROLA WZROKOWA Zwiesiny lteksowe nleży zwsze sprwzć po kątem zijni się (gregji) ząstezek pozs nnoszeni n krtonik testowy, jeśli wiozne są oznki tworzeni się gruek prze oniem nej próki, zrni się używni zwiesiny. Po łuższym okresie przehowywni, w górnej zęśi utelezki może wystąpić ngromzenie lu wysuszenie sustnji. W przypku zoserwowni tkiej sytuji, utelezką nleży energiznie wstrząsć przez kilk sekun, ż o łkowitego ponownego wytworzeni zwiesiny. PROCEDURA KONTROLI DODATNIEJ Rektywność testu możn potwierzić, oją poliwlentną kontrolę otnią o pol rekyjnego, w którym n prók nie oprowził o glutynji lteksu testowego po 3 minuth rotji. Krok 1 Posługują się jenorzowym zkrplzem, 1 kropl oć 1 kroplę otniej kontroli o pol zwierjąego lteks testowy i prókę. Krok 2 Wymieszć przy użyiu ptyzk o mieszni i ołożyć w elu ezpieznego usunięi. Krok 3 Kołysć krtonikiem ręznie lu przy użyiu 3 minuty rottor przez kolejne 3 minuty. Po upływie tego zsu, wyrźn glutynj powinn yć wiozn w lteksie testowym. Krok 4 Ołożyć wykorzystny krtonik rekyjny o ezpieznego usunięi. PROCEDURA KONTROLI UJEMNEJ Jeżeli o njmniej jen n prók w nej serii je wynik ujemny l lteksów testowyh i kontrolnyh, (lu tylko l lteksu testowego, gy nie używno lteksu kontrolnego), stnowi to wżną kontrolę ujemną l ozynników i nie jest koniezne wykonywnie lszyh ń. Jeżeli n prók prowzi o glutynji lteksu testowego, lez nie powouje glutynji lteksu kontrolnego, to nleży przeprowzić kontrolę lteksu testowego opowienio przy użyiu kontroli ujemnej lo niezszzepionej pożywki o posiewu krwi (ptrz poniżej). 3

4 Krok 1 Nnieść 1 kroplę lteksu testowego n jeno 1 kropl pole n krtoniku rekyjnym. Krok 2 Omierzyć 1 kroplę kontroli ujemnej lu 1 kroplę niezszzepionej pożywki o posiewu krwi ook testowego lteksu. Krok 3 Wymieszć przy użyiu ptyzk o mieszni i ołożyć o ezpieznego usunięi. Krok 4 Kołysć krtonikiem ręznie lu przy użyiu 3 minuty rottor przez kolejne 3 minuty. Po upływie tego zsu, nie powinn wystąpić żn znzą glutynj w lteksie testowym. Krok 5 Ołożyć wykorzystny krtonik rekyjny o ezpieznego usunięi. W przypku ń próek płynów ustrojowyh, nleży użyć kontroli ujemnej ostrzonej wrz z zestwem. W przypku ń hoowli z krwi, w hrkterze kontroli ujemnej nleży użyć próki niezszzepionej pożywki o posiewu krwi, pohoząej z tego smego źrół, o prók. Uwg: nie niezszzepionej pożywki jest wżne, poniewż w przypku niektóryh skłów pożywek o posiewów krwi mogą występowć rekje fłszywie otnie. Uwgi: ) Jeśli zhozi tk potrze, w hrkterze kontroli otnih i kontroli ujemnyh możn wykorzystć wześniej zne próki o ozynie opowienio otnim i ujemnym, pozielone n równe ojętośi i przehowywne w temp. 15 o 25 C lu niższej. Kontrol otni może yć również zstosown zmist próki nej. ) W przypku ń ientyfikująyh kolonie (jeynie Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1), ziłnie lteksów testowyh i kontrolnyh możn potwierzić stosują świeże, złożone poprzeniego ni hoowle szzepów oniesieni, zgonie z metoą opisną w zęśi Sposó wykonni testu. Opowienie szzepy oniesieni to: ATCC N. meningitiis z grupy B (rektywność otni) ATCC E. oli typu K1 (rektywność otni) ATCC N. meningitiis z grupy A (rektywność ujemn) ATCC orz ATCC powinny powoowć glutynję lteksu testowego i rk znząej glutynji lteksu kontrolnego; ATCC nie powinien powoowć znząej glutynji lteksu testowego ni kontrolnego. 10 WYNIKI ODCZYTYWANIE WYNIKÓW N rekję pozytywną wskzuje pojwienie się glutynji w iągu 3 minut (20 sekun l testów kolonii) o zmieszni lteksu z ną próką, wykzująej wyrźnie wiozne zlepinie się ząstek lteksu (Rysunek 1). Prękość pojwini się i jkość glutynji uzleżnione są o siły ntygenu - występują rozmite gruki: o użyh pojwijąyh się po kilku sekunh o zmieszni, po młe tworząe się rzej powoli. W przypku ientyfikji hoowli, większość rekji otnih ęzie prwie ntyhmistow. W przypku rekji ujemnej nie ohozi o glutynji lteksu, mlezny wyglą pozostje zsnizo niezmieniony przez ły zs trwni ni (Rysunek 2). Nleży jenk pmiętć, że znikome ilośi gruek mogą yć wykrywlne we wzorh ujemnyh, w zleżnośi o ostrośi wzroku opertor. W przypku ientyfikji hoowli, niektóre szzepy mogą powoowć glutynję lteksu w posti włókienek z mleznym tłem, o nleży interpretowć jko rekję ujemną. UWAGA: Cząstezki lteksowe wykorzystywne w testowyh i kontrolnyh zwiesinh lteksowyh Wellogen TM N. meningitiis B/ E. oli K1 nie są tkie sme jk w innyh ozynnikh i hrkteryzują się roniejszą glutynją. Rysunek 1 Rysunek 2 INTERPRETACJA WYNIKÓW Wynik otni Wyrźn glutynj pojeynzego lteksu testowego, której towrzyszą rekje ujemne l wszystkih innyh ozynników lteksu testowego i lteksu kontrolnego oznz występownie i tożsmość ntygenu kteryjnego w nej próe. Zsą ogólną jest to, że otni wynik l Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1 w próe pohoząej o noworok sugeruje infekję E. oli K1; u strszyh pjentów rziej prwopoon jest infekj meningokokmi z grupy B. Wynik ujemny Ujemne rekje l wszystkih ozynników lteksu testowego oznzją rk możliwego o wykryi poziomu ntygenów kteryjnyh w nym płynie nie wykluz to możliwośi infekji spowoownej przez te orgnizmy i jeżeli ojwy utrzymują się, pożąnym może okzć się wykonnie ni n kolejnyh lu lterntywnyh prókh, ąź po zgęszzeniu próki mozu. W przypku hoowli, rk glutynji w ozynnikh Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1 oznz niskie prwopooieństwo, że jest to N. meningitiis z grupy B lu E. oli K1. Wynik niemożliwy o zinterpretowni Aglutynj więej niż jenego ozynnik lteksu testowego lu opowienih lteksów testowyh i kontrolnyh oznz rekję nieswoistą. W większośi przypków rekje nieswoiste w oniesieniu o płynów ustrojowyh możn wyeliminowć poprzez ogrznie i klrownie próek 4 (ptrz: Przygotownie próek kliniznyh, rozził 8). Jeżeli wystąpi nieswoist rekj l superntntu z hoowli krwi, to nleży ogrzewć prókę we wrząej łźni wonej przez 5 minut, shłozić o tempertury pokojowej (18 o 30 C), wyklrowć przez wirownie i powtórzyć nie. UWAGA: Bni wykonywne ezpośrenio n prókh kliniznyh są przeznzone o elów przesiewowyh i powinny mieć hrkter pomonizy, nie zstępzy woe proeur hoowlnyh. Wyniki muszą yć stosowne w powiązniu z innymi nymi, tkimi jk ojwy, wyniki innyh ń, oserwje klinizne, itp. 11 OGRANICZENIA DZIAłANIA 11.1 W przypku płynów ustrojowyh pohoząyh o noworok (tylko piorkowe grupy B) mogą wystąpić wyniki fłszywie ujemne w przypku próek zwierjąyh poziomy ntygenów poniżej grni wykrywni niniejszego zestwu testowego. Po uzyskniu wyników ujemnyh nleży wykonć selektywną hoowlę ulionową. Wynik otni wskzuje n oeność ntygenu piorkowów grupy B; wynik niekonieznie oznz oeność żywyh orgnizmów W przypku płynów ustrojowyh pohoząyh o noworok (tylko piorkowe grupy B) użyie niniejszego zestwu testowego nie powinno zstępowć hoowli mikroiologiznej. Dziłnie niniejszego zestwu testowego w zkresie przewiywni horó powoownyh przez piorkowe grupy B n postwie ń mozu noworok nie zostło sprwzone Infekje piorkowem grupy B występują głównie u noworoków. Dotnie wyniki uzyskne l próek płynów ustrojowyh pornyh o pjentów w wieku powyżej sześiu miesięy nleży interpretowć ostrożnie. Dotnie wyniki uzyskne l superntntów z hoowli krwi pjentów w owolnym wieku mogą yć znząe Dotni wynik testu uzleżniony jest o oenośi wykrywlnego poziomu ntygenu w płynie ustrojowym lu pożywe o posiewu krwi W zkresie wykrywni ntygenu w mozu lu surowiy przy użyiu Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1 (Tel 6) ostępne są ogrnizone ne klinizne. Nie są ostępne żne ne klinizne otyząe wykrywni ntygenu w mozu przy użyiu Wellogen TM N. meningitiis ACY W135 (Tel 5). Jenkże oeność ntygenu zostł wykryt w prókh mozu ACY W Znnyh jest kilk przykłów kterii niespokrewnionyh, które posiją ntygeny wspólne i, poonie jk w kżym systemie testu immunologiznego, nie możn wykluzyć ewentulnośi wystąpieni rekji krzyżowyh w teśie lteksowym 1,3,8,9. 4

5 12 WYNIKI OCZEKIWANE Próki zwierjąe wykrywlne poziomy ntygenu piorkow z grupy B, ntygenu H. influenze typu, ntygenu otozkowego S. pneumonie, ntygenów N. meningitiis A, C, Y, W135 lu ntygenu N. meningitiis B / E. oli K1 wywołją rekję glutynji z opowienim lteksem testowym. 13 CHARAKTERYSTYKA DZIAłANIA 13.1 Płyny ustrojowe i posiewy krwi Bni klinizne przeprowzono w 15 entrh z użyiem próek płynów ustrojowyh (świeżyh i przehowywnyh w posti zmrożonej) orz superntntów z hoowli krwi. W nih n posiewmi krwi wykorzystno zrówno tryyjne, jk i riometryzne tehniki hoowlne. Przehowywne próki płynów ustrojowyh nie yły powne oróe termiznej zgonie z opisem w zęśi Przygotownie próek kliniznyh, rozził 8. Oszerne ni lortoryjne wykzły rk znznej utrty ntygenu po ogrzniu z wykorzystniem tej proeury. kżego lteksu w zestwie zostł ustlon n postwie ń n prókh jąyh otni wynik hoowli l orgnizmu homologiznego lu l któryh istniły inne owoy infekji (rozpoznnie klinizne plus otni wynik innego testu ntygenowego). Tele o 2 o 6 poją lizy kżego typu próek przenyh inywiulnymi preprtmi lteksowymi wrz z lizą uzysknyh wyników otnih. kżego lteksu w wykrywniu ntygenów kteryjnyh w płynie mózgowo-rzeniowym wynosił 67% (12/18) l Wellogen TM Strep B, 97% (87/90) l Wellogen TM H. influenze, 88% (45/51) for Wellogen TM S. pneumonie, 71% (29/41) l Wellogen TM N. meningitiis ACY W135 orz 65% (11/17) l Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1. kżego z ozynników Wellogen TM oszowno wykorzystują próki płynu ustrojowego (świeże i zmrożone) orz próki z hoowli krwi pohoząe o pjentów z kteryjnym lu septyznym zpleniem opon mózgowyh i innymi nieskojrzonymi stnmi. Z zinfekownej próki wyizolowno nstępująe orgnizmy: H. influenze, S. pneumonie, N. meningitiis włąznie z grupmi A, B, C, Y, E. oli, Stphyloous ureus, Enteroter erogenes, Klesiell pneumonie, Myoterium tuerulosis, Proteus mirilis, Stphyloous epiermiis, lf-hemolizująy piorkowie, et-hemolizująy piorkowie z grupy A, Klesiell oxyto, Pseuomons, Streptoous snguis, Toxoplsm gonii orz kterie z grupy oli. wszystkih pięiu lteksów Wellogen TM w nih n płynie mózgowo-rzeniowym ył wyższ o 98%. Szzegółowe ne otyząe lizy przenyh próek orz speyfiznośi kżego testu Wellogen TM l kżego typu próki pono w telh o 2 o Posiewy płytkowe (N. meningitiis B/E. oli K1). Hoowle N. meningitiis orz E. oli prowzone n wzogonej pożywe growej zostły przene w lortorih szpitlnyh orz w wewnętrznyh lortorih firmy. Wszystkie hoowle N. meningitiis z grupy B orz E. oli K1 zostły prwiłowo zientyfikowne. Nie wystąpiły żne rekje krzyżowe z innymi grupmi N. meningitiis lu innymi ntygenmi E. oli K (Tel 7). Duż zęść hoowli E. oli z innymi ntygenmi K, które pono niom, ł rekje nieswoiste (Tel 7). Tel 1 Próki, które zno przy użyiu inywiulnyh ozynników lteksowyh Wellogen TM Prók Wellogen TM N. meningitiis N. meningitiis B/ Strep. B H. influenze S. pneumonie ACY W135 E. oli K Surowi * Moz * +* Posiew krwi Kolonie kteryjne + Ojśnieni + Dostępne ne wspierjąe niniejsze zstosowni. +* Dostępne ogrnizone ne. Brk ostępnyh nyh. Tel 2 Wyniki ń kliniznyh n Wellogen TM Strep B Prók Liz Liz Liz Liz przenyh otnih przenyh otnih Surowi Moz Posiew krwi e et-hemolizująy piorkowie z grupy B wyizolowny/wykryty (ignoz klinizn / inny test ntygenowy). kterie inne niż piorkowe. B/rk wzrostu. E. oli wyizolowne. P. mirilis wyizolowne. e Stph. epiermiis; et-hemolizująy strep. z grupy A; E. oli + Enteroous; Stph. epiermiis + Enteroous wyizolowne. Tel 3 Wyniki ń kliniznyh n Wellogen TM H. influenze Prók Liz Liz Liz Liz przenyh otnih przenyh otnih Surowi Moz Posiew krwi Jen otkow prók płynu mózgowo-rzeniowego ł rekję nieswoistą. Jen prók septyzn; E. oli wyizolowne z innej próki. Dw otkowe superntnty z hoowli krwi ły rekje nieswoiste. Jen prók septyzn. Wzrost w pozostłyh prókh: Stph. ureus; E. oli + Stph. epiermiis; K. oxyto; lf-hemolizująy piorkowie. Tel 4 Wyniki ń kliniznyh n Wellogen TM S. pneumonie Prók Liz Liz Liz Liz przenyh otnih przenyh otnih Surowi Moz Posiew krwi Jen otkow prók płynu mózgowo-rzeniowego ł rekję nieswoistą. Enteroter erogenes; kterie z grupy oli. Trzy otkowe próki mozu ły rekje nieswoiste. Pseuomons; Strep. snguis; Stph. epiermiis + Enteroous; Strep. virins wyizolowne z 4 próek. 5

6 Tel 5 Wyniki ń kliniznyh n Wellogen TM N. meningitiis ACY W135 Prók Liz Liz Liz Liz przenyh otnih przenyh otnih Surowi Moz Posiew krwi Oejmuje 8 z grupy A, 25 z grupy C i 1 z grupy Y (pozostłe nie pogrupowne). K. erogenes; E. oli. Pięć otkowyh próek mozu ło rekje nieswoiste. Strep. snguis; Stph. epiermiis + Enteroous. Tel 6 Wyniki ń kliniznyh n Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1 Prók Liz Liz Liz Liz przenyh otnih przenyh otnih N. meningitiis B E. oli K Surowi: N. meningitiis B Moz: N. meningitiis B Posiew krwi: N. meningitiis B Próki przehowywne w posti zmrożonej. Wszystkie inne próki ne jko świeże. Hoowle tlenowe i eztlenowe (et-hemolizująy strep A) l tego smego pjent; gronkowie kogulzo-ujemny. Tel 7 Ientyfikj hoowli przy użyiu Wellogen TM N. meningitiis B/E. oli K1 Kultur + N. meningitiis grup A 0 16 N. meningitiis grup B 10 0 N. meningitiis grup C 0 18 N. meningitiis grup 29E 0 8 N. meningitiis grup W N. meningitiis grup X 0 4 N. meningitiis grup Y 0 5 N. meningitiis grup Z 0 3 E. oli K1 7 0 E. oli inne ntygeny 0 13 Hoowle ientyfikowne poprzez glutynję szkiełkową. 10 otkowyh hoowli ło rekje nieswoiste. 4 Doskeln, S.O. n Berl, B.P. (1980). Bteril ntigen etetion in oy fluis: methos for rpi ntigen onentrtion n reution of nonspeifi retions. J. Clin. Miroiol., 11, Feigin, R.D., Wong, M., et l (1976). Counterurrent immunoeletrophoresis of urine s well s of CSF n loo for ignosis of teril meningitis. J. Peitr., 89, Klor, J., Asznowiz, R., et l (1977). Ltex gglutintion in ignosis of teril infetions, with speil referene to ptients with meningitis n septiemi. Amer. J. Clin. Pth., 68, Ksper, D.L., Winkelhke, J.L., et l (1973). Immunohemil similrity etween polyshrie ntigens of Esherihi oli 07:K1(L):NM n group B Neisseri meningitiis. J. Immunol., 110, Lee, C.J. n Koizumi, K. (1981). Immunohemil reltions etween pneumool group 19 n Klesiell psulr polyshries. J. Immunol., 127, Roins, J.B., Myerowitz, R.L., et l (1972). Enteri teri ross-retive with Neisseri meningitiis groups A n C n Diploous pneumonie types I n III. Infet. Immun., 6, Whittle, H.C., Tugwell, P., et l (1974). Rpi teriologil ignosis of pyogeni meningitis y ltex gglutintion. Lnet, ii, 619. Broniox jest zrejestrowną nzwą fryzną Cognis UK Lt. Minion jest znkiem towrowym Millipore Corportion. Prouent: Remel Europe Lt Clipper Boulevr West, Crosswys Drtfor, Kent, DA2 6PT UK Wyproukowno l: Oxoi Lt We Ro Bsingstoke, Hnts, RG24 8PW UK Ay uzyskć pomo tehnizną, prosimy skontktowć się z loklnym ystryutorem. IFU X7713-PL, Poprwiono 3 mj 2011 Wyrukowno w Wielkiej Brytnii 14 PIŚMIENNICTWO 1 Argmn, M., Liu, T.Y., et l (1974). Polyriitol-phosphte: n ntigen of four grm-positive teri rossretive with the psulr polyshrie of Hemophilus influenze type. J. Immunol., 112, Bker, C.J. n Renh, M.A. (1983). Commeril ltex gglutintion for etetion of group B streptool ntigen in oy fluis. J. Peitr., 102, Bovre, K., Bryn, K., et l (1983). Surfe polyshrie of Morxell non-liquefiens ientil to Neisseri meningitiis group B psulr polyshrie. Bni hemizne i immunologizne NIPH Annls, 6, 65. 6